检索结果-内蒙古大学图书馆

山东医药 2015年第21期55卷 1-3,9页

作者：房敬超张晓龙张晴曹蕾姜爱娜李茜协和干细胞基因工程有限公司天津300384 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的观察人脐带组织间充质干细胞(MSCs)对小鼠B系恶性淋巴瘤和肝癌的趋化作用。方法通过酶切、连接等方法构建p Lenti-f Luc慢病毒表达载体,利用293T细胞包装慢病毒颗粒,并感染人脐带组织华通氏胶来源的MSCs(WJ-MSCs),使其表达萤火虫荧... 详细信息

目的观察人脐带组织间充质干细胞(MSCs)对小鼠B系恶性淋巴瘤和肝癌的趋化作用。方法通过酶切、连接等方法构建p Lenti-f Luc慢病毒表达载体,利用293T细胞包装慢病毒颗粒,并感染人脐带组织华通氏胶来源的MSCs(WJ-MSCs),使其表达萤火虫荧光素酶(f Luc)。分别于NOD/SCID小鼠中建立BJAB淋巴瘤细胞皮下移植模型及BALB/c裸鼠中建立Hep G2肝癌原位移植瘤模型,经尾静脉将MSCs-f Luc注射至荷瘤小鼠体内,采用体内生物发光成像系统观察MSCs-f Luc向肿瘤部位的迁移情况。结果成功构建慢病毒表达载体p Lenti-f Luc,且经慢病毒感染可在WJ-MSCs中稳定表达。成功建立BJAB淋巴瘤细胞皮下移植瘤模型,MSCs-f Luc经小鼠尾静脉注射24 h后选择性地定位于肿瘤部位。成功建立BALB/c裸鼠的Hep G2肝癌皮下原位移植瘤模型,MSCs-f Luc经尾静脉注射2 d后迁移并聚集于肝脏。结论 WJ-MSCs具有向小鼠淋巴瘤和肝癌归巢的能力,此为以MSCs为载体的肿瘤靶向治疗提供了实验基础。

关键词：淋巴瘤肝肿瘤间充质干细胞生物发光成像趋化作用小鼠

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人胚胎干细胞高效诱导产生巨噬细胞方法的建立

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中国输血杂志 2015年第5期28卷 482-487页

作者：郁金凤孙文翠路旭琳边国慧潘旭毛斌黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波李玉佳陈利民周家喜马峰中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052 四川新生命干细胞科技股份有限公司中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱... 详细信息

目的利用人胚胎干细胞(h ESCs)建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,并与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较。方法通过将h ESCs与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)来源的基质细胞共培养产生CD34+CD45+造血干祖细胞,在多种细胞因子的诱导下悬浮培养14 d,利用May-Grünwald Giemsa染色、流式表面抗原及功能检测等方法对我们培养的巨噬细胞和人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞进行比较鉴定。结果该方法可产生大量高纯度的巨噬细胞,成功的建立了体外高效诱导的巨噬细胞分化体系,并且该体系获得的巨噬细胞与人脐带血CD34+细胞来源的巨噬细胞具有相似的表型和功能。结论建立高效巨噬细胞体外诱导分化体系,为进一步研究人类巨噬细胞的早期发育和建立相关疾病模型提供了可靠的方法。

关键词：人胚胎干细胞(hESCs) 巨噬细胞诱导分化

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人胚胎干细胞向嗜酸性粒细胞高效定向诱导分化模型的建立

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中国输血杂志 2015年第5期28卷 479-482页

作者：潘旭杨文钰孙文翠毛斌郁金凤路旭琳黄淑赖默温周涯邹庆李晴曾宪波周家喜马峰中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室四川新生命细胞科技股份有限公司

目的建立从人胚胎干细胞向成熟嗜酸性粒细胞定向诱导分化的高效体外培养模型。方法采用人胚胎干细胞与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)基质细胞共培养的方法,进行早期造血干细胞诱导分化,将诱导分化的造血干细胞进行悬浮培养,在含有血清的... 详细信息

目的建立从人胚胎干细胞向成熟嗜酸性粒细胞定向诱导分化的高效体外培养模型。方法采用人胚胎干细胞与小鼠主动脉-性腺-中肾(m AGM)基质细胞共培养的方法,进行早期造血干细胞诱导分化,将诱导分化的造血干细胞进行悬浮培养,在含有血清的培养基中,分阶段添加不同细胞因子组合进行成熟嗜酸性粒细胞的定向分化和增殖。结果获得从CD34+CD45+细胞扩增了约651倍,且纯度高达95%以上,CD88+Siglec-8+EPO+的成熟嗜酸性粒细胞。结论本研究建立了1种人胚胎干细胞高效定向分化为成熟嗜酸性粒细胞的模型,为进一步深入研究嗜酸性粒细胞的早期发育调控和相关疾病的发生机制奠定了基础。

关键词：人胚胎干细胞嗜酸性粒细胞定向诱导分化

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拟胚体培养体系中造血表面标志的变化及其向红细胞分化潜能的研究

