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全国医药生物技术2010年学术研讨会暨全军第十届生物技术学术研讨会

作者：李一叶李涛路金芝陈伟京王欣肖卫纯卢圣栋医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院

颗粒酶B(Granzyme B,GrB)虽然是CTL和NK细胞等发挥清除感染病原体和恶性转化细胞等免疫功能的主要效应分子,且具有从多种途径来诱导细胞发生caspase依赖和非依赖凋亡的能力,但因缺乏受体,它通常须在穿孔素的协助下才能发挥作用. 促... 详细信息

颗粒酶B(Granzyme B,GrB)虽然是CTL和NK细胞等发挥清除感染病原体和恶性转化细胞等免疫功能的主要效应分子,且具有从多种途径来诱导细胞发生caspase依赖和非依赖凋亡的能力,但因缺乏受体,它通常须在穿孔素的协助下才能发挥作用. 促性腺激素释放激素(GnRH)的受体(GnRHR)在多数源于性激素应答器官的肿瘤和部分源于非性激素应答器官的肿瘤中都有高表达,而在正常情况下该受体则主要局限于受下丘脑一垂体一性腺轴调节的组织,因此,该受体是一种理想的靶向抗肿瘤药物的攻击靶点.

关键词：颗粒酶B 靶向构建抗肿瘤活性

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基因工程包涵体中活性蛋白质的非变性萃取

基因工程包涵体中活性蛋白质的非变性萃取

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全国医药生物技术2010年学术研讨会暨全军第十届生物技术学术研讨会

作者：王欣路金芝陈伟京李涛卢圣栋医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院

肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种多效性细胞因子,具有多种生物学活性,包括细胞毒活性和促进T细胞生长活性.本研究中XE-TNFαm是一种TNFα突变衍生物,即XE27dN7TNFα.天然的TNFα是一种含有157个氨基酸的非糖基化蛋白,热稳定性好,是相对分... 详细信息

肿瘤坏死因子α(TNFα)是一种多效性细胞因子,具有多种生物学活性,包括细胞毒活性和促进T细胞生长活性.本研究中XE-TNFαm是一种TNFα突变衍生物,即XE27dN7TNFα.天然的TNFα是一种含有157个氨基酸的非糖基化蛋白,热稳定性好,是相对分子量为34~40 kDa的紧密三体,三体分子是其活性形式.

关键词：基因工程包涵体活性蛋白质非变性萃取

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异源毒素蛋白质治疗白血病的新策略

异源毒素蛋白质治疗白血病的新策略

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全国医药生物技术2010年学术研讨会暨全军第十届生物技术学术研讨会

作者：王湛李涛路金芝陈伟京王欣肖卫纯卢圣栋医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院

本研究旨在探索一条新的途径,以运用人体异源毒素蛋白质靶向杀灭白血病细胞,避免其免疫原性,且使毒副作用最小化. 虽然源于动物、植物和微生物的具有抗肿瘤活性的蛋白质或多肽毒素有千种之多,且人们一直在采用基因工程等方法来研制... 详细信息

本研究旨在探索一条新的途径,以运用人体异源毒素蛋白质靶向杀灭白血病细胞,避免其免疫原性,且使毒副作用最小化. 虽然源于动物、植物和微生物的具有抗肿瘤活性的蛋白质或多肽毒素有千种之多,且人们一直在采用基因工程等方法来研制以这类毒素作为效应域的靶向融合蛋白,如由绿脓杆菌毒素PE或商陆毒素PAP等作为效应域,以TGF、IL-2或GnRH等作为靶向域的TGF-PE40、IL-2-PE40和GnRH-PAP等,但这类靶向融合蛋白至今未能成功用于临床.究其原因,主要在于这些异源毒素对于人体来说都具有极强的免疫原性,所致高水平的中和抗体一会使药物在重复使用时失效,二会导致病人发生过敏反应、甚至休克与死亡,且对肝脏或其他器官有严重的毒副作用.

