检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2016年第2期38卷 205-209页

作者：付俊罗艳云缪时英王琳芳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的探讨细胞连接相关蛋白在不同发育阶段小鼠睾丸中的表达模式。方法 Western blot检测并分析1~6周龄小鼠睾丸、原代支持细胞以及小鼠精原细胞系GC1 spg、精母细胞系GC2 spg、间质细胞系TM3、支持细胞系TM4等4种生殖相关细胞系中细胞... 详细信息

目的探讨细胞连接相关蛋白在不同发育阶段小鼠睾丸中的表达模式。方法 Western blot检测并分析1~6周龄小鼠睾丸、原代支持细胞以及小鼠精原细胞系GC1 spg、精母细胞系GC2 spg、间质细胞系TM3、支持细胞系TM4等4种生殖相关细胞系中细胞连接相关蛋白的表达水平。结果小鼠睾丸曲细精管中支持细胞间细胞连接相关膜蛋白连接黏附分子A、紧密连接蛋白Occludin和Claudin,以及支持细胞-生精细胞间细胞连接相关膜蛋白连接黏附分子C、连接蛋白Nectin-3和钙黏附蛋白E的表达表现出明显的阶段特异性。而参与细胞连接的调节蛋白紧密连接蛋白ZO-1、ZO-2、Afadin、β链蛋白和CD2相关蛋白在睾丸的不同发育阶段以及生殖细胞系中表达无差异。结论小鼠睾丸曲细精管中支持细胞间以及支持细胞-生精细胞间细胞连接相关的膜蛋白多表现出明显的阶段特异性。而参与细胞连接的调节蛋白在睾丸的不同发育阶段中表达无差异。

关键词：血睾屏障支持细胞间连接支持细胞-生精细胞间连接膜蛋白调节蛋白

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Dysbindin-1B^(+/+)小鼠海马凋亡及认知功能

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中国医学科学院学报 2017年第3期39卷 307-311页

作者：杨微许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的观察人源特异性表达dysbindin-1B^(+/+)(dys1B)小鼠的组织学及行为学表现。方法建立dys1B转基因小鼠,采用TUNEL法检测野生型(WT)和dys1B小鼠海马脑区凋亡情况,并在电镜下观察WT和dys1B小鼠海马区的凋亡情况,旷场实验和T迷宫实验观... 详细信息

目的观察人源特异性表达dysbindin-1B^(+/+)(dys1B)小鼠的组织学及行为学表现。方法建立dys1B转基因小鼠,采用TUNEL法检测野生型(WT)和dys1B小鼠海马脑区凋亡情况,并在电镜下观察WT和dys1B小鼠海马区的凋亡情况,旷场实验和T迷宫实验观测小鼠在新环境中的自主活动能力、焦虑程度及空间记忆能力。结果 dys1B小鼠海马区神经元凋亡率明显高于WT小鼠(t=12.98,P<0.0001),且在电镜下有凋亡中期和晚期表现。旷场实验结果显示,dys1B小鼠的总运动距离为(2887±376)cm,明显低于WT小鼠的(3632±606)cm(t=2.993,P=0.0122);中心活动时间为(64.22±14.67)s,明显少于WT小鼠的(114.00±34.09)s(t=4.649,P=0.0023)。T迷宫实验结果显示,forced run与test run间隔60和180 s时,dys1B小鼠的正确率分别为(70.40±15.17)%和(59.28±9.10)%,明显低于WT小鼠的(91.67±13.94)%(t=3.261,P=0.0258)和(83.33±14.89)%(t=3.687,P=0.0291);间隔15 s时,dys1B小鼠和WT小鼠的正确率差异无统计学意义[100%比(94.45±6.08)%;t=0.851,P=0.0756]。结论 dys1B表达可引起小鼠海马区细胞凋亡并可导致自主活动能力降低,焦虑程度增加,空间记忆能力障碍。

关键词： dysbindin-1 细胞凋亡自主活动焦虑程度认知障碍

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对胆囊收缩素受体A基因进行深度测序寻找精神分裂症相关位点

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中国医学科学院学报 2014年第5期36卷 466-469页

作者：陈凤萍吴霖沈岩许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的对与精神分裂症相关的胆囊收缩素受体A基因(CCKAR)进行深度测序,寻找精神分裂症相关位点。方法采用Haloplex目标富集系统对8个病例样本与8个正常对照样本进行CCKAR区域的深度测序,利用IGV软件去除结果中的假阳性,然后利用Unphased... 详细信息

