检索结果-内蒙古大学图书馆

首都医科大学学报 2009年第3期30卷 355-359页

作者：刘巍晁腾飞龚燕华袁建刚甲戈马振宇赵继宗首都医科大学附属北京天坛医院神经外科中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学与国家重点实验室

目的检测人髓母细胞瘤(medulloblastomas,MB)与非肿瘤脑组织中微小RNA(miRNA)的表达差异情况,探讨异常表达miRNA参与MB发生的可能分子机制。方法选取经手术切除的MB组织标本及瘤旁正常小脑组织,分别提取总RNA和小分子RNA,在miRNA微阵列... 详细信息

目的检测人髓母细胞瘤(medulloblastomas,MB)与非肿瘤脑组织中微小RNA(miRNA)的表达差异情况,探讨异常表达miRNA参与MB发生的可能分子机制。方法选取经手术切除的MB组织标本及瘤旁正常小脑组织,分别提取总RNA和小分子RNA,在miRNA微阵列芯片中杂交检测,通过芯片扫描和数据分析,并通过实时荧光定量RT-PCR验证,获得该病异常miRNAs表达谱。结果筛选出9个MB的相关miRNAs,其中表达上调4个,表达下调5个。其中miR-17、miR-100、miR-106b和miR-218的差异表达情况得到定量RT-PCR的证实。结论miRNA微阵列分析技术是一种快速、高效的研究生物信息的分子生物学技术;筛选出的差异表达miRNAs可能参与MB发病,为此病诊治提供了新的思路,值得进一步研究。

关键词：髓母细胞瘤微小RNA 微阵列靶基因肿瘤发生

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Mef2c真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达

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山东医药 2009年第4期49卷 15-17页

作者：温见燕于长安杨鹏阴彬李耿柯元南廖文强中日友好医院全国中西医结合心血管病中心北京100029 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的构建小鼠Mef2c基因真核表达质粒并转染HEK293T细胞。方法采用RT-PCR方法从小鼠心脏组织的总cDNA中扩增出小鼠的Mef2c的基因,采用基因重组技术将Mef2c的cDNA片段插入真核表达载体pcD-NA3.1(+),构建小鼠Mef2c真核表达质粒,脂质体转染H... 详细信息

目的构建小鼠Mef2c基因真核表达质粒并转染HEK293T细胞。方法采用RT-PCR方法从小鼠心脏组织的总cDNA中扩增出小鼠的Mef2c的基因,采用基因重组技术将Mef2c的cDNA片段插入真核表达载体pcD-NA3.1(+),构建小鼠Mef2c真核表达质粒,脂质体转染HEK293T细胞进行表达。结果酶切和测序结果证实Mef2c真核表达质粒构建成功,经脂质体转染293T细胞后,Western blot检测证明Mef2c蛋白在真核细胞中成功表达。结论成功构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Mef2c,为进一步研究小鼠Mef2c在心肌分化过程中的作用及其调控机制奠定了实验基础。

关键词： MEF2 基因表达载体构建

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MEF2C调控DOK5基因的表达

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基础医学与临床 2009年第4期29卷 342-346页

作者：温见燕阴彬张英姿叶建伟廖文强于长安柯元南中日友好医院全国中西医结合心血管病中心北京100029 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山东省泰山医学院附属医院山东泰安271000

目的研究MEF2C对DOK5的表达调控机制。方法用RT-PCR法检测小鼠中DOK5组织表达谱,检测P19CL6向心肌细胞分化过程中DOK5和MEF2C的表达。MEF2C与DOK5启动子报告基因共转染P19CL6细胞或将DOK5启动子上的MEF2结合位点突变后,观察报告基因活... 详细信息

目的研究MEF2C对DOK5的表达调控机制。方法用RT-PCR法检测小鼠中DOK5组织表达谱,检测P19CL6向心肌细胞分化过程中DOK5和MEF2C的表达。MEF2C与DOK5启动子报告基因共转染P19CL6细胞或将DOK5启动子上的MEF2结合位点突变后,观察报告基因活性的变化。结果DOK5在小鼠的脑、心脏、骨骼肌等高表达。DOK5和MEF2C在P19CL6向心肌细胞分化过程中mRNA表达水平升高(P<0.05)。过表达MEF2C可以激活DOK5启动子区的报告基因活性,而MEF2结合位点突变则抑制DOK5启动子区报告基因活性。结论MEF2C可以通过作用于DOK5启动子区的MEF2结合位点,调节DOK5的转录活性。

