检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2025年第5期 622-626页

作者：刘译阳王芳余佳李卫倩中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨谷氨酸-草酰乙酸转氨酶2基因(GOT2)在急性髓系白血病细胞中的功能。方法构建针对GOT2的shRNA,使用shRNA在人单核细胞白血病细胞系THP-1中抑制GOT2基因的表达。通过RT-qPCR检测GOT2 mRNA表达水平，Western blot检测GOT2蛋白表... 详细信息

目的探讨谷氨酸-草酰乙酸转氨酶2基因(GOT2)在急性髓系白血病细胞中的功能。方法构建针对GOT2的shRNA,使用shRNA在人单核细胞白血病细胞系THP-1中抑制GOT2基因的表达。通过RT-qPCR检测GOT2 mRNA表达水平，Western blot检测GOT2蛋白表达水平的变化。采用比色法检测细胞内游离氨基酸含量变化。检测细胞GOT2表达缺失对THP-1细胞功能的影响，包括：CCK8法评估细胞增殖情况；流式细胞测量术分析细胞凋亡水平。结果使用GOT2 shRNA干扰后，THP-1细胞GOT2的mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与对照组相比，敲低GOT2不影响细胞内谷氨酸含量(P>0.05),但会显著下调天冬氨酸含量(P<0.05);敲低GOT2显著降低了THP-1细胞的活性，使细胞增殖受阻(P<0.05)、凋亡增加(P<0.05)。结论下调GOT2可显著降低急性髓系白血病细胞系内天冬氨酸水平，抑制细胞生长并诱导细胞凋亡，提示GOT2在急性髓系白血病的氨基酸代谢调控中可能发挥关键作用。

关键词： GOT2 急性髓系白血病天冬氨酸

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基于人工智能的心血管疾病预测模型研究现状

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蚌埠医科大学学报 2025年第1期50卷 6-13页

作者：彭石娟王小满高琴陈厚早蚌埠医科大学卫生管理学院安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学基础医学院生理学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学心脑血管疾病基础与临床重点实验室安徽蚌埠233030 中国医学科学院基础医学研究所暨北京协和医学院生物化学与分子生物学系重大疾病共性机制研究国家重点实验室北京100005

心血管疾病(CVD)是全球的主要死因,早期预测对CVD.预防、诊断和治疗至关重要。二十世纪末,研究者根据不同权重将多种危险因素组成风险评分来预测CVD风险,以便确定最有可能从预防性干预措施中获益的人群,为一些国家带来重大利益。然而,... 详细信息

心血管疾病(CVD)是全球的主要死因,早期预测对CVD.预防、诊断和治疗至关重要。二十世纪末,研究者根据不同权重将多种危险因素组成风险评分来预测CVD风险,以便确定最有可能从预防性干预措施中获益的人群,为一些国家带来重大利益。然而,传统的风险模型通常无法捕捉危险因素之间的非线性关系。人工智能(AI)技术,特别是监督式机器学习和深度学习,为CVD预测提供了新视角和工具。近几年,基于电子病历、多模态影像等临床数据和衰老大数据可以准确地预测CVD的发病和死亡风险,因此,本文将从传统评分、基于AI的临床数据和衰老大数据的CVD预测模型研究现状分别进行阐述,为促进AI结合CVD提供思路。

关键词：心血管疾病人工智能预测模型衰老生物学年龄

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DNA末端构型调控RecJ核酸外切酶活性

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生物化学与生物物理进展 2022年第6期49卷 1085-1093页

作者：马兰枝谢龑张鹏陈厚早刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的核酸酶介导的DNA双链末端切割对同源重组修复至关重要。然而,DNA末端构型对RecJ 5’-3’核酸外切酶活性的调控尚不清楚。本研究旨在探究DNA3’端和5’端构型对RecJ核酸外切酶活性的影响及其机制。方法为探究DNA3’端构型对RecJ核酸... 详细信息