目的对与精神分裂症相关的胆囊收缩素受体A基因(CCKAR)进行深度测序,寻找精神分裂症相关位点。方法采用Haloplex目标富集系统对8个病例样本与8个正常对照样本进行CCKAR区域的深度测序,利用IGV软件去除结果中的假阳性,然后利用Unphased软件进行分析。结果深度测序后得到103个变异位点,其中30个变异位点位于CCKAR基因上,发现了可能与精神分裂症相关的位点rs191275118。结论发现了新的可能与精神分裂症相关的位点,对CCKAR基因研究资料进行了补充。

关键词：精神分裂症胆囊收缩素受体A基因深度测序变异位点

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Dlx1的天然反义转录物在大脑发育中的功能探索

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中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 607-610页

作者：吴朝赵阿妮朱丽媛阴彬张靖中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索Dlx1的天然反义转录物(Dlx1as)在小鼠大脑发育过程中的功能。方法根据生物信息学分析与分子生物学实验验证Dlx1as是否具有多聚腺苷酸尾,采用实时定量PCR检测Dlx1as与Dlx1 mRNA在小鼠大脑发育过程中随时间的变化,利用原位杂交的... 详细信息

目的探索Dlx1的天然反义转录物(Dlx1as)在小鼠大脑发育过程中的功能。方法根据生物信息学分析与分子生物学实验验证Dlx1as是否具有多聚腺苷酸尾,采用实时定量PCR检测Dlx1as与Dlx1 mRNA在小鼠大脑发育过程中随时间的变化,利用原位杂交的技术比较Dlx1as与Dlx1 mRNA空间表达谱。结果 Dlx1as具有多聚腺苷酸尾,在小鼠的胚胎发育过程中,从E14.5到E18.5高表达,与Dlx1 mRNA在各时间点表达水平虽比较接近,但在表达区域存在互补的特点。结论 Dlx1as在小鼠大脑发育过程中有一段时间的高表达,与蛋白编码基因Dlx1 mRNA空间互补,推测其可能是通过调控Dlx1 mRNA来影响小鼠的大脑发育。

关键词： Dlx1as 小鼠大脑发育天然反义转录物原位杂交

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C57BL/6J小鼠慢性束缚应激抑郁症模型的建立

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中国医学科学院学报 2015年第1期37卷 8-11页

作者：孙楠楠沙龙泽许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过慢性束缚应激（CRS）建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。方法 C57BL/6J小鼠经体重、糖水偏好、旷场实验初筛后从中选择20只小鼠并随机分为正常对照（NC）组和CRS组2组,每组10只。对CRS组小鼠进行连续21 d,每天4 h的束缚刺激,并最终... 详细信息

目的通过慢性束缚应激（CRS）建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。方法 C57BL/6J小鼠经体重、糖水偏好、旷场实验初筛后从中选择20只小鼠并随机分为正常对照（NC）组和CRS组2组,每组10只。对CRS组小鼠进行连续21 d,每天4 h的束缚刺激,并最终进行糖水偏好检测和强迫游泳检测。结果 CRS组小鼠在水中不动的时间为（131.70±21.65）s,明显长于NC组的（68.88±8.43）s（P=0.0304）。CRS组小鼠0～24 h和0～48 h的糖水偏好百分比分别为（66.21±3.24）%和（73.25±1.50）%,均明显低于NC组的（79.46±3.85）%（P=0.0196）和（80.20±2.26）%（P=0.0248）。结论通过慢性束缚应激成功建立C57BL/6J小鼠抑郁症模型。

关键词：抑郁症慢性束缚应激 C57BL/6J小鼠行为学检测

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人精子肌动蛋白样蛋白7a蛋白在大肠杆菌系统的表达纯化及多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 507-510页

作者：付俊缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金... 详细信息

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂和谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B树脂两次亲和纯化和分子筛分离目的蛋白;以表达的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ACTL7a的多克隆抗体。ELISA检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性,免疫荧光组织化学技术检测ACTL7a在曲精小管细胞的表达。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a(1-70),纯化后免疫新西兰大白兔,成功获得抗血清。血清效价达到1:160000以上,且具有良好的特异性。结论成功构建了ACTL7a基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,经纯化获得高纯度的目的蛋白;制备出兔抗ACTL7a抗体,效价及特异性均良好。

关键词： ACTL7a 原核表达多克隆抗体

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亚硒酸钠通过AMPK/mTOR通路调控白血病NB4细胞凋亡

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基础医学与临床 2013年第3期33卷 297-302页

