检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2019年第6期39卷 792-797页

作者：王珊珊彭小忠韩为中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探究粒细胞特异表达的HOXA转录本反义RNA1(HOTAIRM1)在胶质瘤干细胞中发挥的功能及分子机制。方法Real-timePCR检测HOTAIRM1在胶质瘤干细胞中的表达谱;肿瘤球形成实验和有限稀释实验检测过表达或敲低HOTAIRM1后胶质瘤干细胞自我更... 详细信息

目的探究粒细胞特异表达的HOXA转录本反义RNA1(HOTAIRM1)在胶质瘤干细胞中发挥的功能及分子机制。方法Real-timePCR检测HOTAIRM1在胶质瘤干细胞中的表达谱;肿瘤球形成实验和有限稀释实验检测过表达或敲低HOTAIRM1后胶质瘤干细胞自我更新能力;real-timePCR和Westernblot检测干性标志物的表达;双荧光素酶报告基因实验检测OCT4启动子活性。全反式维甲酸(ATRA)处理NB4急性早幼粒细胞白血病细胞和胶质瘤干细胞GSC2后检测HOTAIRM1表达。结果与对照组相比,过表达HOTAIRM1的胶质瘤干细胞自我更新能力呈显著上升(P<0.05);干性标志物NESTIN、OCT4及SOX2表达增加(P<0.05)。敲低HOTAIRM1则结果相反。过表达HOTAIRM1可促进OCT4启动子转录活性(P<0.05)。ATRA处理GSC2后HOTAIRM1表达下调(P<0.01)。结论HOTAIRM1通过调节OCT4表达维持胶质瘤干细胞的自我更新。

关键词：胶质瘤干细胞 HOTAIRM1 OCT4 自我更新

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酸性微环境驱动胶质瘤干细胞代谢重编程

酸性微环境驱动胶质瘤干细胞代谢重编程

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中国化学会第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会

作者：徐晓宇王丽萍臧清策韩为张瑞萍再帕尔·阿不力孜中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学国家重点实验室中央民族大学生物成像与系统生物学研究中心

代谢重编程是肿瘤的重要特征之一1,为适应自身生存的低氧、酸性或营养缺乏的微环境,肿瘤细胞会调动多种代谢方式进行能量代谢和生物合成代谢。代谢组学可以全面无偏的获取肿瘤中的代谢物信息,寻找肿瘤的异常代谢通路,为靶向肿瘤代谢治... 详细信息

代谢重编程是肿瘤的重要特征之一1,为适应自身生存的低氧、酸性或营养缺乏的微环境,肿瘤细胞会调动多种代谢方式进行能量代谢和生物合成代谢。代谢组学可以全面无偏的获取肿瘤中的代谢物信息,寻找肿瘤的异常代谢通路,为靶向肿瘤代谢治疗提供新靶点2,3。胶质母细胞瘤(世界卫生组织IV级神经胶质瘤)是最常见和致死性的恶性原发性脑肿瘤,复发率高,预后差,存在放化疗抵抗4。而神经胶质瘤干细胞与其放化疗抵抗紧密相关5,其主要特征之一是低p H的生存环境。众多证据表明酸性微环境可促进神经胶质瘤干细胞表型6。因此,从代谢水平角度研究酸性微环境对胶质瘤干细胞代谢表型的影响具有重要意义,其结果可为靶向抑制酸性微环境驱动的代谢改变提供重要依据。本研究以胶质瘤干细胞(GSCs)为观察对象,深入探究GSCs在酸性微环境下的代谢应答信息及可能的调控机制。本研究主要分为四个部分。第一部分:三种胶质瘤细胞(U87MG, T98G, A172)和正常星形胶质细胞(HA)的代谢组学研究。相比于HA,在三种胶质瘤细胞系中寻找到25个显著变化的差异代谢物,它们涉及谷胱甘肽代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢等重要的代谢途径。第二部分:在肿瘤细胞代谢改变的研究基础上,利用基于LC-MS的代谢组学技术研究GSCs酸性环境下的代谢重塑,获得了胶质瘤干细胞对酸性微环境的代谢应答信息。通过对差异代谢物的通路富集分析,进一步揭示了嘌呤核苷酸代谢、嘧啶核苷酸代谢以及谷胱甘肽代谢在胶质瘤尤其是GSCs中的重要作用。第三部分:建立了针对中心碳代谢及核苷酸代谢的代谢流分析方法。该方法通过13C全标的葡萄糖示踪其能量代谢和核苷酸合成的通量,利用15N全标的谷氨酰胺示踪核苷酸合成通量,最终发现酸性环境下嘌呤核苷酸的代谢及三羧酸循环在丰度和通量上均呈现上调。第四部分:由于嘌呤核苷酸的合成原料磷酸核糖主要是通过磷酸戊糖途径来提供,因此利用q PCR和Westernblot检测嘌呤核苷酸通路上的关键酶及磷酸戊糖途径的关键酶,发现6-磷酸葡萄糖脱氢酶在酸性环境下高表达;此外细胞功能学实验证明了嘌呤核苷酸对GSCs的重要作用。本研究表明,胶质瘤干细胞在酸性微环境中是通过上调磷酸戊糖途径的关键酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,为嘌呤核苷酸的从头合成提供5-磷酸核糖,驱动胶质瘤干细胞嘌呤合成的上调,维持细胞干性和自我更新能力;同时胶质瘤干细胞会调动能量代谢,通过上调三羧酸循环通路,为胶质瘤适应自身生存的酸性微环境提供能量。

