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中华血液学杂志 2018年第12期39卷 1029-1032页

作者：胡耐博方力维秦铁军肖志坚徐泽锋中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)、实验血液学国家重点实验室天津300200

慢性中性粒细胞白血病(chronic neutrophilic leukemia,CNL)是一种罕见的骨髓增殖性肿瘤(MPN)。此前,CNL的诊断多为排除胜诊断,且确诊病例数较少。2013年Maxson等[1]通过对1862个基因进行深度测序发现CNL患者中存在CSF3R T618I突变,随... 详细信息

慢性中性粒细胞白血病(chronic neutrophilic leukemia,CNL)是一种罕见的骨髓增殖性肿瘤(MPN)。此前,CNL的诊断多为排除胜诊断,且确诊病例数较少。2013年Maxson等[1]通过对1862个基因进行深度测序发现CNL患者中存在CSF3R T618I突变,随后的研究证实CSF3R T618I为CNL特异性突变,从而,CNL从排除性诊断进人前瞻性诊断时代。

关键词：慢性中性粒细胞白血病文献复习前瞻性诊断治疗确诊病例数 CNL 增殖性突变

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我如何治疗FLT3-ITD突变阳性急性髓系白血病

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中华血液学杂志 2018年第1期39卷 1-4页

作者：王建祥中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

FLT3基因编码的酪氨酸激酶参与造血发育。在急性髓系白血病（AML）患者中存在两种FLT3基因突变：一种为FLT3基因激酶区的点突变（TKD），另一种为FLT3基因内部串联重复（ITD）。1996年一个日本研究组在研究将FLT3mRNA作为微小残留病检... 详细信息

FLT3基因编码的酪氨酸激酶参与造血发育。在急性髓系白血病（AML）患者中存在两种FLT3基因突变：一种为FLT3基因激酶区的点突变（TKD），另一种为FLT3基因内部串联重复（ITD）。1996年一个日本研究组在研究将FLT3mRNA作为微小残留病检测指标时发现了FLT3-ITD突变。这类突变是FLT3基因的近膜区序列ITD，为非移码突变，

关键词：急性髓系白血病点突变 FLT3基因酪氨酸激酶阳性治疗内部串联重复微小残留病

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p53蛋白异常与肿瘤发生关系的研究进展

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肿瘤研究与临床 2019年第9期31卷 633-636页

作者：许杰郝牧中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

TP53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因,在大约50%的恶性肿瘤中发生突变,其编码的p53蛋白是体内的抑癌因子,与肿瘤的发生息息相关。研究发现,肿瘤的发生与多种生物学过程异常有密切关系,主要包括细胞周期调控、细胞凋亡、DNA损... 详细信息

TP53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因,在大约50%的恶性肿瘤中发生突变,其编码的p53蛋白是体内的抑癌因子,与肿瘤的发生息息相关。研究发现,肿瘤的发生与多种生物学过程异常有密切关系,主要包括细胞周期调控、细胞凋亡、DNA损伤修复、细胞衰老、自噬、代谢调节等方面。文章从影响肿瘤发生的各生物学过程的角度来阐述p53蛋白与肿瘤发生之间复杂的网络关系。

关键词：肿瘤肿瘤抑制蛋白质p53 生物学过程

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P21基因参与早期诱导RUNX1b过表达抑制人类造血发生

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中国输血杂志 2019年第3期32卷 222-227页

作者：常晶滕嘉雯孙文翠曾加辉张勇刚潘旭周涯赖默温边国慧周琼秀刘嘉馨陈波马峰中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室四川大学生物治疗国家重点实验室

目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol... 详细信息

目的探究细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1[CDKN1A(P21)]对造血发生过程的影响。方法对RUNX1b诱导过表达hES细胞系(RUNX1b/hESC)与小鼠主动脉-性腺-中肾区(AGM)基质细胞AGM-S3共培养4 d细胞,使用多西环素(DOX)(1μg/mL)与RepSox(0.33μmol/L)或不同浓度DOX(1、0.5、0.2、0.1μg/mL)诱导RUNX1b过表达时,以qRT-PCR技术检测P21与RUNX1b相对表达情况。利用基于转座子载体PiggyBac的PB-tet-on-OE真核诱导过表达系统,建立P21诱导过表达hES细胞系(CDKN1A/hESC)。分别在CDKN1A/hESC与AGM-S3共培养d0、d2、d4、d6添加DOX诱导P21过表达,培养8 d或14 d,通过流式细胞术(FACS)检测血细胞表面分子的变化情况,以判断诱导P21过表达对造血发生产生的影响。结果 qRT-PCR显示:P21表达量随着RUNX1b过表达上调,同时加入RepSox时表达基本处在正常水平,随着DOX浓度降低,RUNX1b与P21表达水平下降。在造血分化的早期,特别是共培养d0开始诱导P21过表达的共培养体系所产生的CD34^-CD43^+、CD34^-CD45^+与CD34^+CD45^+细胞群相较于对照分别降低了85%,94%和78%,当共培养d6后诱导P21过表达上述现象消失。结论 P21可能参与了由RUNX1b诱导过表达所引起的人类早期造血发生的抑制效应;早期诱导P21过表达明显抑制造血细胞产生。

