检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 1999年第2期79卷 121-124页

作者：翟锦彬刘德培王晶陈迪郑勇梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用... 详细信息

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用回体（ｅｘｖｉｖｏ）基因转移策略，分析人β珠蛋白基因在小鼠体内的整合及表达。结果病毒重组体的病毒滴度在“乒乓”超感染后有明显提高，最高病毒滴度约为１×１０６ＣＦＵ／ｍｌ；在小鼠ＣＦＵＳ１２（第１２天脾结节）中检测到２个重组体中人β珠蛋白基因的整合，表达水平约为内源性鼠α珠蛋白基因的０５％～５％。在２只长期造血重建小鼠的骨髓、脾、胸腺及另一只小鼠的骨髓及脾中整合有人β珠蛋白基因，在一只重建小鼠的骨髓和脾中有人β珠蛋白基因表达，约为鼠α珠蛋白基因的７％。结论反转录病毒载体介导的人β珠蛋白基因可稳定整合在小鼠骨髓造血干细胞中。

关键词：珠蛋白基因表达 β地中海贫血

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逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第3期31卷 15-20页

作者：臧梦维沈琦汪青刘景生彭学贤中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院、医学分子生物学国家重点实验室中国科学院微生物研究所

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８... 详细信息

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８１５神经细胞，获得Ｇ４１８抗性克隆，命名为ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞。ＤＮＡ印迹杂交、ＰＣＲ扩增及ＲＴＰＣＲ和蛋白质免疫印迹杂交分析，证实ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞有外源ｉＮＯＳ基因整合、转录和表达；ＮＡＤＰＨ黄递酶（ＮＡＤＰＨｄｉａｐｈｏｒａｓｅ，ＮＡＤＰＨｄ）组化和免疫组化染色表明，胞质中有ｉＮＯＳ基因功能表达；酶催化活性和ＮＯ－２含量均明显升高；重组酶具有天然酶生化和药理特性，即ＮＡＤＰＨ依赖性，Ｃａ２＋非依赖性和Ｃａ２＋螯合剂抗性以及ＮＯＳ抑制剂使酶活性降低，呈剂量相关性；ｉＮＯＳ基因表达使ＮＯｃＧＭＰ系统上调。成功地建立ｉＮＯＳ基因修饰神经细胞株，为寻找治疗阿片耐受和依赖的新药创造了条件。

关键词：一氧化氮合酶逆转录病毒环磷酸鸟苷神经母细胞瘤细胞株

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人Aγ-珠蛋白基因-173T→C突变对启动子功能的影响

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 252-256页

作者：黄小东张俊武阳学贤王以弘赵华路中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１与... 详细信息

目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１与突变启动子片段（－２０１～－１５８）的结合降低了９６％（Ｐ＜００１），并且使Ｏｃｔ１与相同的ＤＮＡ片段的结合降低５５％（Ｐ＜００５）。在ＭＥＬＧＭ９７９细胞中，突变启动子活性是正常启动子的２倍（Ｐ＜００５）；在Ｋ５６２和Ｈｅｌａ细胞中，突变和正常启动子活性基本相同。结论　Ａγ启动子－１７３Ｔ→Ｃ突变导致ＧＡＴＡ１与突变启动子片段结合显著减少，提示在成年期该转录因子可能是Ａγ珠蛋白基因的负调控因子；－１７３

关键词： Aγ-珠蛋白基因启动子点突变转录因子 GATA-1

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人白细胞介素-15cDNA真核表达载体的构建及其在肺癌细胞中的表达

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 368-372页

作者：沈永泉崔莲仙何维巴德年中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达。方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，构建ｐＬ－ＩＬ－１５－ＳＮ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转... 详细信息

