检索结果-内蒙古大学图书馆

利用人胚胎干细胞来源的Runx1c-mNeonGreen报告细胞系追踪成年造血过程

生物技术进展 2020年第5期10卷 524-533页

作者：朱瑶瑶张朔王征宇中国医学科学院&北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室国家血液病临床医学研究中心天津300020

Runt相关转录因子1c(Runt-related transcription factor 1c,Runx1c)与成年造血以及造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的产生密切相关,为了动态追踪人早期造血发育过程中Runx1c的表达,利用双切质粒载体联合瞬时转入B细胞淋巴瘤-... 详细信息

Runt相关转录因子1c(Runt-related transcription factor 1c,Runx1c)与成年造血以及造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的产生密切相关,为了动态追踪人早期造血发育过程中Runx1c的表达,利用双切质粒载体联合瞬时转入B细胞淋巴瘤-特大(B-cell lymphoma-extra large,BCL-XL)基因的CRISPR-Cas9技术高效地构建了人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)来源的Runx1c-mNeonGreen报告细胞系,并经PCR、Sanger测序验证构建成功。随后,利用免疫荧光技术、实时荧光定量PCR技术、流式细胞术、畸胎瘤实验和数字化核型分析技术进行验证,发现该报告细胞系仍具有hESC样的多能性且未发生染色体异常和变异。此外,通过hESC体外单层诱导造血分化方法,利用流式细胞术追踪人早期造血发育过程中Runx1c的表达,结果表明利用该报告细胞系可以动态追踪人早期造血发育中Runx1c的表达。研究结果为阐明成年造血过程提供了新思路,并为体外产生功能性血细胞提供了可能。

关键词：人胚胎干细胞成年造血 Runx1c 报告细胞系 CRISPR-Cas9

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SETD8–/–抑制人胚胎干细胞向造血分化

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中国细胞生物学学报 2019年第8期41卷 1578-1587页

作者：王鼎李亚朴黄鑫马艺戈郭青赵艳红王冰蕊徐长禄张英楠石莉红中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室

表观遗传调控作为一种广泛的基因表达调控方式,已被报道可以参与干细胞多能性、谱系分化等生物学过程。虽然许多表观遗传调控因子的功能已被解析,但仍有一些并未被深入研究。SETD8(赖氨酸甲基转移酶5A, lysine methyltransferase 5A)作... 详细信息

表观遗传调控作为一种广泛的基因表达调控方式,已被报道可以参与干细胞多能性、谱系分化等生物学过程。虽然许多表观遗传调控因子的功能已被解析,但仍有一些并未被深入研究。SETD8(赖氨酸甲基转移酶5A, lysine methyltransferase 5A)作为一种甲基化转移酶,已被证实能够介导组蛋白H4第20位赖氨酸的单甲基化,并且可以参与细胞周期、P53介导的DNA损伤等过程。但是, SETD8是否可以直接调控人胚胎干细胞的多能性及其谱系分化还没有报道。该研究首先利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在人的胚胎干细细胞中敲除SETD8。功能研究表明,敲除SETD8显著降低了多能性基因OCT4和NANOG的表达水平,并且抑制了体外造血发育过程。接着利用了siRNA在造血发育不同时期敲低STED8,发现均可以抑制造血发育过程,进一步证实了SETD8可以在各个阶段调控体外造血发育。

关键词： CRISPR/Cas9技术 H1细胞 SETD8 多能性单层分化

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儿童CBFβ/MYH11阳性急性髓系白血病的临床特征及预后分析

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国际儿科学杂志 2020年第11期47卷 811-813页

作者：陈晓燕刘超吴文齐阮敏竺晓凡中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)实验血液学国家重点实验室国家血液系统疾病临床医学研究中心天津300020

目的回顾性分析中国医学科学院血液病医院儿童CBFβ/MYH11阳性急性髓系白血病(AML)临床特征及预后。方法对2006年9月至2019年7月初诊CBFβ/MYH11阳性AML患儿进行回顾性分析。采用Kaplan-Meier方法评估生存率。结果 33例患儿中男19例,女1... 详细信息

