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2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师（学术）论坛

作者：王冬梅高凯吕丹张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的心肌营养素(Cardiotrophin-1,CT-1)作为一种多效细胞因子,在多种组织中表达。CT-1抗凋亡、抗氧化,对多种细胞具有保护作用或延缓疾病进程。在脑组织中CT-1具有一定的表达水平,但CT-1对神经退行性疾病的作用及机制研究甚少。本实验... 详细信息

目的心肌营养素(Cardiotrophin-1,CT-1)作为一种多效细胞因子,在多种组织中表达。CT-1抗凋亡、抗氧化,对多种细胞具有保护作用或延缓疾病进程。在脑组织中CT-1具有一定的表达水平,但CT-1对神经退行性疾病的作用及机制研究甚少。本实验构建脑组织特异的CT-1转基因小鼠,研究该基因是否可以改善APPswe/PS△E9阿尔茨海默症转基因小鼠的认知能力及其作用机制。

关键词：心肌营养素 Cardiotrophin-1,CT-1 基因表达

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APP695^(K595N/M596L)突变转基因小鼠的建立和病理表型动态分析

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中国比较医学杂志 2011年第12期21卷 5-9,25,92页

作者：王冬梅李万波袁树民全雄志张海涛马春梅曹兴水张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的建立APP695K595N/M596L(Swedish突变)转基因小鼠和评价痴呆表型的发生和发展过程。方法将APP695K595N/M596L突变基因插入到小鼠朊蛋白(mouse prion protein)启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695K595N/M596L突... 详细信息

目的建立APP695K595N/M596L(Swedish突变)转基因小鼠和评价痴呆表型的发生和发展过程。方法将APP695K595N/M596L突变基因插入到小鼠朊蛋白(mouse prion protein)启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立APP695K595N/M596L突变转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因表型,Western blotting检测APP突变基因表达。Thioflavin-S染色检测不同年龄转基因小鼠大脑病理改变。Morris水迷宫动态观察小鼠行为学改变。结果建立了人APP695K595N/M596L转基因小鼠,Thioflavin-S染色显示转基因小鼠9月龄时在脑海马区可检测到老年斑形成,并且在11、12月龄时明显增多。Morris水迷宫结果发现与同月龄野生型小鼠相比,该转基因小鼠5月龄开始出现学习记忆能力缺陷,7、9、11月行为学结果证实转基因小鼠的学习记忆能力缺陷随年龄增加而日趋严重(P<0.05)。结论建立了人APP695K595N/M596L转基因小鼠,并能再现人类阿尔茨海默症的行为学及神经病理学特征,为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：朊蛋白 APP瑞士突变转基因小鼠水迷宫

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心脏特异表达人源FAM55A转基因小鼠的建立

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中国比较医学杂志 2011年第9期21卷 1-5,F0003页

作者：张丽全雄志董伟高翔刘宁徐艳峰张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的建立心脏特异表达的人源FAM55A转基因小鼠,为研究该基因在心肌病发病中的作用提供模型。方法 Western blot检测FAM55A在野生型小鼠与cTnTR141W转基因小鼠心脏组织中的表达变化及其在野生小鼠的组织表达谱。克隆人源FAM55A基因入α-... 详细信息

目的建立心脏特异表达的人源FAM55A转基因小鼠,为研究该基因在心肌病发病中的作用提供模型。方法 Western blot检测FAM55A在野生型小鼠与cTnTR141W转基因小鼠心脏组织中的表达变化及其在野生小鼠的组织表达谱。克隆人源FAM55A基因入α-MHC启动子下游构建a-MHC-FAM55A表达载体,显微注射法建立FAM55A转基因小鼠。PCR鉴定转基因首建鼠的基因型。Western blot鉴定人源FAM55A在转基因小鼠心脏中的表达,超声检测转基因小鼠心脏的几何构型和功能。HE染色检测转基因小鼠心脏的病理改变。结果 FAM55A在野生型小鼠心脏中有少量表达,在扩张型心肌病小鼠的心脏中表达增加。建立了1个心脏组织特异表达人源FAM55A转基因小鼠品系。与野生型小鼠相比,FAM55A转基因小鼠的心脏收缩期和舒张期左室前壁从1月龄到5月龄持续增厚,3月龄转基因小鼠心脏射血分数和短轴缩短率稍有增强,1月龄和5月龄转基因小鼠心脏功能则与同龄野生型小鼠相比无变化。组织学检测显示,转基因小鼠心脏左室心肌细胞不均匀肥大,但不发生紊乱。结论 FAM55A在扩张型心肌病小鼠的心脏中表达上调,建立了心脏特异表达的人源FAM55A转基因小鼠,为进一步和心肌病小鼠模型杂交,研究该基因在心肌病发病中的作用提供了工具。