目的观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达。方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，构建ｐＬ－ＩＬ－１５－ＳＮ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转染到人肺鳞癌细胞（ＰＧ细胞系）和小鼠肺腺癌细胞（ＬＡ７９５细胞系）。经Ｇ４１８条件培养筛选，获得阳性细胞克隆。再经ＣＴＬＬ－２细胞增殖法测阳性细胞ＩＬ－１５的表达活性。结果获得３个ＰＧ细胞和４个ＬＡ７９５细胞阳性克隆，ＩＬ－１５活性测定显示其表达水平在２４ｈ内分别在１４２～２０１或１３８～１７８Ｕ／（ｍｌ·１０６细胞）。结论ＩＬ－１５ｃＤＮＡ转导的人和小鼠肺癌细胞可表达有生物学活性的ＩＬ－１５。

关键词：白细胞介素15 cDNA 基因转导肺癌载体构建

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一氧化氮合酶抑制剂阻断阿片耐受和依赖的信号转导途径

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中华医学杂志 1999年第10期79卷 764-768页

作者：臧梦维沈琦刘景生中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨一氧化氮合酶（NOS）抑制剂NG-硝基-L-精氨酸（L-NNA）对阿片耐受和依赖机制中腺苷酸环化酶-环磷酸腺苷（AC-cAMP）系统、Ca2+系统和一氧化氮-环磷酸鸟苷（NO-cGMP）系统变化的影响。方法实验共分为对照组，阿片激动剂组，阿片... 详细信息

目的探讨一氧化氮合酶（NOS）抑制剂NG-硝基-L-精氨酸（L-NNA）对阿片耐受和依赖机制中腺苷酸环化酶-环磷酸腺苷（AC-cAMP）系统、Ca2+系统和一氧化氮-环磷酸鸟苷（NO-cGMP）系统变化的影响。方法实验共分为对照组，阿片激动剂组，阿片激动剂+纳洛酮组;L-NNA+阿片激动剂组和L-NNA+阿片激动剂+纳洛酮组。采用竞争性蛋白结合试验，3H-精氨酸转化成3H-胍氨酸方法，放射免疫测定和激光共聚焦显微镜技术，测定cAMP含量，NOS活性，cGMP生成量和[Ca2+]i水平。免疫组织化学检测iNOS蛋白表达。结果稳定表达iNOS基因的NG-LNCXiNOS细胞在高选择性δ-受体激动剂δ-阿片受体高选择性激动剂（DPDPE）长时程作用及纳洛酮戒断时，胞内cAMP水平和[Ca2+]i增加，胞浆相iNOS活性和cGMP生成增多，与DPDPE预处理剂量成正比。10-4mol/LL-NNA能降低吗啡、DPDPE、DADLE诱发的cAMP、iNOS活性和蛋白及cGMP的升高，但不能降低[Ca2+]i。结论NOS抑制剂延缓阿片耐受和依赖的发生，可能是负调控AC-cAMP系统和NO-cGMP系统，为临床应用NOS抑制剂防治阿片耐受和成瘾提供了实验依据。

关键词：阿片样δ 麻醉品依赖一氧化氮信号传递

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人LDB1 cDNA的分离与克隆

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科学通报 1999年第7期44卷 755-760页

作者：周严杜光伟汪俊华陈建和袁建刚强伯勤医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院北京100005

根据与鼠LIM结构域结合蛋白Ldb1有较高一致性的人ESTAA45 2 734设计筛库引物 ,在人胎脑cDNA文库中筛出一长度为 2 398bp的cDNA克隆 .其开放读码框编码 34 7个氨基酸 ,与鼠Ldb1、爪蟾XLdb1及果蝇Chip蛋白高度同源 ,含LIM相互作用结构域... 详细信息

根据与鼠LIM结构域结合蛋白Ldb1有较高一致性的人ESTAA45 2 734设计筛库引物 ,在人胎脑cDNA文库中筛出一长度为 2 398bp的cDNA克隆 .其开放读码框编码 34 7个氨基酸 ,与鼠Ldb1、爪蟾XLdb1及果蝇Chip蛋白高度同源 ,含LIM相互作用结构域及核定位信号 .该基因命名为LDB1 (LIMDomainBindingprotein 1 ) ,GenBank接受号为AF0 5 2 ***杂交示LDB1基因在心、脑、肺中表达较高 ,其蛋白产物LDB1作为LIM结构域结合蛋白可能与发育相关 .