关键词： MEF2C DOK5 启动子基因表达调控

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RA诱导SH-SY5Y细胞分化中NEF3基因表达的调控

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医学研究杂志 2009年第8期38卷 18-22页

作者：张莉沈金花代辉张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究全反式维甲酸（RA）诱导神经母细胞瘤分化过程中NEF3表达的调控。方法用RA诱导神经母细胞SH—SYSY，用实时RT—PCR分析NEF3和Brg1的mRNA表达；并同时测定RGl蛋白的表达。共转染含有2．8kb NEF3上游序列的报告基因质粒、Brg1... 详细信息

目的研究全反式维甲酸（RA）诱导神经母细胞瘤分化过程中NEF3表达的调控。方法用RA诱导神经母细胞SH—SYSY，用实时RT—PCR分析NEF3和Brg1的mRNA表达；并同时测定RGl蛋白的表达。共转染含有2．8kb NEF3上游序列的报告基因质粒、Brg1的表达质粒或者其负显性突变质粒，检测后两者对NEF3-CAT启动子活性的调控。结果 RA诱导12—24h，SH—SY5Y细胞中NEF3与Brg1几乎同时表达出现第1个高峰，之后表达量下降。共转染结果显示Brg1可促进NEF3-CAT表达增加，而其突变型没有作用。结论 RA诱导初期，染色质重塑复合物ATP酶亚基Brg1可能导致NEF3上游调控序列所处的染色质结构发生改变，从而有利于NEF3基因的表达。

关键词： NEF3 RA Brg1染色质重塑

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睾丸高表达蛋白质HSD-14对小鼠精子发生的影响

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医学研究杂志 2009年第5期38卷 32-36,137页

作者：宋伟胡廷徽陈叙缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室/北京协和医学院(清华大学医学部)基础学院北京100005

目的研究睾丸高表达基因HSD-14及其编码蛋白质对小鼠精子发生的影响。方法利用本实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD-14基因。纯化原核表达的HSD-14蛋白,并制备兔多克隆抗体。通过HE染色观察腹腔注... 详细信息

目的研究睾丸高表达基因HSD-14及其编码蛋白质对小鼠精子发生的影响。方法利用本实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD-14基因。纯化原核表达的HSD-14蛋白,并制备兔多克隆抗体。通过HE染色观察腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后小鼠睾丸组织的生精变化,并进行TUNEL凋亡检测。结果电子克隆获得HSD-14基因,在原核表达系统中表达成功。小鼠腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后,均发现曲细精管中生精细胞大量脱落,生精细胞的层次紊乱,管腔内有时可见成团脱落的生精细胞,附睾中几乎观察不到成熟精子。TUNEL凋亡检测结果表明,抗体注射组小鼠曲细精管中生精细胞(以精母细胞为主)凋亡程度较正常小鼠睾丸和免疫前血清注射组明显,且多数细胞停留在精母细胞甚至精原细胞的阶段。结论HSD-14通过诱导精母细胞凋亡抑制小鼠精子发生。

关键词： HSD-14 精子发生精母细胞细胞凋亡

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神经系统多肽(蛋白)药物研发现状与前景

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生物产业技术 2009年第3期 52-67页

作者：黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所清华大学医学部北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

首先介绍体内神经肽是最可能成为神经系统多肽药物的，进而介绍已成功应用于临床治疗神经系统疾患有关的多肽蛋白药物和正在研发的多肽蛋白神经系统药物。

关键词：神经系统多肽药物应用与研究血脑屏障

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SIRT1在高糖刺激的内皮细胞中调控HO-1的表达

SIRT1在高糖刺激的内皮细胞中调控HO-1的表达

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第11届中国南方国际心血管病学术会议

作者：高鹏周立全张慧娜陈厚早刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的研究SIRT1是否在内皮细胞内能够调控HO-1的表达。血红素加氧酶(Heme Oxygenase)家族三个成员中,只有HO-1可被诱导表达,其启动子区含有多个转录因子结合位点。多种生长因子,氧化刺激因素,抗氧化药物以及激素能够通过MAPK通路促进HO-... 详细信息

