检索结果-内蒙古大学图书馆

利用单细胞PCR技术高效筛选鉴定CRISPR/Cas9介导的lncRNA敲除克隆细胞株

中国细胞生物学学报 2017年第4期39卷 463-471页

作者：王卉冯甜甜王冰蕊任思蕊张玲玲刘金花高洁周家喜苏培佟静媛石莉红中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

CRISPR/Cas9技术可简便、快捷、高效地实现基因的敲除。敲除长非编码RNA(long noncodingRNA,lncRNA)时需同时引入1对guideRNA,将lncRNA基因组的全部或者大部分片段敲除,以实现目的基因功能的缺失。现有鉴定lncRNA敲除细胞株所用的方法... 详细信息

CRISPR/Cas9技术可简便、快捷、高效地实现基因的敲除。敲除长非编码RNA(long noncodingRNA,lncRNA)时需同时引入1对guideRNA,将lncRNA基因组的全部或者大部分片段敲除,以实现目的基因功能的缺失。现有鉴定lncRNA敲除细胞株所用的方法一般需单细胞增殖至较多数量,敲除效率较低且筛选耗时耗力。LncRNA DANCR(differentiation antagonizing non-protein codingRNA)在干祖细胞的干性维持过程中起重要作用,且与多种癌症的发生有关,但其作用机制仍未完全明确。作者针对DANCR基因组的3′及5′端设计sgRNA并同时转染到人红白血病细胞系(K562)中。为建立一种高效筛选鉴定lncRNA敲除细胞株的方法,他们先后采用了基因组DNA PCR、少量细胞PCR、单细胞PCR这3种方法来鉴定lncRNA DANCR的敲除情况,系统比较了3种检测方法的优缺点。该文成功建立了利用单细胞PCR技术高效筛选鉴定CRISPR/Cas9介导的lncRNA敲除克隆细胞株的方法。这一方法适用于其他lncRNA敲除情况的鉴定,有助于lncRNA的功能及机制研究。

关键词： CRISPR/Cas9 lncRNA 单细胞PCR

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新融合蛋白CD19scFv/CD80抗白血病作用研究

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中国科学：生命科学 2017年第12期47卷 1397-1403页

作者：陈礼平饶青陈森邢海燕王敏王建祥中国医学科学院&北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室天津300020 天津市儿童医院天津300134

B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)是一种十分常见的血液系统恶性肿瘤,尽管目前化疗效果显著,但仍有部分儿童和成人B-ALL患者疗效较差、预后不佳.研究表明,ALL细胞表面免疫共刺激分子CD80(B7.1)表达降低或不表达,导致白血病细胞不能有效地... 详细信息

B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)是一种十分常见的血液系统恶性肿瘤,尽管目前化疗效果显著,但仍有部分儿童和成人B-ALL患者疗效较差、预后不佳.研究表明,ALL细胞表面免疫共刺激分子CD80(B7.1)表达降低或不表达,导致白血病细胞不能有效地被细胞毒T细胞(CTL)识别杀伤.然而,几乎所有的B-ALL细胞均表达CD19表面抗原.因此,本研究利用前期构建的CD19单链抗体(scFv)/CD80融合基因及表达的融合蛋白,通过融合蛋白中抗CD19scFv,将CD80结合到B-ALL白血病细胞表面,靶向激活CTL细胞,起到杀伤白血病细胞的作用.在体外共培养实验中,该融合蛋白结合B-ALL细胞系Nalm-6细胞后,可诱导淋巴细胞增殖,分泌细胞因子并产生较显著的特异性细胞毒作用.以Nalm-6细胞在免疫缺陷小鼠(Mus musculus)中建立白血病动物模型,CD19scFv/CD80融合蛋白联合输注淋巴细胞可显著延长小鼠的生存时间.本研究表明,该融合蛋白可使逃避免疫监视的B-ALL细胞有效地转化成抗原提呈细胞,进而激活特异性免疫反应,具有潜在的临床应用价值.