目的回顾性分析中国医学科学院血液病医院儿童CBFβ/MYH11阳性急性髓系白血病(AML)临床特征及预后。方法对2006年9月至2019年7月初诊CBFβ/MYH11阳性AML患儿进行回顾性分析。采用Kaplan-Meier方法评估生存率。结果 33例患儿中男19例,女14例,中位年龄9(1~15)岁。初诊白细胞41.8 (3.17~212.12)×109/L。1个疗程后完全缓解率100%。5年无事件生存率为76.1%±8.0%,5年总生存率97.0%±3.0%。治疗缓解后分子学复发11例,中位复发时间12(3~21)个月,1例发生血液学复发。分子学水平持续阳性7例,1例发生血液学复发。分子学持续阳性组无事件生存率较持续阴性组低(30.0%±23.9%和100.0%±0%,χ2=7.274,P=0.007)。结论儿童CBFβ/MYH11阳性急性髓系白血病总体生存率较好,监测CBFβ/MYH11转录本水平可指导预后。

关键词：儿童 CBFβ/MYH11 急性髓系白血病生存分析

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多发性骨髓瘤患者血清外泌体提取方法优化与应用

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中国细胞生物学学报 2019年第8期41卷 1595-1600页

作者：魏晓晶杜辰星许杰于珍刘兰婷邱录贵郝牧中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室

外泌体提取方法多样,目前没有统一的标准,每种方法都各有其优缺点,因此该文针对多发性骨髓瘤患者血清中外泌体的两种提取方法进行比较,总结出一种适合患者血清这种量少而珍贵标本的外泌体的提取方法。试剂盒提取方法能够获得充足的外泌... 详细信息

外泌体提取方法多样,目前没有统一的标准,每种方法都各有其优缺点,因此该文针对多发性骨髓瘤患者血清中外泌体的两种提取方法进行比较,总结出一种适合患者血清这种量少而珍贵标本的外泌体的提取方法。试剂盒提取方法能够获得充足的外泌体但是会引入杂质。差速超离方法获得的外泌体量较少,损耗过多的外泌体,难以进行后续外泌体内RNA提取等实验,因此获取外泌体内的蛋白或核酸存在困难。该研究将差速超离提取方法以及试剂盒提取方法两者的优点结合,总结出一种更省时、便捷,获得更高纯度外泌体的方法。

关键词：外泌体多发性骨髓瘤差速超离 RNA提取

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Rictor在胚胎期肝脏造血干细胞中的作用研究

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中国实验血液学杂志 2019年第2期27卷 600-605页

作者：王伟丽孙晓璐王乐穆晓环袁卫平中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学总医院妇产科生殖中心天津300052

目的:观察Rictor在血细胞特异敲除后对胎肝造血的影响。方法:取实验组Vav-Cre;Rictorf/f小鼠和对照组Rictorf/+或Rictorf/f小鼠E12.5 0.08ee胎肝细胞进行骨髓重建移植实验,观察Rictor敲除对造血干细胞重建造血能力的影响。同时,实验组... 详细信息

目的:观察Rictor在血细胞特异敲除后对胎肝造血的影响。方法:取实验组Vav-Cre;Rictorf/f小鼠和对照组Rictorf/+或Rictorf/f小鼠E12.5 0.08ee胎肝细胞进行骨髓重建移植实验,观察Rictor敲除对造血干细胞重建造血能力的影响。同时,实验组和对照组小鼠分选E14.5胎肝细胞0, 10, 20, 40, 60, 80个造血干细胞进行极限稀释移植实验,检测Rictor敲除后具有重建造血能力的造血干细胞的数量。进一步进行细胞周期实验以及流式细胞术分选E12.5通过一次移植成功重建造血的供体细胞进行二次移植实验,检测Rictor敲除对造血干细胞自我更新能力的影响。结果:骨髓重建造血实验结果显示,移植后4个月对照组Rictorf/+或Rictorf/f 8只受体小鼠全部重建造血功能,重建率为77.2%±11.1%,每个胎肝有57个LT-RU,实验组Vav-Cre;Rictorf/f 8只受体全部重建,重建率为37.0%±16.3%,每个胎肝8个LT-RU。极限稀释移植实验显示,移植后4个月对照组每17个SLAM细胞,实验组每39个SLAM细胞有1个具有重建造血能力的造血干细胞。二次移植实验证明,每只受体移植4×10~5供体细胞,1个月后对照组4只受体有2只重建,实验组0只重建。并且进一步证明实验组S/G2/M期细胞比率增加。结论:在胎肝造血过程中,特异敲除血细胞Rictor会导致重建造血能力降低,具有重建造血能力的造血干细胞数量下降,造血干细胞自我更新能力降低。

