检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2014年第4期36卷 420-425页

作者：杨根欢吴为李砚川倪冷王占启宋希涛刘昌伟中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Weste... 详细信息

目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测HO-1的表达。将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒。用携带HO-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测HO-1的表达。将过氧化氢加入正常的及过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量。结果成功筛选出能稳定表达HO-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其HO-1的表达明显升高。加入过氧化氢后,过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少。结论成功构建了能稳定表达人HO-1的细胞系,内源性过表达HO-1能够对抗细胞的氧化损伤。

关键词：血红素加氧酶-1 慢病毒稳定细胞株氧化损伤

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小鼠皮质神经祖细胞分化过程中Twist1的功能

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 757-761页

作者：付红烨阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的检测Twist1在小鼠大脑皮质发育过程不同时间点的表达模式,并对其基因功能进行初步研究。方法在小鼠皮质组织切片中,用原位杂交检测Twist1基因的表达;构建基因的过表达克隆,在小鼠胚胎中在体转染神经祖细胞,检测神经祖细胞的分化情... 详细信息

目的检测Twist1在小鼠大脑皮质发育过程不同时间点的表达模式,并对其基因功能进行初步研究。方法在小鼠皮质组织切片中,用原位杂交检测Twist1基因的表达;构建基因的过表达克隆,在小鼠胚胎中在体转染神经祖细胞,检测神经祖细胞的分化情况。结果在选取大脑皮质发育的4个时间点Twist1均有表达,表达部位以室管膜区为主,过表达Twist1后室管膜区的细胞明显减少(P<0.01),中间前体细胞增多(P<0.05)。结论 Twist1在小鼠大脑皮质发育过程中有表达,且在祖细胞表达量较高,Twist1可以促进神经祖细胞分化及迁移。

关键词： Twist1 神经祖细胞分化

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利用流式细胞术检测LPS刺激活化后小鼠腹腔巨噬细胞体积的变化

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 767-770页

作者：刘音刘硕王文蝶朱军陈朱波姜明红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨小鼠腹腔巨噬细胞经脂多糖(LPS)刺激活化后体积的变化。方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞3和24 h后,用倒置显微镜观察细胞的形态,用ELISA法检测细胞上清中IL-6的含量,用流式细胞术定量检测细胞活化后的体积。结果小鼠腹腔巨噬细胞... 详细信息

目的探讨小鼠腹腔巨噬细胞经脂多糖(LPS)刺激活化后体积的变化。方法 LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞3和24 h后,用倒置显微镜观察细胞的形态,用ELISA法检测细胞上清中IL-6的含量,用流式细胞术定量检测细胞活化后的体积。结果小鼠腹腔巨噬细胞在正常状态下呈圆型,细胞边缘光滑无伪足,胞质内无空泡。经LPS刺激3 h后,小鼠腹腔巨噬细胞的表面积变大,伸出伪足,伪足的数量和长度随时间延长而逐渐增多和增长,胞质内的空泡也逐渐增加;24 h后,细胞表面积明显增大,伪足牵拉使细胞形状呈梭型。LPS处理后细胞上清中IL-6的含量较对照组显著增加(P<0.01)。流式细胞术检测发现细胞的前向角散射光(FSC)的数值(代表细胞大小)随LPS刺激时间的延长而增加,3和24 h分别增加了11.0%(P<0.05)和20.2%(P<0.01);侧向角散射光(SSC)的数值(代表表面颗粒数)也逐渐增加,3和24 h分别增加了21.6%(P<0.05)和68.0%(P<0.01)。结论流式细胞术可以定量检测小鼠腹腔巨噬细胞经LPS活化后的体积变化,为天然免疫细胞的活化研究提供了新的检测手段。

关键词： LPS 巨噬细胞活化流式细胞术

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利用RIP-Chip筛选结合多聚胞嘧啶结合蛋白2的microRNAs

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 834-839页

作者：韩为林细华阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术(RIP-Chip)在人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞(T98G和U87MG)中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA)。方法选择兔抗人PCBP2抗体,用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA... 详细信息

