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Identification of CDK6 and RHOU in Serum Exosome as Biomarkers for the Invasiveness of Non-functioning Pituitary Adenoma

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Chinese Medical Sciences Journal 2019年第3期34卷 168-176页

作者：于姗王小爽曹开灿包新杰余佳中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室RNA与造血调控重点实验室生物化学与分子生物学系南方医科大学南方医院胸外科中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院神经外科

Objective To explore circulating biomarkers for screening the invasiveness of non-functioning pituitary adenomas(NF-PAs).Methods The exosomal RNAs were extracted from serum of patients with invasive NF-PA(INF-PA)or noninvasive NF-PA(NNF-PA).Droplet digital PCR was adapted to detect the mRNA expression of candidate genes related to tumor progression or invasion,such as cyclin dependent kinase 6(CDK6),ras homolog family member U(RHOU),and spire type actin nucleation factor 2(SPIRE2).Student’s t-test was used to analyze the statistical difference in the mRNA expression of candidate genes between the two *** operating characteristic(ROC)curve was used to establish a model for predicting the invasiveness of *** accuracy,sensitivity,specificity and precision of the model were then obtained to evaluate the diagnostic *** CDK6(0.2600±0.0912 vs.0.1789±0.0628,t=3.431,P=0.0013)and RHOU mRNA expressions(0.2696±0.1118 vs.0.1788±0.0857,t=2.946,P=0.0052)were upregulated in INF-PAs patients’serum exosomes as compared to *** CDK6,the area under the ROC curve(AUC)was 0.772(95%CI:0.600-0.943,P=0.005),the accuracy,sensitivity,specificity and precision were 77.27%,83.33%,75.00%and 55.56%to predict the invasiveness of *** RHOU,the AUC was 0.757(95%CI:0.599-0.915,P=0.007),the accuracy,sensitivity,specificity and precision were 72.73%,83.33%,68.75%and 50.00%.In addition,the mRNA levels of CDK6 and RHOU in serum exosomes were significantly positively correlated(r=0.935,P<0.001).After combination of the cut-off scores of the two genes,the accuracy,sensitivity,specificity and precision were 81.82%,83.33%,81.25%and 62.50%.Conclusions CDK6 and RHOU mRNA in serum exosomes can be used as markers for predicting invasiveness of *** of the two genes performs better in distinguishing INF-PAs from *** results indicate CDK6 and RHOU play important roles in the invasiveness of NF-PAs,and the established diagnostic method is valua

关键词： pituitary adenoma invasiveness exosome droplet digital PCR biomarkers RHOU CDK6

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RNA结合蛋白作为氯福克酚药靶的机制初探

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基础医学与临床 2020年第5期40卷 621-626页

作者：张美莲王志星胡艳冉坤念韩为彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探索氯福克酚靶向RNA结合蛋白的抗胶质瘤机制。方法Biotin pull-down实验检测RNA结合蛋白N-ras上游蛋白(UNR)与靶基因Krüppel样因子13(KLF13)mRNA各片段的结合,以及氯福克酚对UNR与下游靶基因KLF13 mRNA片段结合能力的影响;氯... 详细信息

目的探索氯福克酚靶向RNA结合蛋白的抗胶质瘤机制。方法Biotin pull-down实验检测RNA结合蛋白N-ras上游蛋白(UNR)与靶基因Krüppel样因子13(KLF13)mRNA各片段的结合,以及氯福克酚对UNR与下游靶基因KLF13 mRNA片段结合能力的影响;氯福克酚靶点稳定性的药物亲和反应(DARTS)样品质谱检测结果与转录组芯片分析相结合,筛选其他RNA结合蛋白作用靶点,并对其他下游靶基因进行预测分析。结果氯福克酚可以增强UNR与KLF13 mRNA片段的结合;氯福克酚还可与其他RNA结合蛋白相互作用,参与mTOR信号通路以及由肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)激活的凋亡信号通路。结论氯福克酚可通过作用于RNA结合蛋白而起到抗胶质瘤的效果。

关键词：氯福克酚胶质瘤 UNR KLF13 mRNA RNA结合蛋白

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利用经典的Zbed3敲除鼠探索ZBED3在小鼠大脑皮质发育过程中的作用

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基础医学与临床 2020年第7期40卷 948-954页

作者：孙长杰舒鹏程彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的利用敲除鼠探索锌指BED结构域超家族成员ZBED3在小鼠皮质发育过程中的作用。方法利用原位杂交和免疫荧光技术检测Zbed3敲除鼠的敲除效率。利用免疫荧光技术检测Zbed3敲除对小鼠皮质神经前体细胞增殖的影响。利用EdU标记技术和免疫... 详细信息