目的核酸酶介导的DNA双链末端切割对同源重组修复至关重要。然而,DNA末端构型对RecJ 5’-3’核酸外切酶活性的调控尚不清楚。本研究旨在探究DNA3’端和5’端构型对RecJ核酸外切酶活性的影响及其机制。方法为探究DNA3’端构型对RecJ核酸外切酶活性的影响,使用含有Mg;的体系,对具有不同3’突出末端长度(9 nt与18 nt)和3’突出末端修饰(磷酸化和硫代磷酸酯修饰)的单链DNA分别进行RecJ核酸酶活性检测。为揭示DNA 3’端构型对RecJ外切酶活性的调控机制,在Mg;缺失的体系中,使RecJ与底物结合后进行凝胶迁移实验(EMSA)。为探索其他调控因子与DNA3’端构型对RecJ的协同作用,分别检测5’端磷酸化修饰和单链DNA结合蛋白(SSB)对DNA3’突出末端修饰的影响。结果DNA3’端构型包括突出末端的长度和修饰(磷酸化和硫代磷酸酯修饰)均会抑制RecJ外切酶活性。DNA 3’端磷酸化和硫代磷酸酯修饰通过重塑RecJ-DNA的结合模式抑制RecJ外切酶活性。DNA 5’端磷酸化修饰可增强RecJ对具有不同3’端修饰底物的核酸外切酶活性,并改变RecJ-DNA的结合模式。此外,SSB通过增强RecJ-DNA结合可部分克服DNA3’端修饰介导的抑制作用。结论DNA3’与5’端构型协同调控RecJ核酸外切酶的活性。

关键词：同源重组 RecJ核酸外切酶 DNA末端构型 DNA末端切割调控

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小鼠心脏过表达SIRT1显性失活突变体导致心肌细胞凋亡和早发性心衰

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中国科学：生命科学 2014年第9期44卷 861-870页

作者：穆文利张庆军唐小强付文艳郑伟鲁云彪李红良韦玉生折志刚陈厚早刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

本研究旨在探究SIRT1的去乙酰化活性在调节心脏功能方面的重要作用.与成年小鼠心脏相比,在出生后早期小鼠的心脏中SIRT1去乙酰化活性较高.为了进一步研究SIRT1酶活性在出生后心脏中的功能,本研究构建了心脏特异性表达人源SIRT1显性失活... 详细信息

本研究旨在探究SIRT1的去乙酰化活性在调节心脏功能方面的重要作用.与成年小鼠心脏相比,在出生后早期小鼠的心脏中SIRT1去乙酰化活性较高.为了进一步研究SIRT1酶活性在出生后心脏中的功能,本研究构建了心脏特异性表达人源SIRT1显性失活突变体(SIRT1 H363Y)的转基因小鼠,SIRT1 H363Y能够抑制内源性SIRT1的去乙酰化活性.这种转基因小鼠表现为心室与心房腔扩张,并且出生后早夭.在病理学方面,超声心动图与分子表型证实转基因小鼠罹患扩张型心肌病.同时,本研究通过TdT介导的dUTP缺口末端标记技术检测到转基因小鼠的心脏心肌凋亡更为严重.进一步研究发现,SIRT1活性的抑制造成的心肌细胞凋亡至少一部分原因归结为p53乙酰化水平的升高与Bax表达的上调.以上结果表明,小鼠心脏特异性地过表达SIRT1的显性失活突变体(SIRT1 H363Y)能够导致心肌细胞凋亡以及心衰早发,这提示SIRT1在出生后早期维持心脏正常功能方面发挥着非常关键的作用.

关键词：去乙酰化 SIRT1 凋亡心衰

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抗凝剂引起的蛋白变化可以在尿中更敏感地监测

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中国科学：生命科学 2014年第7期44卷 1125-1132,1195-1196页

作者：李梦林赵敏迪高友鹤中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院病理生理系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

生物标志物是指与生理或者病理生理过程相联系的可监测的变化,最常用于检测生物标志物的体液是血液.但血液有严格的稳态调节,理论上不允许较大的变化在血液中持续存在.尿液则没有稳态的调节,并且尿液的一部分是血液滤过物,因此它在一定... 详细信息