关键词： FAM55A 转基因小鼠心肌病

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双转基因小鼠模型中microRNA-153对RTN4的表达调控

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中国比较医学杂志 2011年第5期21卷 32-36,83页

作者：梁春联朱华黄澜许艳峰邓巍马春梅刘颖秦川中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的探讨mir-153在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法通过microRNA芯片及Real-timePCR检测APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达;构建高表达mir-153的稳转细胞系,通过western-blot检测稳转细胞系内RTN4的蛋白表达;构建野生型... 详细信息

目的探讨mir-153在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法通过microRNA芯片及Real-timePCR检测APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达;构建高表达mir-153的稳转细胞系,通过western-blot检测稳转细胞系内RTN4的蛋白表达;构建野生型及突变型RTN4的3’UTR荧光素酶报告载体,分别将其与mir-153表达载体或microRNA阴性对照载体共转染入293T细胞内,检测海肾荧光素酶的相对活性以验证mir-153对RTN4 mRNA的作用靶点。结果 microRNA芯片及Real-time PCR检测均证实3月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内mir-153的表达较同龄野生对照显著降低;在高表达mir-153的稳转细胞系内RTN4的蛋白水平明显降低;共转染野生型RTN4的3’UTR/mir-153表达载体可使海肾荧光素酶相对活性较共转染野生型RTN4的3’UTR/miRNA阴性对照质粒组显著降低(P<0.05),而共转染突变型RTN4的3’UTR/mir-153表达载体组则较之无明显差异。结论在3月龄APPswe/PSΔE9双转基因小鼠脑内存在mir-153的异常表达;mir-153可调控RTN4的蛋白表达;mir-153对RTN4的表达调控是通过结合RTN4 3’UTR 839-845碱基处的作用位点而实现的。

关键词：阿尔茨海默病转基因小鼠 microRNA Reticulon4

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WIP1对小鼠B细胞及T细胞发育的影响

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中国比较医学杂志 2011年第6期21卷 52-59页

作者：陈陟阳张俊伶马小茗易微微陈显达石桂英鞠振宇中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的研究WIP1基因对小鼠骨髓B细胞发育及胸腺T细胞发育的影响。方法流式细胞术测定小鼠骨髓B细胞及胸腺T细胞发育中各阶段的细胞比例。结果虽然WIP1缺失小鼠骨髓B细胞发育各阶段比例正常,但骨髓总体B细胞比例下降;WIP1基因敲除小鼠胸腺... 详细信息

目的研究WIP1基因对小鼠骨髓B细胞发育及胸腺T细胞发育的影响。方法流式细胞术测定小鼠骨髓B细胞及胸腺T细胞发育中各阶段的细胞比例。结果虽然WIP1缺失小鼠骨髓B细胞发育各阶段比例正常,但骨髓总体B细胞比例下降;WIP1基因敲除小鼠胸腺发育障碍,CD8/CD4双阴性细胞比例增高,CD8/CD4双阳性细胞比例降低。结论 WIP1基因在小鼠骨髓B细胞及胸腺T细胞的发育过程中起重要作用。

关键词： WIP1 基因敲除小鼠 B细胞 T细胞

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阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

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中国比较医学杂志 2011年第9期21卷 27-32页

作者：宗园媛朱华王海林徐艳峰马春梅代小伟黄澜李晓颖董伟张连峰秦川卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出... 详细信息

目的探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用。将靶基因APP mRNA的野生及突变3’UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点。结果根据microRNA芯片结果筛选出在3、6月龄APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高。通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的靶基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少。将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3’UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3’UTR的结合位点。结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3’UTR区域。

关键词： microRNA29c/miR-29c APP 阿尔茨海默病 APPswe/PSΔE9转基因小鼠

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我国常用实验动物资源的现状及对未来发展的思考

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中国比较医学杂志 2011年第10期21卷 39-44页

作者：张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

应"2011年中国工程科技论坛"会议之邀,在实验动物分会场就目前中国主要实验动物资源的现状和发展做一个发言。主要内容包括:实验动物资源是实验动物科学为生命科学和医学提供支撑的支点;实验动物资源国内外对比与发展趋势;我... 详细信息