目的利用敲除鼠探索锌指BED结构域超家族成员ZBED3在小鼠皮质发育过程中的作用。方法利用原位杂交和免疫荧光技术检测Zbed3敲除鼠的敲除效率。利用免疫荧光技术检测Zbed3敲除对小鼠皮质神经前体细胞增殖的影响。利用EdU标记技术和免疫荧光技术检测Zbed3敲除对皮质层次形成的影响。利用RT-qPCR和免疫印迹技术探索Zbed3敲除鼠中其他分子的表达变化。结果Zbed3敲除鼠中检测不到Zbed3 mRNA和蛋白的表达。Zbed3敲除不影响神经祖细胞增殖和皮质层次形成。在Zbed3敲除鼠中,β-catenin的表达水平上调。结论Zbed3敲除对小鼠皮质发育无明显影响。

关键词： Zbed3 皮质发育经典Wnt信号通路 β-catenin

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重新认识真实世界数据研究:更新与展望

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中国循证医学杂志 2020年第11期20卷 1241-1246页

作者：王雯谭婧任燕李玲沈传勇田春华宋海波王涛高培彭晓霞温泽淮舒啸尘王丽刘梅何俏邹康孙鑫四川大学华西医院中国循证医学中心成都610041 国家药品监督管理局药品评价中心北京100000 北京大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系北京100191 国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院临床流行病学与循证医学中心北京100045 广东省中医院临床研究方法学重点研究室广州510120 苏州大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系江苏苏州215123 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病学系北京100005

真实世界数据研究近年来发展迅速,但目前对其认识和理解仍然还存在诸多误区。为推动真实世界数据研究的标准化,本文对真实世界数据的分类进行了更新和进一步明确,提出了真实世界数据研究的两种常用模式,构建了研究型数据体系框架,尤其... 详细信息

真实世界数据研究近年来发展迅速,但目前对其认识和理解仍然还存在诸多误区。为推动真实世界数据研究的标准化,本文对真实世界数据的分类进行了更新和进一步明确,提出了真实世界数据研究的两种常用模式,构建了研究型数据体系框架,尤其厘清了对登记数据库的误区和问题,对真实世界数据研究的未来发展方向进行了展望。

关键词：真实世界数据与研究研究型数据体系标准化

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新型冠状病毒(2019-nCoV)感染患者肺损伤相关的临床及生化指标研究

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中国科学：生命科学 2020年第3期50卷 258-269页

作者：刘映霞杨扬张聪黄凤鸣王福祥袁静王召钦李金秀李建明冯程张政王力非彭凌陈莉秦宇豪赵丹丹谭曙光尹路徐军周丛照蒋澄宇刘磊南方科技大学附属第二医院深圳市第三人民医院国家感染性疾病临床医学研究中心深圳市病原微生物与免疫重点实验室感染病国家重点学科深圳518112 中国科学技术大学合肥微尺度物质科学国家实验室生命科学学院合肥230027 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国科学院微生物研究所北京100101 北京协和医院急诊科北京100731

Ⅱ新型冠状病毒(2019-n Co V)2019年12月在湖北省武汉市暴发,并迅速传播到中国多地及其他国家.在本研究中,我们报告了来自中国深圳早期的2019-n Co V感染患者的流行病学、临床指标、生化指标和影像学特征,以及可用于预测疾病严重程度的... 详细信息

Ⅱ新型冠状病毒(2019-n Co V)2019年12月在湖北省武汉市暴发,并迅速传播到中国多地及其他国家.在本研究中,我们报告了来自中国深圳早期的2019-n Co V感染患者的流行病学、临床指标、生化指标和影像学特征,以及可用于预测疾病严重程度的潜在生物标记物.所有12例2019-n Co V感染患者均发展为肺炎,其中一半患者进一步发展为急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS).最常见的生化指标异常是低白蛋白(albumin, ALB)血症、淋巴细胞(lymphocytes, LYM)计数减少、淋巴细胞百分比和中性粒细胞(neutrophils, NEU)百分比降低、C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平升高,以及CD8细胞计数降低.从患者呼吸道特别是下呼吸道检测到的2019-n Co V病毒滴度与肺部疾病的严重程度正相关. ALB,LYM, LYM(%), LDH, NEU(%)和CRP的水平与急性肺损伤程度高度相关.年龄、病毒滴度、肺损伤评分和血液生化指标(ALB, CRP, LDH, LYM(%), LYM及NEU(%))可能是疾病严重程度的预测指标.此外, 2019-n Co V感染患者的血浆血管紧张素Ⅱ水平显著升高,并且与病毒滴度和肺损伤程度线性相关.该研究结果提供了多种潜在的可用于诊断的生物标志物,并提出了血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂(angiotensin Ⅱ receptor blocker, ARB)药物或可作为治疗2019-n Co V感染的潜在药物进行深入研究.