关键词： Rictor 胎肝造血干细胞 mTORC2

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长非编码RNA-UCA1影响红细胞增殖

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中国细胞生物学学报 2019年第2期41卷 211-217页

作者：刘金花张英楠徐长禄王冰蕊黄鑫赵艳红马艺戈高洁佟静媛李亚朴石莉红实验血液学国家重点实验室中国医学科学院/北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 天津300020

造血是一个高度协调、精密调控的过程。在正常造血分化过程中, lncRNA不仅调控造血干/祖细胞自我更新、分化、凋亡等过程,还决定造血谱系分化命运。关于lncRNA在人的不同造血谱系分化中的功能以及作用机制的研究已比较深入,但其在红系... 详细信息

造血是一个高度协调、精密调控的过程。在正常造血分化过程中, lncRNA不仅调控造血干/祖细胞自我更新、分化、凋亡等过程,还决定造血谱系分化命运。关于lncRNA在人的不同造血谱系分化中的功能以及作用机制的研究已比较深入,但其在红系分化过程中的功能和机制的研究很少,仍处于建立差异基因表达谱的阶段。现有的研究表明, lncRNA-UCA 1(urothelial cancer associated 1)作为原癌基因与多种癌症的发生、发展、转移、产生化疗耐药性等密切相关。该研究发现,在体外诱导脐带血来源的CD34+干/祖细胞向红细胞分化的过程中,采用慢病毒感染的方法敲降UCA 1的表达抑制了红细胞的增殖及活力,对RNA-seq数据进一步分析发现,降低UCA 1的表达会影响与细胞周期相关基因的表达。

关键词： UCA1 红细胞增殖

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多发性骨髓瘤患者全身扩散加权成像的表现与临床检查结果的相关性

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中华医学杂志 2019年第9期99卷 664-668页

作者：黄文阳杨咪隋伟薇邓书会刘薇冀晓东邹德慧郝牧邱录贵夏爽中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020 天津市第一中心医院放射科天津300192

目的探讨多发性骨髓瘤患者全身扩散加权成像的表现与临床检查结果的相关性。方法回顾性收集2015年5月至2017年5月于天津市第一中心医院进行全身扩散加权成像(WBDWI)的多发性骨髓瘤患者共43例纳入本研究。其中男29例、女14例,年龄36-73岁... 详细信息

目的探讨多发性骨髓瘤患者全身扩散加权成像的表现与临床检查结果的相关性。方法回顾性收集2015年5月至2017年5月于天津市第一中心医院进行全身扩散加权成像(WBDWI)的多发性骨髓瘤患者共43例纳入本研究。其中男29例、女14例,年龄36-73岁,中位年龄54岁。将患者按照WBDWI的表现分为异常组和正常组,比较两组患者的临床资料,表观扩散系数(ADC)值差异有无统计学意义。比较WBDWI表现异常组初诊和治疗后临床资料差异。结果43例患者中,WBDWI表现正常组10例,男7例、女3例,年龄(59±9)岁;异常组33例,男22例、女11例,年龄(57±10)岁,两组间年龄、性别差异均无统计学意义(均P>0.05)。WBDWI异常组、正常组患者的浆细胞比例分别为50.0%(14.0%,78.0%)、5.0%(2.5%, 15.0%)β2微球蛋白浓度中位数分别为4.8(2.7,7.7)、2.4(2.0,3.7)mg/L, WBDWI异常组显著高于正常组(P<0.05)。WBDWI全身扩散表现异常组的肋骨、胸骨、锁骨、胸椎、腰椎、骨盆、肱骨近端、股骨近端、股骨干、胫骨干、胫骨近端ADC值分别为(0.66±0.15)×10^-3、(0.71±0.20)×10^-3、(0.67±0.17)×10^-3、(0.63±0.17)×10^-3、(0.69±0.20)×10^-3、(0.83±0.36)×10^-3、(0.76±0.13)×10^-3、(0.64±0.17)×10^-3、(0.70±0.22)×10^-3、(0.97±0.18)×10^-3、(0.83±0.18)×10^-3 mm^2/s,均显著高于正常组(均P<0.05): WBDWI异常组患者治疗后的白蛋白浓度升高,两组间差异有统计学意义(P<0.05),余临床结果差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论WBDWI的不同影像学表现,能够反映临床的严重程度,当WBDWI表现正常时,临床症状较轻,当WBDWI表现异常时,虽然经过治疗后白蛋白浓度升高,但患者临床症状仍较重。