关键词： LIM结构域结构蛋白分离克隆 LDB1 cDNA

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疟疾基因工程重组疫苗表达体系的研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1999年第4期17卷 247-251页

作者：黄亮林澄涛袁建刚王恒中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

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人和鼠GRY-RBP cDNA的克隆

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科学通报 1999年第19期44卷 2088-2094页

作者：杜光伟潘美辉周严陈建和姚辉袁建刚强伯勤中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

通过筛选人胎儿脑cDNA文库 ,克隆了编码一个新的RNA结合蛋白的人cDNA ,命名为GRY RBP .人GRY RBPcDNA的长度为 2 932bp ,编码一个具 6 2 3个氨基酸 ,分子量为 6 9.6ku的RNA结合蛋白 .GRY RBP蛋白含有 3个RNA识别基序 (RNARecognitionmot... 详细信息

通过筛选人胎儿脑cDNA文库 ,克隆了编码一个新的RNA结合蛋白的人cDNA ,命名为GRY RBP .人GRY RBPcDNA的长度为 2 932bp ,编码一个具 6 2 3个氨基酸 ,分子量为 6 9.6ku的RNA结合蛋白 .GRY RBP蛋白含有 3个RNA识别基序 (RNARecognitionmotifs,RRMs)和一个富含甘氨酸 (G)、精氨酸 (R)、酪氨酸 (Y)的羧基端 .经数据库比较发现该蛋白与许多RRMRNA结合蛋白有较高的相似性 .还以鼠脑cDNA文库为模板 ,利用PCR扩增了鼠GRY RBPcDNA的全编码区和部分非编码区 .Northern杂交发现人GRY RBP在所检测的 8种成人组织中都有表达 ,在心脏。

关键词： cDNA RNA结合蛋白 GRY-RBP 克隆

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热休克基因mRNA定量RT-PCR检测方法的建立及其应用

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科学通报 1999年第18期44卷 1928-1933页

作者：王艳林沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用... 详细信息

广泛存在于生物细胞中的热休克蛋白 (heatshockproteins,HSP)不仅在机体的应激保护、生长发育中起重要作用 ,而且与疾病的发生密切相关 .因此 ,建立准确检测细胞中HSP基因表达水平的RT PCR方法对基础及临床研究均具有重要意义 .首先应用DNA重组技术及体外转录体系制备了一种能用作测定hsp70 ,hsp90α及hsp90 βmRNA的复合内参照RNA ;然后 ,通过对反应条件的优化、选择 ,建立了一种特异检测 3种主要的人HSP基因mRNA水平的定量RT PCR体系 .应用此体系测定了hsp70 ,hsp90α及hsp90 β在Jurkat细胞中的组成性及热诱导表达规律 .

关键词：热休克基因 mRNA 定量RT-PCR检测热休克白质

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MBLL cDNA的克隆及组织表达分析

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科学通报 1999年第22期44卷 2408-2413页

作者：杜光伟周严陈建和汪俊华阴彬袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL... 详细信息

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL(muscleblind_like) .MBLL长为 2 5 95bp ,含有一个完整的开放阅读框 ,编码 2 5 5个氨基酸 ,具有 4个Cys3 His锌指基序 ,氨基酸序列与果蝇mbl有很高的同源性 (GenBank接受号 :AF0 6 1 2 6 1 ) .利用Northern和RNA斑点杂交检测MBLL基因在 43种成人组织 ,7种胎儿组织中的表达 ,结果显示MBLL是一个广泛表达的基因。

关键词： MBLL cDNA 克隆组织表达基因编码

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