目的通过核糖核蛋白免疫沉淀-芯片技术(RIP-Chip)在人正常神经胶质细胞(HA)和神经胶质瘤细胞(T98G和U87MG)中筛选与多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)相互作用的microRNA(miRNA)。方法选择兔抗人PCBP2抗体,用Western blot法检测PCBP2蛋白在HA、T98G和U87MG细胞中的表达。用兔Ig G作为阴性对照,收集3种细胞的RIP蛋白和RNA样品,通过Western blot检测PCBP2蛋白富集效果,利用Nano Drop定量并经Agilent2100检测RNA完整性。选择Affymetrix miRNA 3.0芯片对RNA样品进行杂交,筛选富集4倍以上且P<0.05的miRNA。结果用PCBP2抗体进行RIP-Chip实验,最终筛选和PCBP2相互作用的103条miRNA,1条前体miRNA和1条核仁小分子RNA;其中15条存在PCBP2的结合位点。结论 PCBP2可以通过识别靶序列或者以核糖核蛋白复合物形式在细胞内结合成熟的miRNA、前体miRNA或核仁小分子RNA。

关键词： PCBP2 microRNA RIP-Chip 神经胶质瘤

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SUN结构域家族蛋白研究进展

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中国细胞生物学学报 2014年第10期36卷 1413-1421页

作者：沙志强许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

SUN(Sad-1,UNC-84)结构域家族蛋白是一种广泛分布于酵母、线虫等真核生物的膜蛋白,主要定位于细胞核膜以及内质网。由于在酵母中发现Sad-1突变后的表型与线虫中UNC-84突变的表型一致,并且两者C-端有近一半的同源相似性,因此得名SUN结构... 详细信息

SUN(Sad-1,UNC-84)结构域家族蛋白是一种广泛分布于酵母、线虫等真核生物的膜蛋白,主要定位于细胞核膜以及内质网。由于在酵母中发现Sad-1突变后的表型与线虫中UNC-84突变的表型一致,并且两者C-端有近一半的同源相似性,因此得名SUN结构域,其家族成员也都具有SUN结构域。根据SUN结构域所在家族成员中蛋白质一级序列位置的不同,分为经典及非经典家族蛋白,经典的家族蛋白一般通过与KASH(Klarsicht、ANC-1、Syne homology)蛋白相互作用行使功能。越来越多的研究结果表明,SUN蛋白可能参与核膜锚定、核膜重塑、细胞迁移和DNA损伤修复等过程,其形成的复合体与人类进行性肌营养不良等疾病的发生发展也有紧密联系。该文就SUN家族各成员蛋白的结构特性以及功能特点的研究进展进行简要综述。

关键词： SUN结构域核膜锚定细胞迁移进行性肌营养不良

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小RNA干扰PCBP2在神经胶质瘤细胞中对P53相关基因的调节和对细胞增殖的影响

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 776-781页

作者：韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP... 详细信息

目的探索多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)表达下调对相关基因和胶质瘤细胞增殖的影响。方法 3株神经胶质瘤细胞系(T98G、U87MG和U251)各分为2组,分别转入特异性靶向PCBP2基因的小干扰RNA(siRNA)和对照siRNA,用Western blot法检测siRNA对PCBP2蛋白的抑制效果及对P53蛋白和它的两个靶基因PUMA和BAX的表达影响,同时检测P53共调节因子FHL2和同家族成员FHL1表达变化。用生物素pull-down分析PCBP2是否和FHL家族成员mRNA结合。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)掺入法检测细胞增殖能力,Hoechst染色观察细胞凋亡率。结果 PCBP2 siRNA转染这3株细胞后使PCBP2蛋白表达水平明显下调(P<0.05);增加P53及它的靶基因PUMA和BAX的蛋白表达(P<0.05);抑制FHL2蛋白(P<0.05),但并不结合其mRNA的3'非编码区(3'UTR);Brd U阳性细胞减少(P<0.05);Hoechst染色阳性细胞增多(P<0.05)。结论抑制PCBP2表达可以增强胶质瘤细胞中P53通路活性,并减弱细胞增殖能力,诱导细胞凋亡。

关键词： RNA干扰多聚胞嘧啶结合蛋白2 P53 细胞增殖细胞凋亡

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神经干细胞定向分化过程中编码基因表达谱分析

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 734-739页

作者：张靖朱丽媛阴彬侯琳彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院神经科学中心北京100005

目的探索小鼠神经干细胞定向分化为神经元及胶质细胞过程中重要发育基因的表达变化。方法 1)神经干细胞培养及定向分化诱导培养;2)分化神经元、星形胶质细胞的流式分选;3)针对编码基因表达谱芯片的生物信息学分析,包括基因功能聚类、通... 详细信息

目的探索小鼠神经干细胞定向分化为神经元及胶质细胞过程中重要发育基因的表达变化。方法 1)神经干细胞培养及定向分化诱导培养;2)分化神经元、星形胶质细胞的流式分选;3)针对编码基因表达谱芯片的生物信息学分析,包括基因功能聚类、通路分析等。结果 1)经细胞分选获得神经干细胞、神经元、星形胶质细胞;2)Sox2、Nestin等神经干细胞、神经元及星形胶质细胞的标志性基因表达谱式明显;3)Wnt通路、Insulin通路、P53通路活性的改变在定向分化细胞类群中存在细胞特异性。结论神经干细胞的分化过程是一个多基因通路综合变化的复杂网络。