关键词： CD19 CD80 单链抗体融合蛋白

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组成活化型Rac1 GTP酶通过上调促血小板血成素受体的表达促进白血病细胞的静息

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第8期24卷 828-832页

作者：李欢王继英于沛陈树英邢海燕田征唐克晶王敏饶青中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究Rac1 GTP酶的活化对白血病细胞静息的影响,并探索其机制。方法:构建Rac1组成活化型慢病毒载体,以此感染急性髓系白血病KG-1a细胞,比较感染了组成活化型Rac1的KG-1a(Rac1-V12-KG-1a)细胞和感染空载体的KG-1a(pCDH-KG-1a)细胞在G... 详细信息

目的:研究Rac1 GTP酶的活化对白血病细胞静息的影响,并探索其机制。方法:构建Rac1组成活化型慢病毒载体,以此感染急性髓系白血病KG-1a细胞,比较感染了组成活化型Rac1的KG-1a(Rac1-V12-KG-1a)细胞和感染空载体的KG-1a(pCDH-KG-1a)细胞在G0期的比例差异。以Rac1特异性抑制剂NSC23766处理感染后KG-1a细胞,4 d后检测两组细胞G0期比例的变化。实时定量PCR检测两组细胞中与细胞周期和细胞静息相关分子的表达。流式细胞术检测小鼠Rac1GTP酶高度活化的AMLI-ETO9a白血病细胞模型中促血小板生成素受体(myeloproliferative leukemia MPL)-和MPL+细胞群在G0期的比例。结果:感染了组成活化型Rac1的Rac1-V12-KG-1a细胞的G0期细胞比例显著高于感染空载体的p CDH-KG-1a细胞的比例[(15.30±0.60)%vs(11.50±0.17)%,P<0.05];抑制剂处理KG-1a细胞后,随着抑制剂浓度的增加G0期细胞比例显著下降(P<0.05)。实时定量PCR检测结果显示,周期抑制因子P21、P27、P57的mRNA表达水平在Rac1-V12-KG-1a细胞表达均有不同程度的上调,静息相关调节分子N-Cadherin和MPL m RNA表达水平均显著升高(P<0.05);流式检测结果显示,MPL+白血病细胞群的比例在G0期显著高于MPL-组[(40.3±3.5)%vs(19.05±7.65)%,P<0.05]。结论:白血病细胞中Rac1 GTP酶的活化通过上调MPL等细胞外在调节因子的表达增加休眠期细胞的比例,从而促进白血病细胞维持静息状态。

关键词： Rac1 GTP酶白血病细胞静息促血小板生成素受体微环境

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硼替佐米在多发性骨髓瘤中耐药机制的研究

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白血病．淋巴瘤 2017年第5期26卷 308-313页

作者：毛雪涵邓书会邱录贵徐燕中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院淋巴瘤诊疗中心实验血液学国家重点实验室天津300020

第一代蛋白酶体抑制剂硼替佐米（BTZ）已广泛应用于临床,其主要通过竞争性结合蛋白酶体β5亚基、抑制蛋白酶体功能来干扰细胞内蛋白质降解过程,从而诱导肿瘤细胞凋亡.自2000年美国食品和药品监督管理局（FDA）批准BTZ用于治疗多发性骨... 详细信息

第一代蛋白酶体抑制剂硼替佐米（BTZ）已广泛应用于临床,其主要通过竞争性结合蛋白酶体β5亚基、抑制蛋白酶体功能来干扰细胞内蛋白质降解过程,从而诱导肿瘤细胞凋亡.自2000年美国食品和药品监督管理局（FDA）批准BTZ用于治疗多发性骨髓瘤（MM）以来,MM患者的缓解率及长期生存率得到了明显提高,但在疾病终末期多数患者仍面临耐药复发的问题.因此,探讨BTZ耐药机制、寻找克服BTZ耐药的用药策略是MM治疗的一大挑战.本文就近年来多项关于MM中BTZ耐药机制的相关研究进展进行综述.

关键词：多发性骨髓瘤抗药性,肿瘤蛋白酶体抑制剂硼替佐米

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ERK信号通路在人胚胎干细胞造血分化中的作用研究

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中国细胞生物学学报 2017年第6期39卷 725-731页

作者：王洪涛刘鑫王梦鸽苏培张磊升刘翠翠王钰吴丹涂茜周家喜中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室天津300020

细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)信号通路在斑马鱼及小鼠造血发生中发挥着重要作用,但其在人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)造血分化中的作用尚不清楚。该研究利用h ESCs单层造血分化... 详细信息

细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)信号通路在斑马鱼及小鼠造血发生中发挥着重要作用,但其在人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,h ESCs)造血分化中的作用尚不清楚。该研究利用h ESCs单层造血分化模型及ERK信号通路抑制剂PD98059探索了ERK信号通路在h ESCs造血分化中的作用。采用免疫荧光技术、流式细胞术分析发现,PD98059能够显著抑制CD43^+造血干/祖细胞的产生。进一步的研究发现,PD98059的作用阶段为APLNR+侧板中胚层产生阶段,在该作用阶段添加PD98059与造血分化全程添加对CD43^+造血干/祖细胞产生的抑制效果一致。该研究结果表明,抑制ERK信号通路通过抑制侧板中胚层细胞的产生而抑制h ESCs造血分化。该研究为建立体外h ESCs高效造血分化体系及规模化产生功能性血细胞奠定了理论基础。