关键词：代谢组学胶质瘤干细胞酸性微环境代谢重编程

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酸性微环境驱动胶质瘤干细胞代谢重编程

酸性微环境驱动胶质瘤干细胞代谢重编程

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第二十届全国有机分析及生物分析学术研讨会

作者：徐晓宇王丽萍臧清策韩为张瑞萍再帕尔·阿不力孜中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京 100050 中国医学科学院/北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学国家重点实验室北京 100005 中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室北京 100050 中央民族大学生物成像与系统生物学研究中心北京 100081

代谢重编程是肿瘤的重要特征之一1,为适应自身生存的低氧、酸性或营养缺乏的微环境,肿瘤细胞会调动多种代谢方式进行能量代谢和生物合成代谢.代谢组学可以全面无偏的获取肿瘤中的代谢物信息,寻找肿瘤的异常代谢通路,为靶向肿瘤代谢治疗... 详细信息

代谢重编程是肿瘤的重要特征之一1,为适应自身生存的低氧、酸性或营养缺乏的微环境,肿瘤细胞会调动多种代谢方式进行能量代谢和生物合成代谢.代谢组学可以全面无偏的获取肿瘤中的代谢物信息,寻找肿瘤的异常代谢通路,为靶向肿瘤代谢治疗提供新靶点2,3.胶质母细胞瘤(世界卫生组织Ⅳ级神经胶质瘤)是最常见和致死性的恶性原发性脑肿瘤,复发率高,预后差,存在放化疗抵抗4.

关键词：代谢组学胶质瘤干细胞酸性微环境代谢重编程

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RNA结合蛋白KSRP在急性髓系白血病(AML)M5型细胞中的功能

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基础医学与临床 2018年第6期38卷 821-826页

作者：王小爽于姗何金蓉余佳中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨RNA结合蛋白KSRP在不同类型急性髓系白血病(AML)中的表达,并研究KSRP对AML细胞增殖的调控功能。方法利用基因表达汇编(GEO)数据集和癌基因组图谱(TCGA)的数据分析KSRP在AML中的表达水平;在人外周血的单核细胞系(THP-1)中利用慢... 详细信息

目的探讨RNA结合蛋白KSRP在不同类型急性髓系白血病(AML)中的表达,并研究KSRP对AML细胞增殖的调控功能。方法利用基因表达汇编(GEO)数据集和癌基因组图谱(TCGA)的数据分析KSRP在AML中的表达水平;在人外周血的单核细胞系(THP-1)中利用慢病毒传导分别抑制KSRP的内源表达或者过表达miR-129,检测细胞的增殖和凋亡。结果 KSRP在t(15;17)型急性早幼粒细胞白血病中低表达,而在混合谱系白血病(MLL)易位的急性单核细胞白血病或急性粒-单核细胞白血病中高表达。抑制内源KSRP的表达后显著抑制了THP-1细胞的增殖(P<0.01)而促进细胞凋亡(P<0.01)。过表达miR-129后促进THP-1细胞的增殖(P<0.05)。结论KSRP通过促进miR-129的加工调控AML-M5型细胞的增殖。

关键词： KSRP RNA结合蛋白 miR-129 细胞增殖急性髓系白血病

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胶质瘤中PTB调控长非编码RNA选择性剪接的筛选

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基础医学与临床 2018年第6期38卷 787-792页