关键词：神经干细胞定向分化 Wnt通路 insulin通路 P53通路

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6硝酸纤维膜和丙酮沉淀尿蛋白质保存方法的比较

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生物工程学报 2014年第6期30卷 982-989页

作者：王小蓉李逊斗贾露露高友鹤中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医科大学基础医学院生理与病理生理学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同... 详细信息

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同方法的差别.结果显示硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法鉴定蛋白质数目几乎相同,鉴定蛋白质在谱图数的分布上几乎相同,鉴定蛋白质在蛋白质变异系数的分布上也几乎相同.因此,硝酸纤维膜法处理尿蛋白质与丙酮沉淀法基本一致,可以应用于大规模临床尿液样本的保存.

关键词：尿蛋白质保存硝酸纤维素膜蛋白质组学生物样本保存

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自然反义转录物Lmo4as对神经系统重要编码基因Lmo4的调节作用

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基础医学与临床 2014年第6期34卷 819-823页

作者：张靖吴朝朱丽媛阴彬侯琳彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院神经科学中心北京100005

目的探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能。方法 1)使用c DNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(poly A)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量... 详细信息

目的探索小鼠神经系统重要编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对该编码基因的表达调控功能。方法 1)使用c DNA末端快速扩增(RACE)与RT-PCR技术,验证Lmo4as是否具有多聚腺苷酸(poly A)尾,克隆Lmo4as的全长序列;2)使用实时定量PCR和原位杂交技术确定Lmo4as及相应编码基因的时空表达谱;3)使用荧光素酶报告基因实验在体外验证Lmo4as对Lmo4是否具有调控作用。结果 1)Lmo4as是一个具有多聚腺苷酸(poly A)尾的非编码RNA转录本,获得其RNA全长信息;2)Lmo4as与相应编码基因转录Lmo4的丰度在时间上具有协同性,而在空间表达上具有明显不同的分布;3)Lmo4as对Lmo4在转录后水平具有负性调节作用,另外miR-124也能够抑制Lmo4的表达。结论编码基因Lmo4基因座位上自然反义转录产物Lmo4as对其转录后水平的负性调节与microRNA的调节共同发挥作用。

关键词：小鼠大脑发育 Lmo4 自然反义转录物原位杂交转录后调控

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新疆哈萨克族人弗林蛋白Furin基因变异与高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的相关性

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中国医学科学院学报 2014年第2期36卷 168-175页

作者：王红梅李南方洪静罗文利严治涛王新玲朱沂沈岩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院博士后流动站北京100005 新疆维吾尔自治区人民医院博士后工作站乌鲁木齐830001 新疆维吾尔自治区人民医院高血压科乌鲁木齐830001 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白(Furin)基因变异的相关性。方法本研究是以横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,878例研究对象均来自新疆哈萨克族自然人群。测定48例随机选择的哈萨克... 详细信息

目的研究新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白(Furin)基因变异的相关性。方法本研究是以横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,878例研究对象均来自新疆哈萨克族自然人群。测定48例随机选择的哈萨克族高胆固醇血症患者(女性24例、男性24例)弗林蛋白基因启动子、外显子区序列,筛查代表性变异。采用TaqMan PCR分析弗林蛋白基因变异在878例哈萨克族自然人群(男性370例、女性508例)中的分型,分析其与哈萨克族人血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平的相关性。结果在48例高胆固醇血症患者中,共筛查出弗林蛋白基因的12个变异,包括4个代表性变异(rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178)。4个代表性变异均在大样本哈萨克族人中基因型分型成功(成功率≥99%)。在哈萨克族自然人群中,rs6226、rs6227、rs2071410、rs4932178多态性的基因型、等位基因、单体型频率分别在高胆固醇血症组、对照组间及高低密度脂蛋白胆固醇血症组、对照组间的分布差异均无统计学意义(P均>0.05);每个多态性的不同基因型携带者之间的血总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇平均水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论新疆哈萨克族人高总胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症与弗林蛋白基因变异不相关,该变异可能不是哈萨克族人高胆固醇血症、高低密度脂蛋白胆固醇血症的易感因素。

关键词：弗林蛋白基因高胆固醇血症高低密度脂蛋白胆固醇血症哈萨克族基因变异

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