检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2012年第4期29卷 618-621,F0004页

作者：倪冷刘昌伟刘暴宋伟李天佳王琳芳中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的构建携带目的基因B细胞淋巴瘤／白血病．xL（bcl—xL）的重组腺病毒并鉴定其功能。方法构建重组腺病毒pAdxsi—GFP-bcl—xL并体外感染人脐静脉内皮细胞，检测目的蛋白表达及氧化应激下细胞凋亡。结果重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—x... 详细信息

目的构建携带目的基因B细胞淋巴瘤／白血病．xL（bcl—xL）的重组腺病毒并鉴定其功能。方法构建重组腺病毒pAdxsi—GFP-bcl—xL并体外感染人脐静脉内皮细胞，检测目的蛋白表达及氧化应激下细胞凋亡。结果重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—xL构建成功，感染人脐静脉内皮细胞后可成功表达目的蛋白bcl—xL，膜联蛋白V／异硫氰酸荧光素（AnnexinV／FITC）荧光染色及碘化丙锭（PI）染色结果提示，在氧化应激下，重组腺病毒感染组早期及中晚期细胞凋亡率均较对照组（H2O2组）显著降低，两组早、中晚期凋亡率分别为（3．7±0．2）％、（10．3±0．5）％（P〈0．01）及（6．8±1．3）％、（18．3±2．8）％（P〈0．05）。结论成功构建重组腺病毒pAdxsi—GFP—bcl—xL，它可显著降低氧化应激介导的血管内皮细胞凋亡。

关键词： B细胞淋巴瘤白血病-xL 腺病毒脐静脉内皮细胞氧化应激

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人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

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科学通报 1999年第19期44卷 2088-2094页

作者：杜光伟潘美辉周严陈建和姚辉袁建刚强伯勤中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

通过筛选人胎儿脑cDNA文库 ,克隆了编码一个新的RNA结合蛋白的人cDNA ,命名为GRY RBP .人GRY RBPcDNA的长度为 2 932bp ,编码一个具 6 2 3个氨基酸 ,分子量为 6 9.6ku的RNA结合蛋白 .GRY RBP蛋白含有 3个RNA识别基序 (RNARecognitionmot... 详细信息

通过筛选人胎儿脑cDNA文库 ,克隆了编码一个新的RNA结合蛋白的人cDNA ,命名为GRY RBP .人GRY RBPcDNA的长度为 2 932bp ,编码一个具 6 2 3个氨基酸 ,分子量为 6 9.6ku的RNA结合蛋白 .GRY RBP蛋白含有 3个RNA识别基序 (RNARecognitionmotifs,RRMs)和一个富含甘氨酸 (G)、精氨酸 (R)、酪氨酸 (Y)的羧基端 .经数据库比较发现该蛋白与许多RRMRNA结合蛋白有较高的相似性 .还以鼠脑cDNA文库为模板 ,利用PCR扩增了鼠GRY RBPcDNA的全编码区和部分非编码区 .Northern杂交发现人GRY RBP在所检测的 8种成人组织中都有表达 ,在心脏。

关键词： cDNA RNA结合蛋白 GRY-RBP 克隆

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心钠素基因的突变及对其利尿活性的影响

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中华医学杂志 2002年第19期82卷 1324-1327页

作者：李涛梁红雁闫峰卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学北京100005

目的　提高心钠素的生物学活性。方法　通过改造心钠素基因、构建突变型心钠素基因的逆转录病毒载体以及用肌内注射法将突变型和非突变型心钠素基因表达载体的裸DNA分别导入阿霉素诱导的肾病大鼠体内 ,以对其突变前后的利尿活性进行比... 详细信息

目的　提高心钠素的生物学活性。方法　通过改造心钠素基因、构建突变型心钠素基因的逆转录病毒载体以及用肌内注射法将突变型和非突变型心钠素基因表达载体的裸DNA分别导入阿霉素诱导的肾病大鼠体内 ,以对其突变前后的利尿活性进行比较研究。结果　获得了结构和功能两方面均符合预期的突变型心钠素基因。与空载体组相比 [87± 7 1pg/ml(n =6 ) ],突变和野生型心钠素基因组大鼠 (n =6 )血浆中的心钠素浓度均在试验开始后的第 5d明显升高 ,分别为 10 7± 7 8pg/ml(t =4 6 5 ,P <0 0 1)和 113± 8 6pg/ml(t =5 71,P <0 0 1)。两个试验组大鼠的尿量在试验开始后的第 5d就明显增多 ,有效期达 15d以上。突变型心钠素基因的作用更强 ,其大鼠在第 5、10和 15d时的尿液增长量分别是野生型心钠素组的 1 6、2 0和 1 9倍。结论　所获突变型心钠素基因的利尿作用明显增强。