目的研究SIRT1是否在内皮细胞内能够调控HO-1的表达。血红素加氧酶(Heme Oxygenase)家族三个成员中,只有HO-1可被诱导表达,其启动子区含有多个转录因子结合位点。多种生长因子,氧化刺激因素,抗氧化药物以及激素能够通过MAPK通路促进HO-1的表达,从而对高血压,动脉粥样硬化,血管损伤,血栓形成等心血管疾病起到抑制的作用。有文献报道称HO-1能够抑制糖尿病相关的血管内皮细胞损伤,而人类第三类组蛋白去乙酰化酶SIRT1的激活剂Resveratrol能够通过Nrf-2和NF-κB上调HO-1的表达。方法为了探究SIRT1是否能够通过上调HO-1的表达在高糖刺激下保护血管内皮细胞的功能,我们培养了原代的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),首先用15mM和30mM两种浓度的右旋葡萄糖分别刺激24小时和48小时后,用RT-PCR和Western Blotting的方法检测了SIRT1,HO-1以及HO-1上游转录因子HIF1-a,Nrf2和NF-κB的表达,进而取HUVEC分别用腺病毒Ad-GFP,Ad-SIRT1, Ad-DNSIRT1 H363Y感染24小时,检测以上基因的表达情况。结果发现SIRT1和HO-1在30mM高糖刺激下mRNA和蛋白表达水平均有下降,以24小时差别最明显,而HIF1-a,Nrf2和NF-κB的表达未见明显差异。在用腺病毒过表达SIRT1时,HO-1的表达水平也随之升高,而过表达乙酰化位点突变型的SIRT1时,HO-1的表达则没有变化,同时HIF1-a,Nrf2和NF-κB的表达也未见变化。结论以上结果表明,在高糖刺激的内皮细胞中,SIRT1和HO-1的表达具有同向性,而SIRT1也能够调控HO-1的表达,但并不是通过直接影响实验涉及的HO-1上游转录因子的表达,提示SIRT1可能是通过MAPK途径或去乙酰化相关转录因子以及调控HO-1启动子区染色质状态等机制对HO-1进行调控的,其具体机制有待进一步研究。

关键词：高糖刺激 SIRT1 内皮细胞

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SIRT1通过上调p27Kip1抑制动脉粥样硬化中血管平滑肌细胞增殖

SIRT1通过上调p27Kip1抑制动脉粥样硬化中血管平滑肌细胞增殖

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第11届中国南方国际心血管病学术会议

作者：鲁云彪贾玉艳张冉陈厚早刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的血管平滑肌细胞的异常增殖是动脉粥样硬化发生与发展的重要致病机理之一,参与了粥样斑块形成的各个阶段。SIRT1是哺乳动物的依赖于NAD的Ⅲ类的组蛋白去乙酰化酶,是低等动物中Sir2的同源物,它参与许多的重要的生理过程,但是在动脉粥... 详细信息