关键词： 2019-nCoV 血管紧张素Ⅱ 急性呼吸窘迫综合征

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突触黏附分子NECL4对大脑皮质Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路的影响

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基础医学与临床 2020年第7期40卷 929-933页

作者：胡耕刘枭舒鹏程彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室医学灵长类研究中心神经科学中心北京100005 中国医学科学院医学生物学研究所云南昆明650118

目的探究突触黏附分子NECL4对Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路和树突棘数量的影响。方法以Necl4全身性敲除小鼠为研究对象,对8周龄的Necl4野生(WT)及敲除(KO)小鼠脑组织进行高尔基染色,对大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘密度... 详细信息

目的探究突触黏附分子NECL4对Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路和树突棘数量的影响。方法以Necl4全身性敲除小鼠为研究对象,对8周龄的Necl4野生(WT)及敲除(KO)小鼠脑组织进行高尔基染色,对大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘密度进行统计。通过Western blot和RT-qPCR实验对Ca^2+-CaMKII信号通路及其下游信号分子的蛋白和mRNA表达水平进行检测,包括CDC42、Rac1、RhoA、H-Ras、ERK等信号蛋白。结果高尔基染色结果显示,Necl4敲除小鼠大脑皮质第Ⅱ/Ⅲ层椎体神经元二级树突上树突棘数量与野生型小鼠相比减少(P<0.01)。Western blot实验结果显示CaMKIIα(P<0.05)及phospho-CaMKIIα(Thr286)(P<0.05)在Necl4敲除小鼠中表达降低,CaMKIIα的下游信号分子CDC42的mRNA水平(P<0.05)和蛋白水平(P<0.05)在Necl4敲除小鼠中均表达降低。结论NECL4通过Ca^2+-CaMKII-CDC42信号通路对小鼠大脑皮质树突棘数量进行调控。

关键词： NECL4 树突棘 CaMKIIα CDC42 ERK

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饲养层细胞作用机制研究进展

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基础医学与临床 2019年第7期39卷 1066-1070页

作者：周芳颖刘玉琴中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所病理系

饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其他哺乳动物细胞的体外培养,通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同,可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法,或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良... 详细信息

饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其他哺乳动物细胞的体外培养,通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同,可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法,或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良,从而达到最佳的培养效果。

关键词：饲养层细胞基因修饰干细胞诱导多能干细胞

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Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株的建立

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中华肿瘤杂志 2018年第8期40卷 572-579页

作者：左春霞卞晓翠杨振丽冯海凉周芳颖刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌... 详细信息

目的建立Cas9蛋白稳定表达的人肝胆癌细胞株，并验证Cas9的基因编辑活性，以便利用CRISPR/Cas9系统开展肝胆细胞基因编辑的研究。方法在人肝癌细胞（Huh7、PLC/PRF/5、HepG2、Hep3b、SK-HEP-1和Li-7）、人胆管癌细胞（RBE）和人胆囊癌细胞（GBC-SD）中，分别感染Cas9表达质粒pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo、pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro和Cas9m1.1，挑选单细胞克隆培养扩增。提取基因组DNA和总蛋白后，通过基因组聚合酶链反应（PCR）和Western blot验证Cas9的稳定表达。选取其中3个细胞株并感染Lv-EF1α-mCherry，流式细胞术分选出mCherry阳性的细胞，再通过慢病毒感染靶向mCherry基因的向导RNA，细胞扩增后，通过基因组PCR、荧光显微镜下观察和流式细胞术检测mCherry被敲除的情况。结果筛选到100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中表达Cas9-Neo的细胞35株，表达Cas9-Puro的细胞25株，表达突变型Cas9的细胞40株。建立了3株mCherry稳定表达的细胞系Huh7-mCas9-M、PLC/PRF/5-Cas9-M和SK-HEP-1-Cas9-M。基因组PCR和测序显示，同时感染2种gRNA的细胞基因组内存在mCherry片段缺失。荧光显微镜下，同时感染2种gRNA的细胞可以观察到mCherry－EGFP＋细胞。流式细胞仪检测结果显示，mCherry－EGFP＋细胞占0.3%～93.6%。结论成功建立了100个Cas9稳定表达的人肝胆癌细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。

关键词：肝细胞癌胆管癌胆囊肿瘤基因编辑 CRISPR/Cas9 细胞株

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捕获和连接探针PCR与巢氏PCR检测疟原虫效果的比较

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中国病原生物学杂志 2020年第6期15卷 682-684,707页