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中国输血杂志 2015年第5期28卷 488-492页

作者：路旭琳郁金凤孙文翠毛斌邹庆潘旭赖默温周涯李晴曾宪波黄淑周琼秀周家喜马峰中国医学科学院北京协和医学院输血研究所四川成都610052 四川新生命干细胞科技股份有限公司中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细... 详细信息

目的探讨拟胚体(EB)造血相关表面标志物的变化及其向红细胞定向诱导分化的潜能。方法利用悬浮培养体系使人胚胎干细胞(h ESCs)形成三维囊状结构(EB),通过添加细胞因子BMP-4、SCF和FL使EB向造血前体细胞分化,通过流式细胞术(FACs)检测细胞发育各个阶段内皮及血细胞表面分子的变化情况以判断细胞的不同发育阶段。采用胰酶消化处理的方式将EB消化为单个细胞并向红细胞诱导分化,在诱导的d7、d14、d21取样,流式检测分析红细胞的成熟程度。结果在EB培养体系中,d6即可检测到造血前体细胞表面标志物CD34和CD31,且在EB培养的d6-d21,CD34+CD31+细胞的比例逐渐升高,到d15达到顶峰(8.86%)。在红细胞定向分化过程中,红细胞的纯度达73.22%,免疫荧光染色显示:ε亚基的阳性率为88%(424/482),γ亚基的阳性率为94%(326/347),而β亚基的阳性率为0%(0/167)。结论建立了1种EB悬浮培养体系和体外诱导红细胞的方法;EB的造血相关表面标志物的表达呈现时序性变化,且由EB分化而来的红细胞具有早期胚胎红细胞的发育特点。

关键词：人胚胎干细胞(hESCs) 拟胚体(EB) 造血表面标志红细胞悬浮培养体外诱导

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利用CRISPR/Cas9技术构建敲除MEIS2基因的HEK293T人胚肾细胞系

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中国细胞生物学学报 2015年第4期37卷 535-541页

作者：卢利莎白杨刘鑫王洪涛高洁杨亦青苏培刘翠翠王钰张磊升熊涛周家喜长江大学生命科学学院荆州434025 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室天津300020 河北北方学院医学检验学院张家口075000

CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sg RNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进... 详细信息

CRISPR/Cas9系统作为一种新型的基因组编辑技术,利用人工设计的向导RNA(singleguide RNA,sg RNA)介导外源表达的Cas9蛋白与基因组靶点特异性结合以实现对基因组DNA的特异性切割,切割后的基因组DNA通过非同源末端连接或同源重组的方式进行修复,从而实现基因的敲除、敲入等。MEIS2属于一类高度保守的同源盒转录因子MEIS家族,研究发现,MEIS2广泛参与胚胎的早期发育及肿瘤的发生发展,但其发挥作用的机制目前还不是很清楚。该研究针对MEIS2基因作用的功能域,设计两个靶向MEIS2基因Exon3和Exon8的sg RNA,通过SURVEYOR分析及Western blot检测,确认了所设计sg RNA的有效性。进一步通过细胞分选及Western blot检测筛选出稳定敲除MEIS2基因的HEK293T细胞株。最后,通过序列测定确认MEIS2发生了移码突变。综上所述,该研究利用CRISPR/Cas9技术成功建立了完全敲除MEIS2的HEK293T细胞株,为研究MEIS2的功能和作用机制提供了有效工具。

关键词： MEIS2 CRISPR/Cas9系统基因敲除

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慢性嗜中性粒细胞白血病:新基因突变对诊断及治疗选择的影响

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临床血液学杂志 2015年第6期28卷 930-932页

作者：张悦中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

慢性嗜中性粒细胞白血病（chronic neutrophilic leukemia,CNL）是一种少见的骨髓增殖性肿瘤（MPN）,以往确诊CNL主要依赖于临床表现和形态学,同时排除其他可以引起中性粒细胞增多的因素或疾病。对于临床疑似CNL患者,根据2008年WHO关于... 详细信息

慢性嗜中性粒细胞白血病（chronic neutrophilic leukemia,CNL）是一种少见的骨髓增殖性肿瘤（MPN）,以往确诊CNL主要依赖于临床表现和形态学,同时排除其他可以引起中性粒细胞增多的因素或疾病。对于临床疑似CNL患者,根据2008年WHO关于CNL的诊断标准,仅有51%的确诊率。随着二代测序技术的广泛开展,逐渐发现与CNL密切相关的基因突变,从而为诊断和治疗提供新的靶点。

关键词：慢性嗜中性粒细胞白血病 CSF3R突变

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Cas9-sgRNA共质粒系统提高在AAVS1位点的打靶效率

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生物技术通讯 2015年第4期26卷 449-453页

作者：俞珺瑶李晓兰张健萍程涛张孝兵中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:为进一步提高CRISPR/Cas9系统的打靶效率,比较共质粒或双质粒表达Cas9内切酶和小向导RNA(sg RNA)的不同载体设计对其打靶效率的影响。方法:将针对AAVS1位点的2个sg RNA序列分别插入表达Cas9的质粒p Sp Cas9上,再将其构建为Cas9-sg ... 详细信息