关键词：利尿活性心钠素基因疗法逆转录病毒载体心力衰竭

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带红系增强子的人β珠蛋白基因在转基因小鼠中的表达

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中华医学杂志 1998年第1期78卷 66-67页

作者：李政刘德培刘庆辉郭志晨章秋珩李志杰贾佩臣梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

带红系增强子的人β珠蛋白基因在转基因小鼠中的表达李政刘德培刘庆辉郭志晨章秋珩李志杰贾佩臣梁植权β４１／４２是印度次大陆、东南亚及我国南方常见的一种血红蛋白病，纯合子呈严重的β－地中海贫血。本实验旨在建立带红系，增强子... 详细信息

带红系增强子的人β珠蛋白基因在转基因小鼠中的表达李政刘德培刘庆辉郭志晨章秋珩李志杰贾佩臣梁植权β４１／４２是印度次大陆、东南亚及我国南方常见的一种血红蛋白病，纯合子呈严重的β－地中海贫血。本实验旨在建立带红系，增强子５′ＨＳ２的人β４１／４２珠蛋白基...

关键词：地中海贫血 β珠蛋白期转基因小鼠病理学

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全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

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癌症 2002年第5期21卷 473-479页

作者：张雪峰任祖渊方福德左瑾苏长保王任直马文斌中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科北京100730 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

背景与目的:细胞间缝隙连接通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplixvirusthymidinekinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinoticacid,ATRA)可能通过上调胶质瘤细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法:分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果:经3种浓度的ATRA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/LATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可以明显增强旁观者效应。

关键词：全反式维甲酸单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷胶质瘤基因治疗

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甲状腺激素受体在调节靶基因转录中的激活和抑制作用

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生命的化学 2009年第3期29卷 370-373页

作者：裘佳陈虹黄秉仁中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院国家医学分子生物学重点实验室北京100005

甲状腺激素((TH)在个体发育、维持内环境稳定、细胞增殖和分化方面均有广泛的作用。TH结合甲状腺激素受体(TR),包括TRα和TRβ。TR属于核激素受体超家族,调节正向和负向基因转录。在缺少配体时,TR结合特异DNA序列,通过和共抑制子相互作... 详细信息

甲状腺激素((TH)在个体发育、维持内环境稳定、细胞增殖和分化方面均有广泛的作用。TH结合甲状腺激素受体(TR),包括TRα和TRβ。TR属于核激素受体超家族,调节正向和负向基因转录。在缺少配体时,TR结合特异DNA序列,通过和共抑制子相互作用主动抑制转录。配体的结合导致TR结构改变,释放共抑制子并招募共激活子而激活转录。

关键词：甲状腺素甲状腺素受体转录共激活子共抑制子

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成骨不全症家系C0L1A1／2基因的大片段缺失突变分析

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中华医学遗传学杂志 2016年第4期33卷 431-434页

作者：汪涵赵秀丽任秀智肖继芳张学中国医学科学院基础医学研究所一北京协和医学院基础学院医学遗传学系、医学分子生物学国家重点实验室北京100005 天津市武清区人民医院 301700

目的在成骨不全症（osteogenesisimperfecta，OI）家系中进行COLlAl／e基因内大片段缺失突变的鉴定。方法应用多重连接探针扩增（multiplexligation-dependentprobeamplification，MLPA）方法对46例PCR-测序未见COLIAl／e基因突变的0I患者进行COL1A1／2基因大片段缺失突变检测，进一步应用荧光定量PCR或Gap—PCR-测序法对MLPA方法检测到的缺失突变进行验证。结果通过MLPA分析，在46例0I患者中检测到2例杂合性大片段缺失突变，先证者A为整个COL1A1基因的杂合缺失，先证者B为COL1A2基因第20外显子的杂合缺失；荧光定量PCR结果证实先证者A携带整个COLIAl基因的杂合缺失突变；Gap—PCR、DNA测序和凝胶电泳分析结果证实先证者B存在COLl4e基因内第17～23外显子的杂合缺失，断裂点区域有一个来自于5号染色体、长度637bp的DNA插入片段；先证者B家系成员突变验证显示其母亲为同一突变的杂合子。结论在中国人0I患者中发现了COL1A1和COL1A2基因的大片段缺失突变。本研究结果丰富了中国人群I型胶原相关OI致病基因突变谱，也为患病家系的产前基因诊断奠定了基础。