作者：林祖锐周耀武孙晓东徐艳春陈梦妮郑直云南省寄生虫病防治所云南省疟疾研究中心云南省虫媒传染病防控研究重点实验室云南省虫媒传染病防控关键技术创新团队(培育)面向东南亚热带病国际科技人才教育培训基地云南普洱665000 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院

目的了解捕获与连接探针PCR(CLIP-PCR)对疟原虫的确认诊断效果。方法云南省疟疾诊断参比实验室提供的血涂片镜检阴性和阳性者滤纸血样各70份,分别进行盲法CLIP-PCR和巢氏PCR检测,以巢氏PCR为金标准评价CLIP-PCR的检测效果及检测耗时,血... 详细信息

目的了解捕获与连接探针PCR(CLIP-PCR)对疟原虫的确认诊断效果。方法云南省疟疾诊断参比实验室提供的血涂片镜检阴性和阳性者滤纸血样各70份,分别进行盲法CLIP-PCR和巢氏PCR检测,以巢氏PCR为金标准评价CLIP-PCR的检测效果及检测耗时,血样梯度稀释后测定CLIP-PCR最低检出阈值。结果检测140份血样,2种PCR检出假阳性和假阴性各1例,CLIP-PCR检测疟原虫的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和诊断准确度均为98.57%,kappa值为0.97;CLIP-PCR耗时13.91 h,较巢氏PCR耗时23.47 h缩短40.73%;梯度稀释后重复检测8次,≥3.2个虫/μl血检出率100%,0.32个虫/μl血检出率50%。结论CLIP-PCR检测疟原虫效果与巢氏PCR相同,重复性良好,更适用于大规模人群筛查。

关键词：疟原虫捕获与结合探针PCR 巢氏PCR 检测评价

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2019年农村上消化道癌早诊早治项目内镜医师专业技术能力及其影响因素分析

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中国肿瘤 2021年第6期30卷 445-451页

作者：李纪宾魏文强张立玮刘玉琴王家林贾尚春张韶凯乔良杜灵彬周金意张永贞王贵齐国家癌症中心/国家肿瘤临床医学研究中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院北京100021 河北医科大学第四医院河北石家庄050011 甘肃省肿瘤医院甘肃兰州730050 山东大学附属山东省肿瘤医院山东济南250117 安徽省疾病预防控制中心安徽合肥230061 郑州大学附属肿瘤医院河南省肿瘤医院河南省肿瘤防治研究办公室河南郑州450008 四川省肿瘤医院·研究所四川省癌症防治中心电子科技大学医学院四川成都610041 中国科学院大学附属肿瘤医院(浙江省肿瘤医院)中国科学院基础医学与肿瘤研究所浙江杭州310022 江苏省疾病预防控制中心江苏南京210009 山西省肿瘤医院山西太原030013

[目的]探究农村上消化道癌早诊早治项目筛查内镜医师专业技术能力现状及其影响因素。[方法]由农村上消化道癌早诊早治项目专家组依据国家现行技术方案和项目实践编写考核试题库,并利用"早诊早治"APP建立考试平台,收集2019年... 详细信息

[目的]探究农村上消化道癌早诊早治项目筛查内镜医师专业技术能力现状及其影响因素。[方法]由农村上消化道癌早诊早治项目专家组依据国家现行技术方案和项目实践编写考核试题库,并利用"早诊早治"APP建立考试平台,收集2019年参加农村上消化道癌早诊早治项目的内镜医师基本情况,并对内镜医师技术方案掌握情况和内镜诊疗技术能力进行考核,计算考核优秀率。采用多因素Logistic回归模型分析影响考核优秀率的因素。[结果]共3207名内镜医师完成考核,考核平均分(72.60±15.07)分,合格率87.25%,优秀率33.80%。内镜医师对"人群筛查数据管理和安全"相关内容答题平均正确率最高,为99.16%,对"人群筛查评价指标"内容答题平均正确率最低,为59.73%。多因素Logistic回归分析提示,性别、年龄、文化程度、职称、参加项目时长、所在地区和对技术方案理解程度与考核优秀率相关,女性、年龄小于40岁、研究生文化程度、主治医师及以上职称、参加项目2年及以上、东中部地区以及完全理解技术方案的内镜医师考核优秀率相对较高(P均<0.05)。[结论]我国农村上消化道癌筛查内镜医师基本能够掌握技术方案,但总体优秀率偏低,应针对技术能力水平较低的内镜医师和掌握薄弱的技术环节加强培训。

关键词：上消化道癌筛查内镜检查考核早诊早治农村地区中国

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