关键词：人胚胎干细胞造血分化 ERK信号通路

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微重力培养条件对造血干祖细胞分化为功能成熟的中性粒细胞的影响

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中国细胞生物学学报 2017年第7期39卷 881-888页

作者：王哲哲张潇予张苏东谢忻琰刘鹏相菲任仟谢雪梅郭荣霞刘飞王彤许元富中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020

该文采用旋转培养方式研究微重力培养条件对造血干祖细胞向中性粒细胞分化的效率和功能的影响。脐血CD34+细胞用扩增体系[Stem Span SFEM培养基、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、Fms相关酪氨酸激酶3受体(Fms-related tyrosine kinas... 详细信息

该文采用旋转培养方式研究微重力培养条件对造血干祖细胞向中性粒细胞分化的效率和功能的影响。脐血CD34+细胞用扩增体系[Stem Span SFEM培养基、干细胞因子(stem cell factor,SCF)、Fms相关酪氨酸激酶3受体(Fms-related tyrosine kinase 3 ligand,Flt3)、血小板生成素(thrombopoietin,TPO)、白细胞介素-3(interleukin-3,IL-3)]静置培养7 d后,再分成静置培养(static culture,SC)组和旋转培养(rotate cell culture system,RCCS)组,并换为分化培养体系[Stem Span SFEM培养基、IL-6、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)、SCF、Flt3、IL-3]再培养9 d。培养过程中用流式细胞术检测CD34、CD38、CD11b、CD16b、CD66b比例,第16 d收集细胞进行中性粒细胞功能检测。结果表明,RCCS组和SC组均能形成形态正常和功能成熟的中性粒细胞,RCCS组CD16b^+的中性粒细胞比例显著增多(29.82%±2.48%vs 15.01%±0.62%,P<0.01),且细胞产生活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的能力显著增强(P<0.05),具有趋化运动能力的细胞增多(50.430%±3.275%vs 34.000%±0.700%,P<0.05)、运动速度增快(8.100±0.404μm/min vs 5.850±0.050μm/min,P<0.05)。该文结果提示,微重力培养条件能促进造血干祖细胞分化为形态正常和功能成熟的中性粒细胞。

关键词：旋转细胞培养 CD34+细胞中性粒细胞分化

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人多能干细胞分化为巨核细胞和血小板高效功能筛选模型的建立

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中国科学：生命科学 2017年第12期47卷 1363-1374页

作者：涂茜刘翠翠吴丹温玉琪王洪涛苏培刘懿莹马峰石莉红周家喜中国医学科学院&北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院干细胞医学中心天津300020 北京协和医学院干细胞与再生医学系天津300020 中国医学科学院输血研究所成都610052

人多能干细胞具有分化为包括巨核细胞在内的多种成熟血细胞的能力,诱导人多能干细胞高效分化产生功能性血小板,为解决临床上血小板来源不足提供了潜在的新来源.建立高效的功能筛选平台,寻找调控巨核分化和血小板产生的关键基因和作用机... 详细信息

人多能干细胞具有分化为包括巨核细胞在内的多种成熟血细胞的能力,诱导人多能干细胞高效分化产生功能性血小板,为解决临床上血小板来源不足提供了潜在的新来源.建立高效的功能筛选平台,寻找调控巨核分化和血小板产生的关键基因和作用机制,有助于实现体外高效和大规模产生血小板.利用脐带血CD34+细胞巨核分化和血小板产生体系以及转录组测序鉴定了调控巨核细胞分化的关键信号通路和基因.利用小鼠(Mus musculus)mAGM-S3基质细胞共培养策略,建立了人多能干细胞高效产生功能性血小板颗粒的模型.利用此模型,对候选的基因进行了功能筛选.结果表明,转录因子RUNX1和ERG显著促进人多能干细胞分化为巨核细胞和血小板.本研究建立的筛选平台可用于揭示人多能干细胞巨核分化和血小板发生的机制.同时,鉴定的转录因子可作为重要的编程因子用于规模化血小板的生产.