应"2011年中国工程科技论坛"会议之邀,在实验动物分会场就目前中国主要实验动物资源的现状和发展做一个发言。主要内容包括:实验动物资源是实验动物科学为生命科学和医学提供支撑的支点;实验动物资源国内外对比与发展趋势;我国实验动物研究的资助体系与问题;不同物种实验动物资源的相互补充与在生命科学和医学研究中的权重比;特色研究、创新研究、填补国内空白研究的相互关系;对实验动物资源认识的一些误区;基因工程动物是实验动物资源最重要的方面;大鼠是我国建立世界领先资源的突破点等7个方面。需要说明的是收集到的资料不一定是最新的和全面的;虽然力求公正准确,但是由于本人研究方向所限,个人之见,仅供参考。

关键词：实验动物科学动物资源生命科学医学研究基因工程国内外中国

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心脏特异抗凋亡蛋白ARC研究进展

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中国比较医学杂志 2011年第3期21卷 59-61页

作者：廉虹张连峰中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 中国医学科学院实验动物研究所国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院和北京协和医学院北京100021

含胱冬肽酶富集功能域的凋亡抑制因子(apoptosis repressor with CARD,ARC)蛋白是20世纪末发现的在心肌、骨骼肌和大脑等终末分化组织中大量表达的抗凋亡蛋白。ARC的主要功能是抗凋亡作用。由于其在心脏中表达的特异性和抗凋亡的多层次... 详细信息

含胱冬肽酶富集功能域的凋亡抑制因子(apoptosis repressor with CARD,ARC)蛋白是20世纪末发现的在心肌、骨骼肌和大脑等终末分化组织中大量表达的抗凋亡蛋白。ARC的主要功能是抗凋亡作用。由于其在心脏中表达的特异性和抗凋亡的多层次性,使ARC在心脏中的作用成为近年来研究的热点。本文主要对其抗凋亡途径以及近年来在心肌病中的研究进展两方面进行综述。

关键词：含胱冬肽酶富集功能域的凋亡抑制因子凋亡心肌病

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荧光素酶标记人胃癌细胞裸鼠原位移植模型的建立

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中国比较医学杂志 2011年第4期21卷 28-30,F0003页

作者：李小颖董伟张连峰中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 国家中医药局人类疾病动物模型3级实验室北京100021

目的建立荧光素酶标记人胃癌原位异种移植模型。方法将萤火虫荧光素酶作为标记基因导入人胃癌MGC803细胞,建立稳定表达荧光素酶的细胞,将其接种裸鼠胃壁浆膜下,建立胃癌裸鼠原位肿瘤模型。用活体荧光成像系统检测肿瘤的发生发展,并进行... 详细信息

目的建立荧光素酶标记人胃癌原位异种移植模型。方法将萤火虫荧光素酶作为标记基因导入人胃癌MGC803细胞,建立稳定表达荧光素酶的细胞,将其接种裸鼠胃壁浆膜下,建立胃癌裸鼠原位肿瘤模型。用活体荧光成像系统检测肿瘤的发生发展,并进行小动物超声影像和病理学分析。结果裸鼠原位成瘤率为100%,活体荧光成像观察发现在接种第7天,就可以观察到肿瘤发光。21 d后肿瘤进入对数生长期,28 d后肿瘤出现明显坏死,平均荧光光子数呈现下降趋势。超声成像发现小鼠胃部有直径为8.39 mm,面积为28.92 mm2瘤块。结论荧光素酶标记可以实时监测原位异种移植人胃癌生长状况。

关键词：人胃癌细胞肿瘤模型荧光素酶生物发光小动物超声

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IL34转基因小鼠的建立和表型分析

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中国比较医学杂志 2011年第6期21卷 64-66,59,90页

作者：杨青全雄志廉虹张旭马春梅张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的建立白介素34转基因小鼠,研究该基因在小鼠中表达对小鼠免疫系统的作用。方法把人的IL34基因插入CMV启动子下,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立IL34转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定IL34转基因小鼠的基因表型,Western blotting检... 详细信息

目的建立白介素34转基因小鼠,研究该基因在小鼠中表达对小鼠免疫系统的作用。方法把人的IL34基因插入CMV启动子下,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立IL34转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定IL34转基因小鼠的基因表型,Western blotting检测IL34蛋白的表达水平,组织化学染色观察IL34转基因小鼠重要器官的病理改变。结果建立了2个品系的IL34转基因小鼠。转入的人IL34基因在脾脏中的表达水平高于内源性IL34。组织学分析显示IL34转基因小鼠各重要器官如脑,心,肝,肾,肠等的形态结构均正常,但脾脏的生发中心比较活跃,白髓的范围比野生型小鼠大。结论成功建立了IL34转基因小鼠,IL34基因的过度表达对免疫系统作用需要进一步探讨。

关键词：白介素34 转基因小鼠巨噬细胞

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