生物标志物是指与生理或者病理生理过程相联系的可监测的变化,最常用于检测生物标志物的体液是血液.但血液有严格的稳态调节,理论上不允许较大的变化在血液中持续存在.尿液则没有稳态的调节,并且尿液的一部分是血液滤过物,因此它在一定程度上可以反映血液或者整个机体的状态.本实验通过抗凝剂肝素或阿加曲班改变雌性SD大鼠的凝血状态,用蛋白质组学的方法检测给药前后血液和尿液中蛋白的改变.在同样的鉴定策略及分析条件下,尿液中发现更多的变化蛋白.在阿加曲班干预组中,检测到尿液中变化的蛋白有62个,血液中变化的蛋白仅有1个.在肝素干预组中,尿液中变化的蛋白有27个,血液中变化的蛋白仅有3个.Western blot显示,转铁蛋白(transferrin)和血红素结合蛋白(hemopexin)在血液和尿液中的变化趋势与质谱结果一致.本实验提示尿液是更敏感的蛋白生物标志物的来源.

关键词：生物标志物蛋白质组学尿液血液

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反转录病毒载体介导的人β-珠蛋白基因低水平表达的机制初探

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生物化学与生物物理学报 2002年第6期34卷 763-768页

作者：董文吉祖振响刘德培郝德龙郭志晨梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

以人 β 珠蛋白基因簇基因座控制区DNaseI高敏位点 2和高敏位点 3组合的微小基因座控制区作为调控元件 ,以 374bp第二内含子部分缺失的 2 .0kbβ 珠蛋白基因作为结构基因的反转录病毒重组体 ,通过建立 ψ 2产病毒细胞系和瞬时转染双向... 详细信息

以人 β 珠蛋白基因簇基因座控制区DNaseI高敏位点 2和高敏位点 3组合的微小基因座控制区作为调控元件 ,以 374bp第二内含子部分缺失的 2 .0kbβ 珠蛋白基因作为结构基因的反转录病毒重组体 ,通过建立 ψ 2产病毒细胞系和瞬时转染双向性包装细胞系 ψ A两种方法获得重组病毒。感染鼠红白血病细胞后 ,Southern杂交鉴定前病毒整合完整性 ,用RNase保护实验检测人 β 珠蛋白基因的表达 ,通过PCR产物测序确定前病毒结构。结果表明 ,在瞬时转染 ψ A来源的重组病毒转导和质粒转染的鼠红白血病细胞中 ,人 β 珠蛋白基因的表达水平分别达到内源性鼠α 基因表达的 (5 2 .4± 11.2 ) % (n =12 )和 (73.8± 14 .3) % (n =12 ,未确定整合拷贝数 ) ;而在 ψ 2产病毒细胞系来源的病毒转导的细胞中 ,表达水平低于 3% ,前病毒序列分析发现其高敏位点 2中出现一个点突变 ,这可能是人β 珠蛋白基因呈低水平表达的一个原因。

关键词： β-地中海贫血基因治疗反转录病毒载体位置效应 RNA干扰

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外显子捕获法分离FRAXA位点的新表达序列

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生物化学与生物物理进展 1998年第4期25卷 367-373页

作者：孔建朱宁宁尹斌沈岩吴冠芸中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

外显子捕获是近年发展起来的一种自基因组ＤＮＡ分离表达序列的有效方法．我们采用以ｐＳＰＬ３为剪接载体的外显子捕获系统，从覆盖ＦＲＡＸＡ位点的酵母人工染色体ＹＡＣ２０９Ｇ４中分离到２个新外显子序列Ａ９１和Ｄ１２．Ａ９１在... 详细信息

外显子捕获是近年发展起来的一种自基因组ＤＮＡ分离表达序列的有效方法．我们采用以ｐＳＰＬ３为剪接载体的外显子捕获系统，从覆盖ＦＲＡＸＡ位点的酵母人工染色体ＹＡＣ２０９Ｇ４中分离到２个新外显子序列Ａ９１和Ｄ１２．Ａ９１在人胎肝和骨骼肌文库中丰度较高，在肝、肾和骨髓文库中也有ＰＣＲ扩增．而Ｄ１２在所分析的８个ｃＤＮＡ文库中均未见ＰＣＲ扩增产物．从骨骼肌文库中克隆到一段包含Ａ９１的３１５ｂｐ的ｃＤＮＡ（ＡＭ４４７０）．多种组织ＲＮＡ印迹显示，ＡＭ４４７０与骨骼肌和心脏ｍＲＮＡ杂交，转录本长度均为２８ｋｂ．