作者：卫群芳朱丽媛韩为彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的探究在神经胶质瘤发生发展过程中PTB调控选择性剪接的长非编码RNA。方法全转录组芯片分析筛选受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA。提取胶质瘤和正常细胞系及临床病例组织样品和敲低PTB的神经胶质瘤细胞总RNA,实时荧光定量PC... 详细信息

目的探究在神经胶质瘤发生发展过程中PTB调控选择性剪接的长非编码RNA。方法全转录组芯片分析筛选受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA。提取胶质瘤和正常细胞系及临床病例组织样品和敲低PTB的神经胶质瘤细胞总RNA,实时荧光定量PCR验证候选基因不同剪接异构体的表达及比值变化。核质分离实验鉴定长非编码RNA细胞定位。结果筛选出16条受PTB蛋白介导影响选择性剪接的长非编码RNA,其中linc00882的不同剪接异构体的表达模式受PTB调控所产生的差异最明显。检测到linc00882定位于细胞质。结论神经胶质瘤中PTB蛋白参与长非编码RNA linc00882的选择性剪接。

关键词：选择性剪接长非编码RNA PTB 神经胶质瘤

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利用CRISPR/Cas9构建R778L类型肝豆状核变性疾病小鼠模型

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基础医学与临床 2018年第12期38卷 1702-1707页

作者：朱基彦瞿思遥张祝琴刘德培中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统构建针对人肝豆状核变性R778L突变类型的R780L突变小鼠。方法通过BLAST比对人和小鼠中ATP7B基因和蛋白的序列,证明二者保守性。通过CRISPR/Cas9系统进行小鼠受精卵显微注射,并对小鼠肝豆状核变性... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9介导的基因编辑系统构建针对人肝豆状核变性R778L突变类型的R780L突变小鼠。方法通过BLAST比对人和小鼠中ATP7B基因和蛋白的序列,证明二者保守性。通过CRISPR/Cas9系统进行小鼠受精卵显微注射,并对小鼠肝豆状核变性症状进行病理和生理学检测。结果人和小鼠中ATP7B基因和蛋白的序列高度保守。通过CRISPR/Cas9技术成功获得纯合的R780L突变小鼠,该小鼠存在明显的肝脏铜离子淤积以及血清ALT、AST的升高且未发现有可检测出的脱靶效应。结论成功利用CRISPR/Cas9介导的基因敲入系统构建了针对人肝豆状核变性R778L类型的R780L突变小鼠模型。

关键词：肝豆状核变性 CRISPR/Cas9 点突变R778L 小鼠模型

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基于微小RNA架构的新型随机短发夹RNA文库构建

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中国医学科学院学报 2017年第4期39卷 518-524页

作者：郭倩朱宁卜萌萌郭思超闫雪静陈倩陈梅红中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建高效发夹状随机短发夹RNA(shRNA)文库。方法构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制... 详细信息

目的构建高效发夹状随机短发夹RNA(shRNA)文库。方法构建由polⅡ启动子(CMV)驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)下游连接shRNA的表达载体,转染细胞后收取蛋白,用Western blot和荧光素酶报告基因系统检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效率。在由CMV启动的EGFP下游连接shRNA的表达载体基础上,构建EGFP下游连接基于微小RNA(miRNA)架构的shRNA表达载体,转染细胞后收取RNA,用实时定量荧光PCR法检测该载体表达的shRNA对靶基因表达的抑制效果。基于EGFP下游连接基于miRNA架构的shRNA表达载体实时定量荧光PCR的检测结果,构建基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结果由polⅡ启动子(CMV)驱动发夹状shRNA转录时,shRNA要位于一个大的转录本之后才能被有效转录。基于miRNA架构环境可提高shRNA的干扰效率。构建了一个容量为1.8×10~7的基于miRNA架构的大容量随机shRNA文库。结论构建了一个大容量的新型随机shRNA文库。

关键词：微小RNA 短发夹RNA 随机文库

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Zika病毒NS3具有依赖于ATP水解的dsDNA解链活性

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基础医学与临床 2018年第5期38卷 674-678页

作者：徐杉王蕾杰石磊中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究Zika病毒NS3蛋白是否具有依赖于ATP水解的ds DNA解链活性。方法构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21菌株中表达带有His标签的Zika NS3蛋白,并用Ni琼脂糖珠进行纯化;利用ATPase检测试剂盒对NS3的ATP水解活性进行检测;利用荧光共振... 详细信息