关键词：细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂[CDKN1A(P21)] 多西环素(DOX) 真核诱导过表达系统人胚胎干细胞(hESC) 主动脉-性腺-中肾(AGM)基质细胞造血发生

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IL-34对人急性单核细胞白血病细胞恶性生物学行为的影响

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中国肿瘤生物治疗杂志 2018年第5期25卷 447-454页

作者：胡雨婷王丽娜王荣杨斐斐王昊刘晓礼任倩郑国光中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨过表达IL-34对急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMo L)细胞恶性生物学行为的影响。方法:构建IL-34过表达载体,制备慢病毒载体p CDH-GFP,感染AMo L细胞系THP1和MOLM-13,通过细胞增殖实验、集落形成实验、PI染色检... 详细信息

目的:探讨过表达IL-34对急性单核细胞白血病(acute monocytic leukemia,AMo L)细胞恶性生物学行为的影响。方法:构建IL-34过表达载体,制备慢病毒载体p CDH-GFP,感染AMo L细胞系THP1和MOLM-13,通过细胞增殖实验、集落形成实验、PI染色检测细胞周期法和Annexin-V/PI法检测IL-34对AMo L细胞的增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响,通过流式细胞术分析过表达IL-34对细胞分化表型的影响,通过裸鼠皮下成瘤模型观察肿瘤大小、质量差异和巨噬细胞募集情况。结果:实验组THP1和MOLM-13细胞IL-34 m RNA表达水平分别比对照组提高近4 000倍和近3 000倍(均P<0.01),表明已成功构建稳定过表达IL-34的AMo L细胞系。体外细胞实验结果显示,过表达IL-34提高THP1和MOLM-13细胞的增殖[72 h:(0.738±0.003)vs(0.646±0.008),(0.290±0.004)vs(0.247±0.004);均P<0.01]和集落形成能力[(127.00±3.37)vs(86.00±4.08)个,(160.70±4.70)vs(116.70±3.93)个;均P<0.01],对细胞的凋亡没有显著影响(均P>0.05);单核-巨噬细胞分化标志物CD11b和CD14表达水平升高,未成熟细胞标志物CD71表达水平减低,表明IL-34促进了AMo L细胞向单核-巨噬细胞方向分化(均P<0.05)。裸鼠体内荷瘤实验可见,过表达IL-34促进瘤组织内巨噬细胞募集(P<0.01)。结论:过表达IL-34提高AMo L细胞的增殖和集落形成能力,促进细胞向单核-巨噬细胞分化,并促进肿瘤内巨噬细胞的募集。

关键词：白介素-34基因急性单核细胞白血病细胞增殖细胞分化巨噬细胞

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UM171体外扩增脐血造血干细胞的机制

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中国组织工程研究 2018年第21期22卷 3328-3334页

作者：徐诗琪丁亚辉张宇纪庆杨铭李迎辉高瀛岱中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津市300020

背景:研究表明UM171可以在体外扩增造血干细胞,但作用机制尚不清楚。目的:通过高通量对接(HTDocking)筛选技术研究UM171作用的靶点,并概述其潜在的作用机制。方法:利用StemCellCKB在线计算平台,找出UM171可能的作用靶点。通过验证实验... 详细信息

背景:研究表明UM171可以在体外扩增造血干细胞,但作用机制尚不清楚。目的:通过高通量对接(HTDocking)筛选技术研究UM171作用的靶点,并概述其潜在的作用机制。方法:利用StemCellCKB在线计算平台,找出UM171可能的作用靶点。通过验证实验排除阴性靶点,利用表面等离子体共振(SPR)分析确定UM171和转化生长因子βRⅠ之间的相互作用。Western blot法检测UM171作用于转化生长因子β信号通路的几种重要蛋白质表达变化。结果与结论:(1)根据StemCellCKB计算得分,找出了UM171可能的作用靶点有转化生长因子βRⅠ等;(2)表面等离子体共振分析得出KD_(50)值为62.5μmol/L,说明UM171和转化生长因子βRⅠ有较强的结合能力;(3)转化生长因子β信号通路中转化生长因子βRⅠ、Smad3、p-Smad3、Smad4等主要蛋白质的表达水平显著提高;(4)结果提示UM171通过作用于转化生长因子β信号通路扩增脐血造血干细胞。