作者：段婧罗慧史可鉴杨洋许彩民中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院北京100005

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及... 详细信息

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及P70S6K的磷酸化水平、流式细胞术检测NB4细胞凋亡率;免疫共沉淀法检测AMPK和mTOR的相互作用。结果亚硒酸钠可以上调NB4细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR及P70S6K的磷酸化水平;AICAR和亚硒酸钠单独处理具有类似的促进NB4细胞凋亡的效果;干扰AMPK后,mTOR及P70S6K的磷酸化水平上升,亚硒酸钠对NB4细胞的促凋亡作用被拮抗;AMPK和mTOR有直接相互作用。结论亚硒酸钠可通过激活AMPK表达,抑制mTOR及P70S6K,促进NB4细胞凋亡。

关键词：亚硒酸钠白血病 AMPK mTOR

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靶向细胞衰老在血管疾病中的作用及其潜在应用

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中国科学：生命科学 2022年第5期52卷 682-690页

作者：王惠瑜丁杨楠魏子钰陈厚早刘德培中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

血管衰老是指血管发生形态、结构改变及功能失常的一系列退行性变化的过程.随着血管衰老、动脉粥样硬化等血管性疾病的发病风险显著增加,血管衰老成为探索衰老相关性血管疾病干预策略的重要方向,改变血管衰老的进程有望延缓心血管疾病发... 详细信息

血管衰老是指血管发生形态、结构改变及功能失常的一系列退行性变化的过程.随着血管衰老、动脉粥样硬化等血管性疾病的发病风险显著增加,血管衰老成为探索衰老相关性血管疾病干预策略的重要方向,改变血管衰老的进程有望延缓心血管疾病发生.细胞衰老是血管衰老的重要基础,以往的研究集中于血管内皮细胞衰老在血管衰老和血管性疾病中的作用,而对于血管平滑肌细胞衰老的认识较少.本文重点讨论了血管细胞中平滑肌细胞的衰老及其在血管性疾病发病中的研究进展,并阐述了血管衰老细胞的清除(senotherapy)在延缓衰老和衰老相关血管性疾病中的作用,以期为促进血管健康和延缓衰老相关血管性疾病提供新策略.

关键词：血管衰老平滑肌细胞衰老血管性疾病 senotherapy

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稳定表达人血红素加氧酶-1细胞系的建立及其功能鉴定

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中国医学科学院学报 2014年第4期36卷 420-425页

作者：杨根欢吴为李砚川倪冷王占启宋希涛刘昌伟中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Weste... 详细信息

目的构建稳定表达人血红素加氧酶-1(HO-1)的细胞系,探讨内源性过表达HO-1对抗细胞氧化损伤的作用。方法 PCR扩增HO-1基因并将其克隆至改造的慢病毒载体pLentiLox3.7中,构建携带目的基因的重组质粒。用重组质粒转染HEK293T细胞,并用Western blot检测HO-1的表达。将重组质粒与慢病毒辅助质粒(plp1、plp2、VSVG)共同转染HEK293T细胞,包装有活力的慢病毒。用携带HO-1的慢病毒感染HEK293T细胞,筛选出能稳定表达目的基因的单克隆,并行Western blot检测HO-1的表达。将过氧化氢加入正常的及过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞,检测细胞内活性氧的含量。结果成功筛选出能稳定表达HO-1的单克隆细胞系并扩大培养,Western blot检测其HO-1的表达明显升高。加入过氧化氢后,过表达HO-1的HEK293T细胞和人脐静脉内皮细胞内的活性氧明显减少。结论成功构建了能稳定表达人HO-1的细胞系,内源性过表达HO-1能够对抗细胞的氧化损伤。

关键词：血红素加氧酶-1 慢病毒稳定细胞株氧化损伤

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IFN-λs的最新研究进展

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中国生物工程杂志 2010年第4期30卷 95-100页

作者：惠希武陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

干扰素-λs(Interferon-λs,IFN-λs)是近年来发现的一类新型干扰素,由于其兼具I型干扰素和白细胞介素(interleukin,IL)-10家族的双重特征,因此其成员的命名为IFN-λ1(IL-29)、IFN-λ2(IL-28A)和IFN-λ3(IL-28B)。IFN-λs的受体隶属于II型细胞因子受体家族(classII cytokine receptor family,CRF2),由特有的配基结合亚基CRF2-12/IFN-λR1(又称IL-28Rα)和辅助亚基CRF2-4(IL-10R2)组成。IFN-λs与I型IFN相同,均可通过激活JAK-STAT(janus kinase-signal transducer and activator of transcription)信号通路来传递配基结合信号,因此IFN-λs显示了与IFN-α相似的抗病毒、抑制肿瘤细胞生长以及具免疫调节功能等生物学活性,但由于其骨髓抑制及毒副作用少而生物学作用具长效性,且临床试验研究已经取得了突破性进展,故有望在不久的将来成为一个新的基因工程药物。

关键词： IFN-λs IFN-λ受体生物学功能

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