目的血管平滑肌细胞的异常增殖是动脉粥样硬化发生与发展的重要致病机理之一,参与了粥样斑块形成的各个阶段。SIRT1是哺乳动物的依赖于NAD的Ⅲ类的组蛋白去乙酰化酶,是低等动物中Sir2的同源物,它参与许多的重要的生理过程,但是在动脉粥样硬化过程中中SIRT1的作用还仍然不清楚。为了进一步探索SIRT1在血管平滑肌及动脉粥样硬化中的作用,我们进行了本研究。方法首先,用HO和oxLDL刺激平滑肌细胞,构建动物血管损伤模型,检测SIRT1的表达;其次,利用腺病毒技术过表达SIRT1,以及使用SIRT1的抑制剂等方法通过RT-PCR、3H掺入实验、流式细胞仪等技术观察SIRT1对血管平滑肌增殖的影响;最后,利用Western Blot、COIP等实验寻找SIRT1影响平滑肌增殖的分子机制。结果平滑肌细胞内源性SIRT1随着氧化应激刺激时间的延长表达上调,而在动物血管损伤模型中,我们也发现血管损伤处平滑肌的SIRT1表达也明显增高,提示SIRT1可能与平滑肌的氧化应激和增殖调控有关。3H掺入实验发现SIRT1能够抑制血清刺激的平滑肌细胞增殖,用流式细胞仪分析发现SIRT1使平滑肌细胞发生了G1期阻滞。进一步我们检测了SIRT1对于参与细胞周期调控的蛋白表达水平的影响,发现SIRT1能够在血清刺激的早期上调p27表达。最后我们用免疫共沉淀的方法证明平滑肌细胞中SIRT1能够和FOXO3a相互作用,提示SIRT1上调p27可能是通过FOXO3a介导的。结论SIRT1可以通过增加p27的表达抑制血管平滑肌细胞的增殖。

关键词：平滑肌细胞增殖动脉粥样硬化 SIRT1 p27Kip1

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Sirt1抑制巨噬细胞的炎症

Sirt1抑制巨噬细胞的炎症

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第11届中国南方国际心血管病学术会议

作者：贾玉艳鲁云彪张然黄吉炜刘德培中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的巨噬细胞在脂类代谢异常和炎症反应两个重要的生理过程中扮演着极其重要的角色,而这两个过程的紊乱也是动脉粥样硬化等疾病发生发展的病理基础。本文研究Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶Sirt1下调巨噬细胞炎症反应,改善巨噬细胞的功能及其机...

目的巨噬细胞在脂类代谢异常和炎症反应两个重要的生理过程中扮演着极其重要的角色,而这两个过程的紊乱也是动脉粥样硬化等疾病发生发展的病理基础。本文研究Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶Sirt1下调巨噬细胞炎症反应,改善巨噬细胞的功能及其机制。方法取小鼠的原代腹腔巨噬细胞为研究对象。用重组腺病毒感染原代腹腔巨噬细胞过表达Sirt1,在mRNA水平上检测了炎症细胞因子iNOS和ICAM1的表达。用双荧光素酶报告基因的方法,检测PMA或LPS诱导的iNOS和ICAM1启动子报告基因的转录活性。巨噬细胞分泌的NO是iNOS的产物,常被用做巨噬细胞炎症反应强弱的指标。本实验检测了培养的巨噬细胞上清中的NO的浓度。结果在PMA或LPS炎症的刺激下,Sirt1抑制了原代巨噬细胞炎症细胞因子iNOS和ICAM1的启动子活性和mRNA表达,降低了巨噬细胞上清中的NO的浓度。结论在巨噬细胞内,Sirt1降低了iNOS和ICAM1的表达及活性,从而抑制了炎症反应。因此,提高Sirt1的表达和活性可以作为一个调节炎症反应,保护机体的新的手段。

关键词：

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Snapin蛋白研究进展

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医学研究杂志 2009年第5期38卷 10-12页

作者：王岚陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所/清华大学医学部北京协和医学院/医学分子生物学国家重点实验室北京100005

细胞的分泌功能是一个涉及许多蛋白质、脂质分子等物质并有多个细胞器参与的复杂过程,通过囊泡胞吐过程来完成,真核细胞内生物大分子的分泌通过组成型和调节性囊泡运输两种方式进行,其中组成型囊泡运输涉及了一系列细胞器与细胞膜之间... 详细信息

细胞的分泌功能是一个涉及许多蛋白质、脂质分子等物质并有多个细胞器参与的复杂过程,通过囊泡胞吐过程来完成,真核细胞内生物大分子的分泌通过组成型和调节性囊泡运输两种方式进行,其中组成型囊泡运输涉及了一系列细胞器与细胞膜之间的囊泡融合,囊泡与细胞膜的融合涉及到了几个蛋白家族包括。[第一段]

关键词： n蛋白生物大分子分泌功能细胞器多蛋白质细胞膜囊泡调节性

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