检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2014年第6期30卷 982-989页

作者：王小蓉李逊斗贾露露高友鹤中国医学科学院基础医学研究所/北京协和医科大学基础医学院生理与病理生理学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同... 详细信息

硝酸纤维膜法是一种简单、快速、经济的尿液蛋白质保存方法,但其与传统尿液蛋白质丙酮沉淀方法的差异有待进一步研究.相同尿液分别经硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法制备尿蛋白质,经液相串联质谱分析鉴定蛋白质,采用谱图数定量,研究两种不同方法的差别.结果显示硝酸纤维膜法和丙酮沉淀法鉴定蛋白质数目几乎相同,鉴定蛋白质在谱图数的分布上几乎相同,鉴定蛋白质在蛋白质变异系数的分布上也几乎相同.因此,硝酸纤维膜法处理尿蛋白质与丙酮沉淀法基本一致,可以应用于大规模临床尿液样本的保存.

关键词：尿蛋白质保存硝酸纤维素膜蛋白质组学生物样本保存

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酵母单杂交体系——一种研究DNA-蛋白质相互作用的有效方法

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 388-391页

作者：廖名湘方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的... 详细信息

酵母单杂交体系是借鉴酵母双杂交体系的基本原理 ,通过观察酵母细胞内报告基因的表达状况 ,研究DNA-蛋白质之间的相互作用。通过筛选 DNA文库可直接得到与靶序列相互作用的蛋白质基因序列 ,而无需分离、纯化蛋白 ,从而克服了体内研究的局限性。目前酵母单杂交体系已被广泛应用于寻找与目的 DNA片段相互作用的蛋白质分子 ,该体系是一种用于研究 DNA-蛋白质之间的相互作用的有效方法。本文就酵母单杂交体系的原理、具体实现方法、在研究 DNA结合蛋白质中的应用及其优缺点等方面作一简要介绍。

关键词：酵母单杂交体系 DNA-蛋白质相互作用

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SIRT1在内皮细胞中抑制PMA和ionomycin诱导的ICAM-1的表达

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中国科学：生命科学 2013年第2期43卷 112-118页

作者：贾玉艳高鹏陈厚早万言珍张然张祝琴杨瑞锋王旭徐静刘德培中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

白细胞在内皮中的富集能够引起炎症并触发动脉粥样硬化,intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)在该过程中发挥了重要作用.本实验室先前研究显示,内皮特异过表达Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1能够抑制动脉粥样硬化.因此,提出这样的假设... 详细信息

白细胞在内皮中的富集能够引起炎症并触发动脉粥样硬化,intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)在该过程中发挥了重要作用.本实验室先前研究显示,内皮特异过表达Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1能够抑制动脉粥样硬化.因此,提出这样的假设:SIRT1能够抑制内皮细胞中ICAM-1的表达.实验发现,PMA和ionomycin(PMA/Io)能够在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中明显诱导SIRT1和ICAM-1的表达.而且,腺病毒介导的SIRT1过表达在HUVECs中能显著抑制PMA/Io诱导的ICAM-1的表达,而敲低SIRT1的表达则导致ICAM-1表达上调.双荧光素酶报告基因分析表明,过表达SIRT1抑制基础水平和PMA/Io诱导下的ICAM-1的启动子活性.进一步通过染色质免疫共沉淀(ChIP)实验发现,SIRT1参与转录复合物结合在ICAM-1启动子区,而且SIRT1的干扰能够提高NF-κB的亚基p65结合到ICAM-1启动子区的能力.总之,这些数据提示,SIRT1在内皮细胞中抑制ICAM-1表达的作用可能有助于其对抗动脉粥样硬化的发生.

关键词： SIRT1 ICAM-1 PMA和ionomycin

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检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 321-324页

作者：李宏帆刘兴荣衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果... 详细信息

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。

关键词：基因表达热休克基因内参照RNA 逆转录一聚合酶链反应 Jurkat细胞

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热休克诱导基因表达谱的变化

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中国医学科学院学报 2001年第4期23卷 361-364页

作者：王太宇吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究细胞在热应激时的基因表达谱变化。方法提取热休克前后Jurkat细胞的总RNA，经逆转录合成cDNA探针后分别与人cDNA表达点阵杂交，再用ESTblot软件进行分析，并用Northern印迹证明基因表达的改变。结果经42℃ 1h热休克的细胞中... 详细信息

目的研究细胞在热应激时的基因表达谱变化。方法提取热休克前后Jurkat细胞的总RNA，经逆转录合成cDNA探针后分别与人cDNA表达点阵杂交，再用ESTblot软件进行分析，并用Northern印迹证明基因表达的改变。结果经42℃ 1h热休克的细胞中有40个基因的mRNA表达升高，16个基因的mRNA表达降低。其中除热休克基因表达显著增加外，原癌基因c-Jun、cdc 样激酶CLK-1基因表达明显增加。整合素integrin α-4基因，转化生长因子TGF-β基因表达显著降低。Northern 印迹证明c-Jun及hsp90α基因表达升高。结论在热应激条件下Jurkat细胞热休克基因、c-Jun、CLK-1基因表达增加，integrin α-4基因、TGF-β基因表达减少。

关键词：人cDNA表达点阵热休克基因表达

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应用差异显示法研究低密度脂蛋白诱导内皮细胞差异表达基因

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中华医学杂志 2000年第10期80卷 784-786页

作者：张可满陈保生吴纲薛红曾武威中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　克隆、分离血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因素作用下差异表达的基因 ,了解动脉粥样硬化发生的分子机制。方法　培养血管内皮细胞系 (ECV30 4)在低密度脂蛋白 (LDL)的诱导下 ,用改进的差异显示聚合酶链反应 (PCR)技术分析表达水... 详细信息