关键词：外显子捕获表达序列 FRAXA位点

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脂筏的结构与功能

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生物化学与生物物理进展 2003年第1期30卷 54-59页

作者：陈岚许彩民袁建刚潘华珍中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

脂筏是膜脂双层内含有特殊脂质及蛋白质的微区 .小窝是脂筏的一种类型 ,由胆固醇、鞘脂及蛋白质组成 ,以小窝蛋白为标记蛋白 .脂筏的组分和结构特点有利于蛋白质之间相互作用和构象转化 ,可以参与信号转导和细胞蛋白质运转 .一些感染性... 详细信息

脂筏是膜脂双层内含有特殊脂质及蛋白质的微区 .小窝是脂筏的一种类型 ,由胆固醇、鞘脂及蛋白质组成 ,以小窝蛋白为标记蛋白 .脂筏的组分和结构特点有利于蛋白质之间相互作用和构象转化 ,可以参与信号转导和细胞蛋白质运转 .一些感染性疾病、心血管疾病、肿瘤、肌营养不良症及朊病毒病等可能与脂筏功能紊乱有着密切的关系 .

关键词：膜结构脂筏结构功能小窝蛋白信号转导糖肌醇磷脂-锚固蛋白膜脂双层

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红系细胞中Cre重组酶介导的位点特异性片段交换(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第10期35卷 947-951页

作者：李兴国严皓珩刘德培郝德龙梁植权北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺... 详细信息

Cre介导的片段交换技术利用重组酶Cre的位点特异性重组特性 ,在基因组的特定位点进行靶片段与目的片段的交换。运用互为反向的Lox位点 ,在鼠红白血病MEL细胞中进行靶载体的整合和交换载体的交换 ,探讨在特定的染色质环境下红系特异性顺式作用元件的功能。电穿孔转染MEL细胞后从含有潮霉素 (hygromycin)的选择性半固体培养基中挑取MEL细胞单克隆 ,通过PCR和Southern杂交鉴定整合完整性和拷贝数 ,获得三种整合有靶载体p1L HyTk L1 β EGFP neo的细胞株A ,B和D。交换载体pL1 HS2 1L(含有 732 bp的人β 珠蛋白基因簇 5′DNaseI高敏位点 2核心片段 )和Cre表达载体pBS185共转染细胞株A ,9 (1,3 二羟 2丙氧甲基 )鸟嘌呤 (gancyclovir)负筛选后挑取单细胞克隆A HS。PCR检测显示HS2片段以反方向进行了交换。流式细胞仪分析显示平均的荧光细胞百分比 (2 .4 2 % )低于未交换的细胞株A (35 .94 % )。A HS中EGFP的低表达可能是处于非容许方向的HS2片段出现方向依赖性基因沉默所致。

关键词：染色体整合位点特异性重组 Cre/Lox 珠蛋白基因基因沉默

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线粒体转录复合物相关蛋白原核表达与纯化

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 638-643页

作者：刘光杨瑞锋石秉炀刘德培中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。方法设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDN... 详细信息

目的获取人线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体转录因子B1(TFB1M)、线粒体转录因子B2(TFB2M)基因片段,高效表达和纯化带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。方法设计引物扩增得到TFAM、TFB1M、TFB2M的cDNA片段,通过引入的酶切位点克隆至表达载体pET42a,构建重组表达载体,并导入***21宿主菌中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组的GST融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠纯化表达产物,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析鉴定。结果获得pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M表达质粒,测序结果与GenBank的基因序列一致。SDS-PAGE分析结果显示,重组GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白分别在相对分子质量56 000、67 000、69 000处出现特异性蛋白条带,经GST亲和层析纯化后,得到高纯度的融合蛋白。结论成功构建了基因重组体pET42a-TFAM、pET42a-TFB1M、pET42a-TFB2M,制备了GST-TFAM、GST-TFB1M、GST-TFB2M融合蛋白。

关键词：线粒体转录因子A 线粒体转录因子B1 线粒体转录因子B2 融合蛋白纯化

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