目的:为进一步提高CRISPR/Cas9系统的打靶效率,比较共质粒或双质粒表达Cas9内切酶和小向导RNA(sg RNA)的不同载体设计对其打靶效率的影响。方法:将针对AAVS1位点的2个sg RNA序列分别插入表达Cas9的质粒p Sp Cas9上,再将其构建为Cas9-sg RNA二合一的共质粒以及独立表达sg RNA和Cas9的双质粒系统;质粒转染293T细胞后,用T7E1酶切方法检测打靶效率。结果:不经过变性退火的PCR片段也能直接进行T7E1酶切;Cas9-sg RNA共质粒系统的打靶效率显著高于双质粒系统。结论:T7E1酶切方法可去除变性退火步骤,简化了传统的检测方法。采用Cas9-sg RNA共表达的载体设计可显著提高打靶效率。

关键词： CRISPR/Cas9 AAVS1位点 T7E1酶切方法打靶效率

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双特异性抗体在血液肿瘤治疗中的研究进展

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国际输血及血液学杂志 2015年第1期38卷 81-84页

作者：万玉玲王建祥中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

免疫治疗作为一种新的肿瘤治疗方法,其基础和临床研究已有大量文献报道.双特异性抗体（BsAb）作为含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,可诱导效应细胞靶向杀伤肿瘤细胞,具有良好的临床应用前景,如抗CD3/抗CD19 BsAb和抗CD33/抗CD3 BsA... 详细信息

免疫治疗作为一种新的肿瘤治疗方法,其基础和临床研究已有大量文献报道.双特异性抗体（BsAb）作为含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,可诱导效应细胞靶向杀伤肿瘤细胞,具有良好的临床应用前景,如抗CD3/抗CD19 BsAb和抗CD33/抗CD3 BsAb等,目前已成为免疫治疗血液肿瘤的研究热点之一.笔者拟就基础及临床试验2个方面介绍BsAb在血液肿瘤治疗中的研究进展,旨在进一步探讨BsAb在血液肿瘤的应用潜能.

关键词：抗体,双特异性血液肿瘤免疫疗法

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骨髓增殖性肿瘤:从JAK2V617F突变到JAK抑制剂

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临床血液学杂志 2015年第6期28卷 923-925页

作者：肖志坚中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

2005年在BCR—ABL（-）骨髓增殖性肿瘤（MPN）中发现JAK2V617F突变，使其从过去的近半个世纪几乎是一个被血液学界遗忘的角落重新回归研究视野。2011年11月FDA批准第1个JAK抑制剂芦可替尼（ruxolitinib）用于IPSS中危-2和高危组原发性... 详细信息

2005年在BCR—ABL（-）骨髓增殖性肿瘤（MPN）中发现JAK2V617F突变，使其从过去的近半个世纪几乎是一个被血液学界遗忘的角落重新回归研究视野。2011年11月FDA批准第1个JAK抑制剂芦可替尼（ruxolitinib）用于IPSS中危-2和高危组原发性骨髓纤维化（PMF）患者的治疗。

关键词：骨髓增殖性肿瘤 JAK2V617F突变 JAK抑制剂

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靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定

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天津医药 2015年第9期43卷 961-964,I0001页

作者：孙亚薇公海艳曹善楠刘鹏朱海燕耿广锋许元富中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室300020

目的通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选,获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法根据TNFβ与肿瘤坏死因子Ⅰ型受体（TNFR1）结合的复合晶体结构,采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个... 详细信息

目的通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选,获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法根据TNFβ与肿瘤坏死因子Ⅰ型受体（TNFR1）结合的复合晶体结构,采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个小分子化合物（C1~C105）,并对其进行细胞活性筛选;MTT法检测小分子化合物抑制TNFβ对L929细胞的细胞毒性;流式细胞术测定小分子化合物对TNFβ引起的细胞凋亡的抑制作用;采用碘化丙啶（PI）单染和流式分析技术检测小分子化合物对L929细胞周期的影响;采用Western blot和双转盘激光共聚焦显微镜分析小分子化合物对TNFβ引起的下游Caspase 3活化的抑制作用。结果 C35能有效抑制TNFβ引起的细胞毒作用,且这种抑制作用呈现剂量依赖性（半数抑制浓度=8.19μmol/L）;C35具有较低的细胞毒性,且对L929细胞周期无影响;C35能阻断TNFβ与其受体结合后引起的细胞凋亡通路,显著抑制TNFβ引起的L929细胞凋亡。结论成功筛选到一个TNFβ小分子抑制剂C35,其能阻断TNFβ引起的细胞凋亡通路,高效抑制TNFβ的细胞毒活性。

关键词：淋巴毒素α 受体,肿瘤坏死因子,Ⅰ型细胞凋亡细胞周期肿瘤坏死因子β 小分子抑制剂信号通路

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