关键词：成骨不全症 COL1A1基因 COL1A2基因多重连接探针扩增大片段缺失

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应用荧光原位杂交技术检测人β~E珠蛋白基因在转基因小鼠染色体上的整合状态

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遗传 2001年第5期23卷 397-400页

作者：夏薇刘德培董文吉李斌郭志晨王晶李铁昌梁植权中国医学科学院基础医学研究医学所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中 ,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法 ,对小鼠腹腔注射秋水仙素后 ,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体 ,将传统的FISH方法加以改进 ,检测外源基因在转基因小鼠... 详细信息

为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中 ,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法 ,对小鼠腹腔注射秋水仙素后 ,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体 ,将传统的FISH方法加以改进 ,检测外源基因在转基因小鼠染色体上的整合状态。检测结果表明 ,外源人 βE 珠蛋白基因已稳定地整合于小鼠染色体上。FISH能直观地反映外源基因在转基因动物染色体上的整合状态 ,该方法可对转基因动物及基因转移研究中的外源基因整合后进行染色体定位检测。

关键词：荧光原位杂交技术人β^E珠蛋白基因转基因小鼠整合位点染色体

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主动免疫肌动蛋白样蛋白7a蛋白引起小鼠睾丸曲细精管的损伤

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中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 595-600页

作者：付俊宗书东缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 国家人口和计划生育委员会科学技术研究所生殖生理学实验室北京100081

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表... 详细信息

目的原核表达并纯化全长的人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)蛋白,检测主动免疫ACTL7a产生抗精子抗体后小鼠睾丸的损伤情况。方法构建重组表达质粒pET30a-ACTL7a,以重组质粒转化*** Rosseta(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂纯化和SDS-PAGE切胶分离目的蛋白,溶胶后以表达的ACTL7a蛋白免疫ICR小鼠。ELISA检测抗体效价,PAS染色检测主动免疫后曲细精管的发育。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a,纯化后免疫ICR小鼠,经PAS染色发现主动免疫ACTL7a的小鼠其睾丸曲细精管出现生精细胞脱落、核凝聚、生精细胞缺如、生精细胞退化等异常的管腔。结论成功构建了ACTL7a基因全长的原核表达载体,经诱导表达和纯化获得高纯度的目的蛋白。发现ACTL7a蛋白主动免疫ICR小鼠产生抗精子抗体后,小鼠睾丸的曲细精管发生严重损伤。

关键词：肌动蛋白样蛋白7a 表达纯化主动免疫抗精子抗体

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代谢型谷氨酸受体7基因的拷贝数变异与精神分裂症的相关性

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中国医学科学院学报 2009年第6期31卷 664-668页

作者：赵亚丽张克让许琪沈岩中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 山西医科大学第一医院精神卫生科太原030001

目的探讨代谢型谷氨酸受体7(GRM7)基因的拷贝数变异(CNVs)与精神分裂症的相关性。方法收集180例中国山西汉族精神分裂症患者和33名正常对照的DNA样本及资料。应用实时定量PCR方法检测位于GRM7基因外显子2上游200 bp处和外显子8附近的CNV... 详细信息

目的探讨代谢型谷氨酸受体7(GRM7)基因的拷贝数变异(CNVs)与精神分裂症的相关性。方法收集180例中国山西汉族精神分裂症患者和33名正常对照的DNA样本及资料。应用实时定量PCR方法检测位于GRM7基因外显子2上游200 bp处和外显子8附近的CNVs。同时对实时定量PCR扩增区的基因序列进行测序。结果相对拷贝数分析显示,在GRM7基因外显子2上游200 bp处,1例精神分裂症患者具有双等位基因缺失,13例患者和1名正常对照具有单个等位基因缺失。测序显示GRM7基因外显子2上游200 bp处实时定量PCR反向引物(GRM7-SV-1R)的3末'端上游第5个碱基发生了C>G变异,实时定量PCR扩增中发现的等位基因缺失均由碱基变异导致。结论实时定量PCR结合测序可以避免PCR引物序列变异导致的假阳性缺失,是检测CNVs的有效方法。本研究GRM7基因的CNVs与精神分裂症无相关性,提示GRM7基因的CNVs可能不是中国汉族精神分裂症发病的主要原因,然而其潜在的罕见CNVs可能和部分精神分裂症有关,有待于进一步研究。

关键词：精神分裂症代谢型谷氨酸受体7基因拷贝数变异

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