关键词：高通量筛选脐血造血干细胞 UM171 转化生长因子β信号通路 HDAC PPARgamma 扩增 UM171靶点干细胞国家自然科学胎血转化生长因子β PPARγ 组织工程

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再生障碍性贫血患者骨髓CD106+间充质干细胞对其骨髓血管衰竭的作用

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中国医学科学院学报 2018年第2期40卷 178-186页

作者：卢士红葛美丽郑以州杨少光陈芳尤亚红韩忠朝中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所国家重点实验室天津300020

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)形成血管的能力及受影响的因素。方法扩增培养AA患者骨髓与正常人骨髓MSCs,流式及免疫组织化学鉴定检测CD106基因表达情况及CD106^+MSCs含量;测定新鲜AA骨髓中CD105^+CD106^+MSCs... 详细信息

目的探讨再生障碍性贫血(AA)患者骨髓间充质干细胞(MSCs)形成血管的能力及受影响的因素。方法扩增培养AA患者骨髓与正常人骨髓MSCs,流式及免疫组织化学鉴定检测CD106基因表达情况及CD106^+MSCs含量;测定新鲜AA骨髓中CD105^+CD106^+MSCs含量,检测AA MSCs和正常人MSCs被诱导成内皮细胞能力,检测封闭CD106抗原的正常人MSCs被诱导成内皮细胞能力及在基质胶中形成管状结构的能力。结果 AA骨髓MSCs CD106基因表达较正常人缺失(降低12.13倍),CD106^+MSCs含量降低[(28.03±17.71)%比(59.61±12.26)%,P=0.000],新鲜骨髓中CD105^+CD106^+MSCs含量降低[(0.33±0.10)%比(2.98±0.46)%,P=0.0005]。AA MSCs被诱导成CD31+内皮细胞能力明显迟缓[(13.67±1.50)%比(43.24±0.96)%,P=0.0004],而将正常人MSCs封闭CD106抗原后其被诱导成CD31+细胞能力[(26.00±2.65)%比(91.78±2.44)%,P=0.000]及管状结构形成能力[(13.81±1.98)mm比(68.12±6.78)mm,P=0.0015]也均显著下降。结论 AA患者骨髓CD106基因表达缺失、CD106^+MSCs含量降低可促进患者骨髓血管衰竭。

关键词：骨髓间充质干细胞血管细胞黏附分子-1 管状结构血管生成

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急性髓系白血病中组蛋白甲基化修饰调控异常及相关靶向治疗研究进展

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中华血液学杂志 2018年第2期39卷 171-176页

作者：郭惠东初雅婧袁卫平中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室天津300020 北京航天总医院检验科

急性髓系白血病（AML）是一类高度异质性疾病，目前临床上主要通过化疗及造血干细胞移植（HSCT）进行治疗，这些治疗方法仅在一些特定亚型的白血病患者中有较好的疗效，且在80％的60岁以上患者中不良反应发生率较高。对AML患者的高通量... 详细信息

急性髓系白血病（AML）是一类高度异质性疾病，目前临床上主要通过化疗及造血干细胞移植（HSCT）进行治疗，这些治疗方法仅在一些特定亚型的白血病患者中有较好的疗效，且在80％的60岁以上患者中不良反应发生率较高。对AML患者的高通量测序结果表明，大多数AML相关的基因突变都影响了下游转录因子或重要的表观遗传调控元件。值得注意的是，染色体易位引发的白血病大多伴有转录因子以及表观遗传修饰的异常调控，

关键词：急性髓系白血病表观遗传修饰靶向治疗调控异常甲基化组蛋白白血病患者造血干细胞移植

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FHL2沉默对骨肉瘤U2OS细胞增殖与凋亡的影响

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临床肿瘤学杂志 2018年第1期23卷 1-6页

作者：卢文婷刘爽李赛赛刘佳徐颖茜王建祥王敏中国医学科学院北京协和医学院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量P... 详细信息

