检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 692-695页

作者：戴津泼张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定... 详细信息

目的构建小鼠组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7真核表达载体并初步探讨其对神经细胞分化的影响。方法采用基因工程技术,克隆小鼠Setd7基因并将其插入真核表达载体pCMV-3tag-6中,之后转染HEK293T细胞,West-ern blot验证其表达;利用实时荧光定量PCR技术检测在神经分化模型(全反式维甲酸诱导P19神经分化)中,Setd7对神经分化关键基因Ngn1的调控;利用双荧光素酶报告系统检测Setd7对Ngn1启动子活性的影响;构建小鼠Setd7siRNA干扰质粒,利用实时荧光定量PCR技术检测其抑制效果以及对Ngn1mRNA表达的影响。结果成功构建了小鼠Setd7基因的真核表达载体,可在HEK293T细胞中有效表达;Setd7可促进Ngn1mRNA表达;Setd7能够促进Ngn1启动子活性;降低Setd7抑制Ngn1mRNA表达。结论组蛋白赖氨酸甲基转移酶Setd7能够促进神经分化关键基因Ngn1的转录。

关键词： Setd7 神经分化 Ngn1

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PIH1D1对染色质重塑复合物SNF5亚基降解的影响

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 756-759页

作者：翟妞张业沈珝琲中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;... 详细信息

目的探讨PIH1D1对其结合蛋白SNF5的稳定性的影响。方法通过蛋白合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)和蛋白酶体抑制剂MG132抑制作用找到SNF5的降解路径,而后转染PIH1D1真核表达质粒,探讨其对SNF5稳定性的影响。结果得到CHX和MG132的最佳作用浓度;SNF5通过蛋白酶体依赖的途径降解;PIH1D1抑制SNF5的降解,从而稳定SNF5。结论PIH1D1可能通过阻断蛋白酶体依赖途径,抑制SWI/SNF染色质重塑复合物SNF5亚基的降解,从而起到稳定SNF5的作用。

关键词： SWI/SNF染色质重塑复合物 SNF5 PIH1D1 蛋白酶体依赖降解

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NSPc1是维持HeLa细胞正常增殖的必要因子

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基础医学与临床 2009年第5期29卷 453-458页

作者：胡光宇吴旭东彭小忠龚燕华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPE... 详细信息

目的研究多梳蛋白家族成员NSPc1对HeLa细胞增殖的影响。方法运用生物信息学设计并合成敲低NSPc1表达的siRNA序列,用半定量RT-PCR、Real-time PCR及Western blot等检测siRNA序列在HeLa细胞中敲低NSPc1的有效性;将相应有效序列构建到pSUPER载体中,观察其瞬时转染对HeLa细胞BrdU掺入的影响;用G418筛选并建立稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,观察敲低NSPc1对HeLa细胞体外增殖能力的影响。结果(1)设计的siRNA序列可显著敲低NSPc1的表达;(2)瞬时敲低NSPc1阻碍了HeLa细胞BrdU的掺入;(3)成功构建稳定敲低NSPc1的HeLa细胞系,其增殖速度较对照组明显变慢。结论NSPc1的正常表达是维持HeLa细胞正常增殖能力所必需的,稳定敲低NSPc1的HeLa细胞群可作为进一步研究NSPc1相关信号通路的有效模型。

关键词： Polycomb NSPc1 HeLa细胞稳定细胞系增殖

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真核生物中锌指蛋白的结构与功能

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中国生物化学与分子生物学报 2009年第3期25卷 206-211页

作者：李晓波张俊武北京协和医学院基础学院、中国医学科学院基础医学研究所、医学分子生物学国家重点实验室北京100005

真核生物中的许多蛋白质分子包含锌指结构区,这类蛋白称为锌指蛋白.锌指蛋白因其包含特殊的指状结构,在对DNA、蛋白质和RNA的识别和结合中起重要作用.许多锌指蛋白的锌指结构域包含能与DNA特异结合的区域,并与某些效应结构域(如KRAB、S... 详细信息

真核生物中的许多蛋白质分子包含锌指结构区,这类蛋白称为锌指蛋白.锌指蛋白因其包含特殊的指状结构,在对DNA、蛋白质和RNA的识别和结合中起重要作用.许多锌指蛋白的锌指结构域包含能与DNA特异结合的区域,并与某些效应结构域(如KRAB、SCAN、BTB/POZ、SNAG、SANT和PLAG等)相连,这类锌指蛋白常作为转录因子起作用,可调控靶基因的转录.一些锌指蛋白包含蛋白质识别结构域(如LIM锌指、MYND锌指、PHD锌指和RING锌指等),它们能够特异地介导蛋白质之间的相互作用,因此被称作蛋白适配器.此外,某些锌指蛋白还可以结合RNA,起转录后调控作用.本文就锌指蛋白与DNA、RNA以及蛋白质分子间的相互作用作一综述.

关键词：锌指蛋白功能结构域转录因子蛋白质适配器 RNA结合

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非编码RNA与动物发育

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中国科学（C辑） 2009年第1期39卷 21-30页

作者：黄守均朱大海北京协和医学院基础学院/中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是指不翻译产生蛋白质的RNA.近年来,对ncRNA在基因表达调控中的功能进行了广泛的研究,ncRNA在发育、代谢和疾病等生命活动中都起着重要的作用.本文总结了ncRNA在胚胎发育、干细胞维持和器官发生等动物... 详细信息

非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是指不翻译产生蛋白质的RNA.近年来,对ncRNA在基因表达调控中的功能进行了广泛的研究,ncRNA在发育、代谢和疾病等生命活动中都起着重要的作用.本文总结了ncRNA在胚胎发育、干细胞维持和器官发生等动物发育过程中的作用.