关键词：磁共振成像多发性骨髓瘤扩散表观扩散系数

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JAK1抑制剂SHR0302和芦可替尼对骨髓增殖性肿瘤SET2细胞系和原代细胞增殖抑制和抗炎作用机制的研究

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中华血液学杂志 2019年第12期40卷 1003-1007页

作者：杨爱莹刘晋琴蔡亚楠方美云杨琳陈猛李冰肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室国家血液病临床医学研究中心天津300020 大连大学附属中山医院 116001

目的探究选择性JAK1抑制剂SHR0302和芦可替尼对骨髓增殖性肿瘤(MPN)细胞株SET2细胞和MPN患者原代细胞的影响以及分子作用机制。方法CCK8法检测不同浓度SHR0302和芦可替尼对SET2细胞增殖能力的影响;集落形成实验检测SHR0302和芦可替尼对... 详细信息

目的探究选择性JAK1抑制剂SHR0302和芦可替尼对骨髓增殖性肿瘤(MPN)细胞株SET2细胞和MPN患者原代细胞的影响以及分子作用机制。方法CCK8法检测不同浓度SHR0302和芦可替尼对SET2细胞增殖能力的影响;集落形成实验检测SHR0302和芦可替尼对MPN患者原代细胞红系爆式集落形成单位(BFU-E)的作用;多因子检测试剂盒MSD检测SHR0302和芦可替尼对SET2细胞IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8、IL-12p70蛋白表达水平的影响;以Western blot法检测SHR0302和芦可替尼对SET2细胞JAK-STAT信号通路分子磷酸化水平的影响。结果0.1、1.0、2.5、5.0μmol/L SHR0302作用SET2细胞24、48、72 h,细胞增殖抑制率随药物浓度的增大而增高(P<0.001);0.01、0.05、0.10μmol/L芦可替尼作用SET2细胞48、72 h,细胞增殖抑制率亦随药物浓度的增大而增高(P<0.001),且均在72 h抑制作用最显著。2.5μmol/L SHR0302、0.1μmol/L芦可替尼作用SET2细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为(59.94±0.60)%、(64.00±0.66)%,提示SHR0302的增殖抑制作用弱于芦可替尼。与对照组比较,0.1、1.0、5.0μmol/L SHR0302和0.1、0.2、0.4μmol/L芦可替尼均浓度依赖性地抑制MPN患者BFU-E形成,1.0µmol/L SHR0302对MPN患者BFU-E集落形成抑制程度与0.2µmol/L芦可替尼相当。除IL-12外,1.6μmol/L SHR0302作用SET2细胞24 h可明显抑制炎性介质蛋白IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-8表达(P<0.01),与1.0μmol/L芦可替尼对炎性介质抑制作用相当。不同浓度SHR0302作用SET2细胞3 h后JAK-STAT信号通路显著抑制,在1.0μmol/L时可显著抑制p-STAT1(Tyr701)、p-STAT3(Tyr705)蛋白磷酸化,在5.0μmol/L时可使p-JAK1(Tyr1022/1023)、p-STAT5(Tyr694)蛋白磷酸化水平明显下调(P<0.05),而芦可替尼在0.1μmol/L即可明显抑制下游STAT蛋白磷酸化水平。结论SHR0302能有效抑制MPN细胞株和患者原代细胞的增殖以及炎性因子表达,其机制可能与下调p-JAK1及其下游p-STAT1、p-STAT3、p-STAT5蛋白磷酸化水平相关,但其抗增殖、抗炎作用弱于芦可替尼。