关键词：异源毒素蛋白质白血病

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人TSLC1基因核心启动子的克隆和鉴定

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基础医学与临床 2010年第4期30卷 406-410页

作者：高静申林明树红北京大学临床肿瘤学院北京肿瘤医院北京市肿瘤防治研究所消化肿瘤内科恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室北京100142 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 卫生部北京医院呼吸科北京100730

目的克隆和鉴定人TSLC1基因的核心启动子区,用于开展其转录调控机制的研究。方法用PCR方法从人基因组DNA中扩增出TSLC1基因翻译起始位点上游一系列大小不等的片段,连入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染A549及NCI-H446细... 详细信息

目的克隆和鉴定人TSLC1基因的核心启动子区,用于开展其转录调控机制的研究。方法用PCR方法从人基因组DNA中扩增出TSLC1基因翻译起始位点上游一系列大小不等的片段,连入pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体中。通过瞬时转染A549及NCI-H446细胞,检测细胞裂解液中的双荧光素酶活性,确定TSLC1基因的核心启动子区。结果在人TSLC1基因启动子区的分段克隆中,ATG上游-68～-329 bp片段在A549及NCI-H446细胞中均具有很强的启动活性,对TSLC1的转录起重要作用。结论人TSLC1基因翻译起始位点ATG上游-68～-329 bp区域可能为基因的核心启动子区。

关键词： TSLC1 核心启动子克隆鉴定

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胸苷酸合成酶基因多态性与肿瘤化疗敏感性的关系

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中华内分泌外科杂志 2010年第5期4卷 338-340页

作者：张强廖泉赵玉沛中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院外科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100730

胸苷酸合成酶（thymidylate synthase,TS）在嘧啶代谢中发挥重要作用,是DNA合成的关键酶.它能与甲基辅基将一磷酸脱氧尿苷（deoxy uridine monophosphate, dUMP）甲基化成脱氧胸苷三磷酸（deoxythymidine triphosphated,dTMP）作为嘧啶的类似物,5-FU代谢物氟脲嘧啶脱氧核苷酸（5-fluoro-2-deoxyuridylate,FdUMP）与TS及甲基辅基形成三聚物,阻断dTMP形成,

关键词：胸苷酸合成酶酶基因多态性化疗敏感性肿瘤氟脲嘧啶 DNA合成脱氧核苷酸脱氧尿苷

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利用基因敲除小鼠研究MRG在皮肤肿瘤发生发展中的功能

利用基因敲除小鼠研究MRG在皮肤肿瘤发生发展中的功能

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中国遗传学会模式生物与人类健康研讨会

作者：金香兰程禾贾春实张勇高翔陈杰朱大海医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所北京协和医科大学基础学院中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理科南京大学模式动物研究所

前期相关工作表明,MRG(Myostatin Related Gene)作为TGF-β超家族Myostatin的下游靶基因,在Myostatin处理的鸡原代成肌细胞中表达上调;Myostatin是成肌细胞增殖和分化的负调控因子,而MRG的功能目前知之甚少,在细胞中过表达MRG可以抑制... 详细信息

前期相关工作表明,MRG(Myostatin Related Gene)作为TGF-β超家族Myostatin的下游靶基因,在Myostatin处理的鸡原代成肌细胞中表达上调;Myostatin是成肌细胞增殖和分化的负调控因子,而MRG的功能目前知之甚少,在细胞中过表达MRG可以抑制肌细胞和几种其它非肌细胞包括癌细胞的增殖过

关键词：肿瘤发生发展 MRG 基因敲除小鼠

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神经黏附分子NECL1抑制神经胶质瘤细胞的迁移、侵袭并诱导其分化

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 669-673,795-796页

作者：阴彬陈涛高静袁建刚彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。方法在U251胶质瘤细胞系中,通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响,通过对细胞外金属蛋白酶活... 详细信息

目的在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响。方法在U251胶质瘤细胞系中,通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响,通过对细胞外金属蛋白酶活性的检测证明NECL1恢复表达后对肿瘤侵袭能力的影响。利用不同培养密度的U251细胞,对NECL1恢复表达后细胞形态进行观察,并通过Western blot实验验证相关蛋白的表达。结果在NECL1表达缺失的胶质瘤细胞系U251中,恢复NECL1的表达后,肿瘤细胞的迁移及侵袭受到了抑制。NECL1恢复表达的U251细胞有向星形胶质细胞分化的趋势,星形胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白的表达上调。结论神经黏附分子NECL1作为一个潜在的胶质瘤抑制因子,对肿瘤细胞的迁移和侵袭能力均有不同程度抑制作用,同时,NECL1具有诱导神经胶质瘤U251细胞向星形胶质细胞方向分化的潜能。