目的　克隆、分离血管内皮细胞在致动脉粥样硬化因素作用下差异表达的基因 ,了解动脉粥样硬化发生的分子机制。方法　培养血管内皮细胞系 (ECV30 4)在低密度脂蛋白 (LDL)的诱导下 ,用改进的差异显示聚合酶链反应 (PCR)技术分析表达水平明显差异的cDNA。对差异显示基因进行序列测定和同源比较。用NorthernBlot证实差异显示基因片段。结果　LDL诱导ECV30 4细胞出现一些上调和下调表达的cDNA。已知的上调表达基因包括 10 0 0 0蛋白、FGFR1原癌基因伴随蛋白、rTSβ蛋白、FK5 0 6结合蛋白、细胞间粘附分子 1;下调表达的基因有fb19、Apobec 1结合蛋白 1、RBP2。不同的上调或下调基因表达水平变化在 70 %～ 2 0 0 %之间不等。结论　用差异显示 PCR方法证实LDL可诱导ECV30 4细胞许多基因表达水平的变化。高水平LDL作用于内皮细胞可引起炎性反应 ,影响动脉粥样硬化的早期发生。

关键词：基因表达 LDL 内皮细胞差异显示动脉粥样硬化

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维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型的建立

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药学学报 2005年第10期40卷 908-911页

作者：郭峰刘彦信郑德先蒋澄宇中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报... 详细信息

目的建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的以维甲酸受体为靶点的高通量药物筛选细胞模型,用于筛选治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)、银屑病、痤疮以及肿瘤的新型药物。方法用分子生物学的方法,构建含有8个串连维甲酸受体应答元件(RARE)并连接报告基因E-GFP的重组载体。将体外培养的细胞株用该重组载体进行稳定转染,然后进行单克隆培养,最终挑选出敏感、高效、稳定表达的单克隆细胞,用于筛选针对维甲酸受体的小分子有机药物。结果建立了高效的药物筛选细胞模型。此模型筛选方法简便,适用范围广,灵敏度高,结果稳定。结论挑选出的细胞株作为药物筛选模型可用于大规模高通量药物筛选。

关键词：维甲酸受体高通量药物筛选细胞模型

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抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达

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中国医学科学院学报 2008年第6期30卷 690-695页

作者：陈凤郭雅彬刘士廉郑德先刘彦信中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所北京肿瘤分子生物学实验室北京100142

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳... 详细信息

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。

关键词：抗死亡受体5嵌合抗体中国仓鼠卵巢细胞人IgG轻链人IgG重链

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微RNA-21在肝细胞癌中的表达及其靶基因研究

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中华实验外科杂志 2009年第8期26卷 964-966页

作者：刘长征蔡磊刘卫杨克恭何小东陈松森中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室 100005 北京协和医院

目的探讨微RNA（miRNA）．21在肝细胞癌中的表达特征及其功能，筛选并鉴定miRNA-21可能调控的靶基因。方法用PAGE／Northern blot方法分析miRNA-21在10例肝细胞癌患者组织标本中的表达特征，并在3种肝癌细胞株中加以验证。用生物信息学... 详细信息

目的探讨微RNA（miRNA）．21在肝细胞癌中的表达特征及其功能，筛选并鉴定miRNA-21可能调控的靶基因。方法用PAGE／Northern blot方法分析miRNA-21在10例肝细胞癌患者组织标本中的表达特征，并在3种肝癌细胞株中加以验证。用生物信息学分析预测miRNA-21可能的靶基因，通过逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）方法克隆靶基因的调控区序列，利用荧光素酶双报告基因系统筛选，并通过Western blot、流式细胞仪在蛋白质水平进行分析验证。用体外细胞侵袭实验分析miRNA-21与肝癌细胞侵袭能力的关系。结果miRNA-21在10例肝细胞癌患者中均表达上调，与癌旁组织比较，表达量增加10倍以上。在3种肝癌细胞株中也得到相似的结果。筛选并确认了RECK为miRNA-21的调控靶基因之一。抑制miRNA-21的表达可明显降低肝癌细胞的侵袭。结论miRNA-21在肝细胞癌中表达失控，通过抑制RECK表达促进肿瘤细胞侵袭。

关键词：癌,肝细胞 miRNA RECK 侵袭

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SLC30A3促进人髓性白血病细胞K562向早期红系分化

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基础医学与临床 2012年第7期32卷 773-777页

作者：董林范翠青朱宁陈梅红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究SLC30A3在红系分化中的作用。方法在人髓性白血病K562细胞系中用质粒载体过表达SLC30A3后,检测细胞红系分化指标CD235、ε-、γ-和β-珠蛋白的表达量及细胞增殖速度。流式细胞术检测CD235的表达,荧光实时定量PCR检测珠蛋白mRNA... 详细信息

目的研究SLC30A3在红系分化中的作用。方法在人髓性白血病K562细胞系中用质粒载体过表达SLC30A3后,检测细胞红系分化指标CD235、ε-、γ-和β-珠蛋白的表达量及细胞增殖速度。流式细胞术检测CD235的表达,荧光实时定量PCR检测珠蛋白mRNA水平,Western blot法检测转录因子GATA-2蛋白水平,MTS法检测细胞增殖速度。结果过表达SLC30A3使K562细胞的红系分化特异标志CD235的表达升高,CD235阳性细胞率由对照组的34.25%±16.89%增加至95.7%±0.14%(P<0.01),ε-、γ-和β-珠蛋白的表达明显升高,红系分化相关转录因子GATA-2的表达降低,细胞增殖速度加快。结论 SLC30A3促进人髓性白血病K562细胞系向早期红系分化。

关键词： SLC30A3 红系分化 K562细胞

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