关键词：选择性JAK1抑制剂SHR0302 芦可替尼细胞增殖炎性细胞因子 JAKSTAT信号通路

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氯化高铁血红素诱导K562细胞红系分化对其细胞周期的影响

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生物技术进展 2020年第4期10卷 409-416页

作者：马艺戈王冰蕊高洁刘金花佟静媛刘丽君石莉红北京协和医学院中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)实验血液学国家重点实验室国家血液病临床医学研究中心天津300020 东北大学生命科学与健康学院沈阳110169

细胞周期的测量是细胞增殖动力学的研究基础。通过添加30μmol·L-1氯化高铁血红素(Hemin)诱导人慢性髓系白血病K562细胞红系分化,利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)与7-AAD双染的方法检测Hemin诱导的K562红系分化细胞对细胞周期各期比... 详细信息

细胞周期的测量是细胞增殖动力学的研究基础。通过添加30μmol·L-1氯化高铁血红素(Hemin)诱导人慢性髓系白血病K562细胞红系分化,利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)与7-AAD双染的方法检测Hemin诱导的K562红系分化细胞对细胞周期各期比例的影响,未诱导的K562细胞周期各期比例作为对照,检测发现Hemin诱导的K562红系分化细胞对其细胞周期相对值无明显影响。应用BrdU间隔染色结合流式细胞术的方法,通过分析BrdU间隔染色后BrdU阳性细胞群的动态变化规律,从而推算出K562红系分化细胞的倍增时间及细胞周期各期时长。根据测量结果发现,未诱导的K562细胞总倍增时间约为20 h,与通过生长曲线公式法计算倍增时间的结果相符,Hemin诱导的K562细胞的细胞周期倍增时长约为23 h。Hemin诱导的K562红系分化细胞较未诱导的K562细胞倍增时间与各期时长无明显差异。因此,Hemin诱导K562细胞红系分化对其细胞周期绝对值及相对值均无明显影响。

关键词：细胞周期 K562细胞氯化高铁血红素 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

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融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤BJAB细胞杀伤作用及其机制研究

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中国肿瘤 2019年第3期28卷 220-226页

作者：范冬梅杨圆圆姜琳琳熊冬生杨铭陶欣勇周珊刘红芹屈浩韩博文石釧中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 天津同生时代生物技术有限公司天津300020

[目的]探讨融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤细胞株BJAB细胞的杀伤作用及其机制研究。[方法]利用流式细胞分析技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM与BJAB细胞的结合活性。MTT法检测融合蛋白anti-C... 详细信息

[目的]探讨融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对B细胞淋巴瘤细胞株BJAB细胞的杀伤作用及其机制研究。[方法]利用流式细胞分析技术(FACS)和激光共聚焦显微镜技术,检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM与BJAB细胞的结合活性。MTT法检测融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对BJAB细胞的体外杀伤活性。彗星电泳实验检测融合蛋白anti-CD19 (Fab)-LDM对BJAB细胞DNA的损伤。FACS检测不同浓度融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM处理BJAB细胞后细胞周期的变化。[结果] FACS和激光共聚焦显微镜技术实验结果表明,融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM能与BJAB细胞结合。MTT法实验结果表明,融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM对BJAB细胞杀伤活性较单用力达霉素或阿霉素强,IC50值分别为(0.15±0.02)nmol/L、(0.38±0.03)nmol/L和(57.15±2.30)nmol/L。彗星电泳实验结果表明,用5pmol/L的融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM及力达霉素处理BJAB细胞后,可引起细胞不同程度的DNA损伤,由于融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM具有靶向性和细胞内化的特性,对DNA造成的损伤较力达霉素组明显。FACS结果显示,随着融合蛋白anti-CD19(Fab)-LDM浓度的增加,S期的比例从53.78%升高至77.29%,呈剂量依赖性。[结论]融合蛋白anti-CD19 (Fab)-LDM可以靶向杀伤B细胞淋巴瘤细胞株BJAB,引起细胞周期阻滞,在B细胞淋巴瘤生物治疗中具有潜在的应用价值。

关键词：基因工程抗体融合蛋白力达霉素 B细胞淋巴瘤细胞周期

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