关键词：人多能干细胞巨核细胞血小板功能筛选

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多发性骨髓瘤的诊断及危险分层

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白血病．淋巴瘤 2017年第12期26卷 708-711,715页

作者：毛雪涵邱录贵安刚中国医学科学院、北京协和医学院、血液学研究所、血液病医院淋巴瘤诊疗中心、实验血液学国家重点实验室天津300020

多发性骨髓瘤（MM）是一种终末分化的浆细胞恶性克隆性疾病，以骨髓克隆性浆细胞浸润及外周血和（或）尿中出现单克隆M蛋白为主要表现。MM分为冒烟型骨髓瘤（SMM）和活动性骨髓瘤。SMM除骨髓单克隆浆细胞浸润及血和（或）尿中出现单克隆... 详细信息

多发性骨髓瘤（MM）是一种终末分化的浆细胞恶性克隆性疾病，以骨髓克隆性浆细胞浸润及外周血和（或）尿中出现单克隆M蛋白为主要表现。MM分为冒烟型骨髓瘤（SMM）和活动性骨髓瘤。SMM除骨髓单克隆浆细胞浸润及血和（或）尿中出现单克隆M蛋白以外，一般无症状。当有证据证实浆细胞的克隆性增殖导致终末器官损害时即可诊断活动性MM，此时患者需要开始接受系统治疗，而无高危因素的SMM仅需定期观察随访即可。因此，正确的诊断和鉴别诊断关系到开始治疗的指征与时机。此外，MM是一类异质性极强的疾病，总生存期从数月到十余年不等，初诊时进行准确的危险分层有利于实现个体化治疗、改善患者预后。

关键词：多发性骨髓瘤诊断标准危险分层

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特殊T淋巴母细胞淋巴瘤一例诊治并文献复习

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白血病．淋巴瘤 2017年第3期26卷 177-180页

作者：王婷玉李增军吕瑞曲士强邓书会刘薇邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院淋巴瘤诊疗中心实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨伴嗜酸性粒细胞增高的髓淋系肿瘤（FIP1L1-PDGFRα重排型）的正确诊断和治疗.方法报道1例伴嗜酸性粒细胞增高的髓淋系肿瘤（FIP1L1-PDGFRα重排型）患者的诊治过程,并进行相关文献复习.结果该患者根据淋巴结病理诊断为典型的... 详细信息

目的探讨伴嗜酸性粒细胞增高的髓淋系肿瘤（FIP1L1-PDGFRα重排型）的正确诊断和治疗.方法报道1例伴嗜酸性粒细胞增高的髓淋系肿瘤（FIP1L1-PDGFRα重排型）患者的诊治过程,并进行相关文献复习.结果该患者根据淋巴结病理诊断为典型的T淋巴母细胞淋巴瘤,经全面分析和检查正确诊断为伴嗜酸性粒细胞增高的髓淋系肿瘤（FIP1L1-PDGFRα重排型）,并经低剂量伊马替尼治疗获得快速深度缓解.结论伴嗜酸性粒细胞增高的髓淋系肿瘤（FIP1L1-PDGFRα重排型）为罕见的血液肿瘤,虽然病理诊断是淋巴瘤诊断的金标准,但有时需要综合考虑,全面分析临床情况,正确看待病理结果,避免误诊、误治.

关键词：淋巴母细胞淋巴瘤髓淋系肿瘤伊马替尼嗜酸性粒细胞增多

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人脐带来源间充质干细胞向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化

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中国肿瘤生物治疗杂志 2017年第6期24卷 595-600页

作者：范冬梅张子祥赵英新杨铭张砚君颜次慧蒋媛吕军强中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学基础医学院天津300070

目的:观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell,HUMSC)向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化。方法:二步法体外诱导HUMSC向肝细胞分化,通过Real-time PCR和Western blotting检测不同时间点HUMSC中肝细胞特异性基因甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)及白蛋白(albumin,ALB)mRNA和蛋白水平的变化;Transwell实验观察HUMSC在HepG2肝癌细胞条件培养基作用下的趋化现象;采用皮下-原位移植的方法建立BALB/c裸鼠的HepG2肝癌细胞原位移植瘤模型,利用慢病毒感染的方法将HUMSC标记CMV或AFP启动子驱动的f Luc,制备成***或***,并将其注射入荷瘤肝组织,IVIS成像系统观察***向肿瘤部位的迁移归巢及***在肝癌微环境中向肝细胞分化。结果:HUMSC在体外诱导培养过程中出现细胞形态学变化证明其向肝细胞分化,同时诱导培养后AFP、ALB mRNA和蛋白的表达明显升高(均P<0.05);HUMSC向HepG2肝癌细胞的趋化呈瘤细胞密度依赖性(P<0.01);***注射后2 d迁移并聚集于肝脏,注射后5 d肝脏内发光信号进一步增强;***肝内注射后24 h已向肝细胞分化,注射第7天AFP启动子活性最强,注射第9天活性消失。结论:在小鼠体内外证明了HUMSC具有向肝脏归巢及分化的能力,为今后MSC应用于肝癌基因靶向治疗提供了一种新的策略。

关键词：间充质干细胞肝癌归巢分化

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