关键词： ncRNA发育干细胞基因印记

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全反式维甲酸对SH-SY5Y细胞全基因组启动子区组蛋白H3乙酰化修饰的影响

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科学通报 2009年第1期54卷 46-52页

作者：方洪波米洋张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA,简称RA)诱导人类神经细胞分化的表观遗传调控机制,应用染色质免疫沉淀与启动子芯片联合技术(ChIP-on-chip),对RA诱导24h后神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中两万余个基因启动子区的组蛋白H3... 详细信息

为研究全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA,简称RA)诱导人类神经细胞分化的表观遗传调控机制,应用染色质免疫沉淀与启动子芯片联合技术(ChIP-on-chip),对RA诱导24h后神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中两万余个基因启动子区的组蛋白H3乙酰化修饰状态进行了高通量检测和分析.首先分别制备RA处理组和对照组的标记探针,然后将人类基因组启动子芯片与探针进行杂交,获得RA诱导SH-SY5Y细胞分化早期全基因组启动子区H3组蛋白乙酰化的数据.结果分析显示,RA处理导致597个基因启动子的乙酰化程度显著升高、647个基因降低.本研究结果显示上述技术的高效与可行,并为深入研究RA诱导分化相关基因的表观遗传调控机制奠定了基础.

关键词：全反式维甲酸(RA) 染色质免疫沉淀启动子芯片细胞分化组蛋白乙酰化

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腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶的表达、纯化及晶体分析

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 696-701页

作者：武岚钱忠付俊缪时英王琳芳中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国科学院北京基因组研究所北京101318

目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化***21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导... 详细信息

目的纯化腾冲嗜热厌氧菌新型变旋酶TTE1925,用于晶体生长和三维结构分析。方法将tte1925基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化***21(DE 3)后获得表达菌株。该菌株经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导高效表达出带有谷胱甘肽S转移酶标签的可溶性融合蛋白,经过GlutathioneSepharoseTM4B亲和层析、Resource Q 6 mL离子交换层析和10/300 superdex 200分子筛层析纯化后,得到目的蛋白TTE1925。结果纯化后蛋白的纯度达到99%以上。蛋白采用悬滴气相扩散法得到衍射至1.9的棒状晶体。结论成功制备了高纯度TTE1925蛋白,获得TTE1925蛋白质晶体,为进一步解析变旋酶的三维结构及其生物学功能分子机制研究奠定了基础。

关键词：腾冲菌 TTE1925 半乳糖变旋酶原核表达蛋白质纯化结晶

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神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶

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基础医学与临床 2009年第4期29卷 337-341页

作者：王先平赵理朱镜羲彭小忠阴彬中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的对Musashi1发挥功能的RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法通过构建Musashi1 RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果通过系统筛选... 详细信息

目的对Musashi1发挥功能的RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法通过构建Musashi1 RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。

关键词： RNA结合蛋白 Musashi1 RRM1 蛋白表达和纯化结晶

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酵母双杂交技术筛选NECL1胞内区的结合蛋白

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基础医学与临床 2009年第2期29卷 119-123页

作者：李晨陈涛阴彬龚燕华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选人源膜表面黏附分子NECL1蛋白胞内区相互作用蛋白。方法构建含人NECL1蛋白胞内区氨基酸编码序列的诱饵质粒pGBKT7N-ECL1C,对人胎脑cDNA文库进行酵母双杂交筛选。用GST pu ll down实验进行体外蛋白相互作用的验证。结果酵母双杂... 详细信息

目的筛选人源膜表面黏附分子NECL1蛋白胞内区相互作用蛋白。方法构建含人NECL1蛋白胞内区氨基酸编码序列的诱饵质粒pGBKT7N-ECL1C,对人胎脑cDNA文库进行酵母双杂交筛选。用GST pu ll down实验进行体外蛋白相互作用的验证。结果酵母双杂交阳性克隆测序后显示共存在9段不同序列(存在重复克隆)。比对氨基酸序列得到5个可能相互作用蛋白。通过GST pu ll down实验验证了其中两个蛋白与NECL1胞内区的相互作用。结论应用酵母双杂交系统,获得了一些候选的NECL1胞内区相互作用蛋白。

关键词：酵母双杂交 NECL1 相互作用蛋白

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儿茶酚胺氧位甲基转移酶基因Ala22/72Ser多态性与精神分裂症的相关性及初步功能学探索

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基础医学与临床 2009年第5期29卷 449-452页

作者：王彦房岳许琪沈岩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因单核苷酸多态性(SNP)位点Ala22/72Ser与北方汉族人群精神分裂症(SCZ)之间的关系。方法在506例SCZ患者中,用聚合酶链式反应(PCR),对COMT基因Ala22/72Ser位点进行基因分型;用阳性与阴性症状量表(... 详细信息

目的研究儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因单核苷酸多态性(SNP)位点Ala22/72Ser与北方汉族人群精神分裂症(SCZ)之间的关系。方法在506例SCZ患者中,用聚合酶链式反应(PCR),对COMT基因Ala22/72Ser位点进行基因分型;用阳性与阴性症状量表(PANSS)对患者的精神病性症状的严重程度进行评分;同时用Real-Time PCR测定COMT基因的表达量。结果在SCZ患者中,携带Ser等位基因和Ser/Ala基因型的患者的阳性症状总分和一般精神病理症状总分显著升高(P<0.01),而且COMT基因的表达量显著降低(P<0.01)。结论COMT基因的Ala22/72Ser多态性与SCZ患者的阳性症状和一般精神病理症状的严重程度相关,而且与COMT基因表达量相关。

关键词：儿茶酚胺氧位甲基转移酶(COMT)基因精神分裂症(SCZ) 单核苷酸多态性(SNP)

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