关键词：神经胶质瘤细胞系U251 NECL1 转移侵袭星形胶质细胞

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Dok 6促进神经营养因子3诱导的过表达原肌球蛋白相关激酶C的PC12细胞突起生长

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 751-755,802页

作者：李玮琦尤元刚阴彬彭小忠中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行... 详细信息

目的探讨胞浆接头蛋白Dok6对PC12细胞突起生长的影响。方法将Dok6的不同功能模体片段构建至TrkC/Y516F突变体中形成融合克隆。利用Western blot法验证各个融合克隆在细胞内是否稳定表达。利用瞬时转染的方法将融合克隆导入PC12细胞进行过表达,之后用NT-3刺激PC12细胞突起生长,检测不同Dok6片段的效应。结果各个融合克隆均能在细胞内稳定表达。融合了Dok6 PTB结构域+C末端以及单纯C末端的融合克隆均可以挽救由于TrkC受体516位酪氨酸突变导致的PC12细胞突起生长减少,而融合单纯的Dok6 PTB结构域则无此效应。结论Dok6可以促进NT-3诱导的过表达TrkC的PC12细胞突起生长,并且此效应与其C末端密切相关。

关键词： Dok6 PC12细胞神经营养因子3 突起生长融合克隆

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亚硒酸钠诱导NB4细胞中细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ的下调机制

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 686-691页

作者：李竹石杨洋许彩民中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ(COX Ⅳ)表达的变化情况及其机制和意义。方法用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX Ⅳ蛋白和mRNA表达的变化。活性氧清除剂预处理... 详细信息

目的探讨亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡的过程中,细胞色素c氧化酶亚基Ⅳ(COX Ⅳ)表达的变化情况及其机制和意义。方法用20μmol/L亚硒酸钠作用NB4细胞不同时间,Western blot和RT-PCR分别检测COX Ⅳ蛋白和mRNA表达的变化。活性氧清除剂预处理细胞后Western blot检测COX Ⅳ蛋白表达的变化以及caspase-3的激活。caspase-3抑制剂预处理细胞后Western blot检测COX Ⅳ蛋白表达的变化。瞬时转染干扰NB4细胞中COX Ⅳ表达后,流式细胞术检测细胞凋亡。结果亚硒酸钠诱导NB4细胞COX Ⅳ蛋白表达显著下调,但mRNA表达水平无变化。活性氧清除剂能完全逆转亚硒酸钠引起的COX Ⅳ表达下调与caspase-3激活。caspase-3抑制剂能部分逆转亚硒酸钠引起的COX Ⅳ表达下调。干扰COX Ⅳ表达后,亚硒酸钠诱导的细胞凋亡显著增加。结论在亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡过程中,COX Ⅳ在蛋白水平显著下调。活性氧介导COX Ⅳ下调与caspase-3激活,caspase-3在一定程度上参与COX Ⅳ表达下调,抑制COX Ⅳ能显著提高NB4细胞对亚硒酸钠诱导凋亡的敏感性。

关键词：凋亡细胞色素c氧化酶活性氧

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胰岛素样生长因子结合蛋白-6的核定位

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 735-739,801页

作者：韩建军黄秉仁王欣马晓骊陈虹中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿... 详细信息

目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的分布,并计算这些转染阳性细胞中绿色荧光强度的核质比(Fn/c)。结果激光扫描共聚焦显微镜观察显示,野生型IGFBP-6绿色荧光信号在细胞核内聚集分布,与转染EGFP空载体的对照组相比,Fn/c差异具有显著性(P<0.05)。过表达pEGFP-C1-BP6ΔNLS的细胞中,绿色荧光信号在细胞核内聚集的现象消失,在整个细胞呈均匀分布;过表达pEGFP-C1-BP6-Mut的细胞中,细胞核内绿色荧光信号也有所减弱;两者的Fn/c与转染野生型IGFBP-6的细胞相比差异均具有显著性(P<0.05)。结论IGFBP-6可以定位于细胞核内,它在细胞核内的分布与其核定位序列相关,为进一步研究IGFBP-6不依赖于胰岛素样生长因子的生物学活性提供了新的实验依据。

关键词：胰岛素样生长因子结合蛋白-6 核定位核定位顺序非胰岛素样生长因子依赖的生物学活性

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