目的探讨沉默FHL2表达对骨肉瘤U2OS细胞的增殖和凋亡的影响及其相关机制的研究。方法通过构建FHL2的shRNA干扰载体p LKO.1,制备慢病毒并感染U2OS细胞,分为sh FHL2目的基因干扰组(sh FHL2)和无关序列对照组(SCR);感染96 h后采用实时定量PCR(QPCR)和Western blotting检测两组FHL2 mRNA和蛋白水平。采用MTT方法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期的变化,Western blotting检测FHL2干扰后U2OS细胞相关信号通路的蛋白表达变化。利用双荧光素酶报告基因系统检测FHL2对p53下游基因转录调控的影响。结果与SCR组比较,sh FHL2组感染96 h后FHL2 mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05)。sh FHL2组感染24、48、72、96 h的细胞增殖比分别为1.73±0.08、2.49±0.38、3.26±0.45和4.28±0.29,其中96 h的细胞增殖比低于SCR组(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的细胞凋亡率为(17.55±1.05)%,高于SCR组的(7.73±1.12)%,差异有统计学意义(P<0.05);sh FHL2组感染96 h的G_0/G_1期细胞为(68.18±0.78)%,高于SCR组的(59.73±2.28)%,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰FHL2表达能够显著上调p53、p21和Bax的表达水平并能增强p53对Bax启动子的促转录活性。结论沉默FHL2表达可明显抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞阻滞于G_0/G_1期;FHL2介导了p53对Bax启动子的转录调节作用。FHL2可能会成为新的肿瘤治疗靶点,其机制与p53/Bax和p53/p21通路相关。

关键词：骨肉瘤 FHL2 U2OS细胞株增殖凋亡

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生物活性材料Col-Tgel对人组织干细胞的作用

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中国组织工程研究 2018年第10期22卷 1540-1546页

作者：尹秀秀胡林萍朱才英张孝兵程涛实验血液学国家重点实验室中国医学科学院血液病医院血液学研究所中国医学科学院干细胞医学中心北京协和医学院干细胞与再生医学系中国医学科学院暨北京协和医学院天津市300020

背景:虽然传统的人干细胞二维平面培养体系操作简便,但并不能真正模拟体内的三维生理微环境,不利于进行人干细胞生物学行为研究。目的:为构建一种可为细胞生长增殖提供类似于体内生理环境的三维培养体系,观察生物材料Col-Tgel对人造血... 详细信息

背景:虽然传统的人干细胞二维平面培养体系操作简便,但并不能真正模拟体内的三维生理微环境,不利于进行人干细胞生物学行为研究。目的:为构建一种可为细胞生长增殖提供类似于体内生理环境的三维培养体系,观察生物材料Col-Tgel对人造血干细胞和人间充质干细胞生物活性的影响。方法:(1)体外共培养实验:三维培养组,将绿色荧光蛋白标记的人间充质干细胞与人脐带CD34^+细胞直接接触共培养于生物材料Col-Tgel中;单独培养组,将人脐血CD34^+细胞培养于生物材料Col-Tgel中;二维培养组,将绿色萤光蛋白标记的人间充质干细胞与人脐血CD34^+细胞共培养于transwell小室;对照组,常规培养人脐血CD34^+细胞。培养3 d后,流式细胞仪检测各组CD34^+CD38-CD45RA-CD90^+细胞比例,同时对直接接触培养组进行原位免疫荧光染色;(2)体内移植实验:采用X射线照射NOD/SCID小鼠,照射后24 h分2组治疗,实验组于胫骨骨髓腔移植绿色荧光蛋白标记的人间充质干细胞-生物材料Col-Tgel溶液,对照组移植绿色荧光蛋白标记的人间充质干细胞-PBS溶液,移植3 d后进行移植侧胫骨标本双光子/共聚焦显微镜检测。结果与结论:(1)体外实验:三维培养组CD34^+CD38-CD45RA-CD90^+细胞扩增倍数为二维培养组的2.8倍,说明在生物材料Col-Tgel中培养的间充质干细胞促进了CD34^+CD38-CD45RA-CD90^+细胞的扩增;三维培养组CD34^+CD38-CD45RA-CD90^+细胞扩增倍数较单独培养组增加4.5倍,较对照组增加1.5倍;免疫荧光染色显示,人间充质干细胞与人脐血CD34^+细胞可在生物材料Col-Tgel中存活;(2)体内实验显示,两组均可见存活的人间充质干细胞;(3)结果表明,生物材料Col-Tgel可为人干细胞生长及增殖提供类似于体内微环境的三维体系。

关键词：生物材料 Col-Tgel 干细胞造血干细胞间充质干细胞体外共培养原位免疫荧光染色增殖移植国家自然科学基金水凝胶造血干细胞间质干细胞组织工程

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