目的研究Zika病毒NS3蛋白是否具有依赖于ATP水解的ds DNA解链活性。方法构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21菌株中表达带有His标签的Zika NS3蛋白,并用Ni琼脂糖珠进行纯化;利用ATPase检测试剂盒对NS3的ATP水解活性进行检测;利用荧光共振能量转移(FRET)原理,对NS3的ds DNA解链活性进行实时动力学检测;利用定点突变方法将NS3蛋白的第198位甘氨酸(G)突变为丙氨酸(A),得到G198A突变体,检测其是否影响NS3解旋酶活性。结果 Zika NS3蛋白在体外可以水解ATP,酶解最大反应速率为2.76μmol/(L·min),Km值为0.11 mmol/L;Zika NS3蛋白在体外可以解链ds DNA;G198A突变体与野生型相比,ATP水解速率和ds DNA的解链速率均明显减弱。结论 Zika NS3蛋白在体外具有ATP水解活性以及ds DNA解链活性,且第198位甘氨酸对于NS3酶活性至关重要。

关键词： Zika病毒 NS3蛋白 ATP dsDNA 解旋酶

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CRISPR/Cas9基因编辑系统研究进展

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基础医学与临床 2018年第4期38卷 543-547页

作者：程成舒鹏程彭小忠中国医学科学院北京协和医学院北京100005 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005

CRISPR/Cas9基因编辑系统被广泛应用于生物学及医学各领域。该系统可在RNA的引导下对特定DNA位点进行靶向编辑。脱靶效应和编辑效率是该系统面临的两大问题。目前已有诸多研究从减少脱靶效应和提高编辑效率的方面对该系统进行优化,将有... 详细信息

CRISPR/Cas9基因编辑系统被广泛应用于生物学及医学各领域。该系统可在RNA的引导下对特定DNA位点进行靶向编辑。脱靶效应和编辑效率是该系统面临的两大问题。目前已有诸多研究从减少脱靶效应和提高编辑效率的方面对该系统进行优化,将有助于其安全性的提升及应用范围的拓展。

关键词： CRISPR/Cas9 基因编辑脱靶效应编辑效率

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Dysbindin-1B^(+/+)小鼠海马凋亡及认知功能

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中国医学科学院学报 2017年第3期39卷 307-311页

作者：杨微许琪中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的观察人源特异性表达dysbindin-1B^(+/+)(dys1B)小鼠的组织学及行为学表现。方法建立dys1B转基因小鼠,采用TUNEL法检测野生型(WT)和dys1B小鼠海马脑区凋亡情况,并在电镜下观察WT和dys1B小鼠海马区的凋亡情况,旷场实验和T迷宫实验观... 详细信息

目的观察人源特异性表达dysbindin-1B^(+/+)(dys1B)小鼠的组织学及行为学表现。方法建立dys1B转基因小鼠,采用TUNEL法检测野生型(WT)和dys1B小鼠海马脑区凋亡情况,并在电镜下观察WT和dys1B小鼠海马区的凋亡情况,旷场实验和T迷宫实验观测小鼠在新环境中的自主活动能力、焦虑程度及空间记忆能力。结果 dys1B小鼠海马区神经元凋亡率明显高于WT小鼠(t=12.98,P<0.0001),且在电镜下有凋亡中期和晚期表现。旷场实验结果显示,dys1B小鼠的总运动距离为(2887±376)cm,明显低于WT小鼠的(3632±606)cm(t=2.993,P=0.0122);中心活动时间为(64.22±14.67)s,明显少于WT小鼠的(114.00±34.09)s(t=4.649,P=0.0023)。T迷宫实验结果显示,forced run与test run间隔60和180 s时,dys1B小鼠的正确率分别为(70.40±15.17)%和(59.28±9.10)%,明显低于WT小鼠的(91.67±13.94)%(t=3.261,P=0.0258)和(83.33±14.89)%(t=3.687,P=0.0291);间隔15 s时,dys1B小鼠和WT小鼠的正确率差异无统计学意义[100%比(94.45±6.08)%;t=0.851,P=0.0756]。结论 dys1B表达可引起小鼠海马区细胞凋亡并可导致自主活动能力降低,焦虑程度增加,空间记忆能力障碍。

关键词： dysbindin-1 细胞凋亡自主活动焦虑程度认知障碍

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