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中国实验血液学杂志 2013年第4期21卷 1063-1068页

作者：郭惠东程涛袁卫平中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体(mammalian target of rapamycin complex,mTORC)是细胞生长、存活、代谢的重要调控中心,它对维持生命有机体的正常生理活动和内稳态的平衡有着重要作用。mTORC根据其蛋白组份可分为mTORC1和mTORC2。mTORC... 详细信息

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体(mammalian target of rapamycin complex,mTORC)是细胞生长、存活、代谢的重要调控中心,它对维持生命有机体的正常生理活动和内稳态的平衡有着重要作用。mTORC根据其蛋白组份可分为mTORC1和mTORC2。mTORC2的主要组成蛋白有mTOR、Rictor、mLST8、Deptor、mSin1、Protor和Hsp70。mTORC2通过作用于Akt,PKCα和SGK1等来调控多项生命活动,如胚胎发育,细胞骨架重建,细胞迁移,蛋白质翻译和修饰等。mTOR信号通路异常已被证实与肿瘤相关,同时发现多种肿瘤发生与mTORC2及其异常调节信号通路相关。因此,对mTORC2组成、功能以及参与的信号通路的研究,可能为进一步研制其相关的靶向抑制药物乃至肿瘤治疗提供新思路。本综述将介绍mTORC2的组成结构、功能、参与的信号通路,及其在血液肿瘤中作用的研究进展。

关键词： mTORC2 PI3K-Akt PKCα SGK1 血液肿瘤

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利妥昔单抗联合氟达拉滨和环磷酰胺治疗慢性淋巴细胞白血病的疗效和安全性

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中华血液学杂志 2013年第5期34卷 383-388页

作者：李菲易树华于珍邢立杰徐燕齐军元赵耀中李增军邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的评价利妥昔单抗联合氟达拉滨和环磷酰胺（FCR）方案治疗慢性淋巴细胞白血病（CLL）的疗效和安全性。方法回顾性分析2003年4月至2012年1月应用FCR方案治疗的26例CLL患者病例资料。根据患者的Rai危险度分层、β2-微球蛋白（β2-MG）、... 详细信息

目的评价利妥昔单抗联合氟达拉滨和环磷酰胺（FCR）方案治疗慢性淋巴细胞白血病（CLL）的疗效和安全性。方法回顾性分析2003年4月至2012年1月应用FCR方案治疗的26例CLL患者病例资料。根据患者的Rai危险度分层、β2-微球蛋白（β2-MG）、LDH、ZAP-70表达、CD38表达、细胞遗传学和免疫球蛋白重链可变区基因（IgVH）突变状态等指标进行分组，行疗效和生存分析。同时评价FCR方案的安全性。结果26例患者完全缓解（CR）10例（38．5％），部分缓解（PR）10例（38．5％），总反应率（ORR）76．9％。中位随访30（3—98）个月，中位无进展生存（PFS）时间42（16～68）个月，总生存（OS）时间63（41～85）个月。曾治疗疗程数〈2个、2个疗程骨髓淋巴细胞比例下降I〉50％、低LDH、低β2-MG和ZAP-70阴性与高CR率相关（P值分别为0．014、0．008、0，027、0．035和0．013）。微小残留病（MRD）阴性、LDH正常和2个疗程骨髓淋巴细胞比例下降≥50％的患者PFS时间和Os时间明显优于相应对照组（P值均〈0．05），非遗传学高危组患者PFS时间优于遗传学高危组患者（P=0．005），OS时间差异无统计学意义。FCR方案的主要不良反应为胃肠道反应（88．5％）；其次为骨髓抑制（80．8％），包括中性粒细胞减少、贫血和血小板减少；感染发生率为30．8％，主要为肺部感染。结论FCR方案是治疗CLL患者的一种有效而安全的方案。MRD阳性、LDH升高、2个疗程骨髓淋巴细胞比例下降〈50％和高危遗传学异常患者应在获得治疗反应后尽快寻求更加有效的治疗方案。

关键词：白血病淋巴细胞慢性 B细胞利妥昔单抗氟达拉滨环磷酰胺抗肿瘤联合化疗方案

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15d-PGJ2对骨髓间充质干细胞培养上清中细胞因子的影响

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中国实验血液学杂志 2013年第6期21卷 1557-1562页

作者：池颖杜文静崔俊杰陈芳韩之波马凤霞李雪杨少光卢士红韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

PPARγ配体15d-PGJ2(15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2)对细胞有抑制增殖、促进分化和凋亡的作用,但是它对骨髓间充质干细胞(BM-MSC)培养上清中细胞因子的影响还未见报道。本研究探讨15d-PGJ2对BM-MSC培养上清中细胞因子的影响。首先... 详细信息

PPARγ配体15d-PGJ2(15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2)对细胞有抑制增殖、促进分化和凋亡的作用,但是它对骨髓间充质干细胞(BM-MSC)培养上清中细胞因子的影响还未见报道。本研究探讨15d-PGJ2对BM-MSC培养上清中细胞因子的影响。首先对正常人骨髓进行分离培养获得可传代的贴壁生长的成纤维细胞样细胞,然后应用流式细胞术检测细胞的表型,应用条件培养液诱导细胞向成脂和成骨分化以鉴定所获得细胞为BM-MSC。在BM-MSC培养体系中加入10、20、40和60μmol/L的15d-PGJ2并培养24 h,用实时定量PCR测定PPARγmRNA水平,共聚焦免疫荧光技术检测PPARγ的表达水平。结果发现,当15d-PGJ2的浓度达到20μmol/L时细胞出现了凋亡并大量从培养瓶表面脱落;而10μmol/L的15d-PGJ2刺激细胞24 h后PPARγ的mRNA表达水平增高,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。然后用含有10μmol/L 15d-PGJ2和不含15d-PGJ2体系分别培养BM-MSC 24 h并用蛋白芯片检测培养上清,发现有部分因子表达水平发生了变化。结论:TIMP-2在15d-PGJ2刺激后下调,且信号值及变化水平有意义。

关键词： 15d-PGJ2 间充质干细胞细胞因子

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非整合型质粒重编程脐带血CD34^+细胞形成诱导性多潜能干细胞的研究

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 728-734页

作者：张权娥刘淑平刘延风张鸿雁袁卫平陈桂彬李彦欣许静中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探索和优化非整合质粒的方法,将人脐带血来源的CD34+(CB CD34+)细胞进行重编程,建立无病毒的iPS技术体系。利用细胞核转染仪将质粒pEB-C5和pEB-Tg转入短暂培养后的CB CD34+细胞中,使其进行重编程形成iPSC,14 d后观察到2×106C... 详细信息

本研究探索和优化非整合质粒的方法,将人脐带血来源的CD34+(CB CD34+)细胞进行重编程,建立无病毒的iPS技术体系。利用细胞核转染仪将质粒pEB-C5和pEB-Tg转入短暂培养后的CB CD34+细胞中,使其进行重编程形成iPSC,14 d后观察到2×106CB CD34+细胞中约有200个类似ES细胞特征的克隆出现,并对产生的iPSC进行体内外多能性鉴定及细胞核型检测。结果表明,重编程后的CB CD34+细胞的多能性基因表达与ESC类似,细胞核型正常,外源基因无插入,且具有体内分化成三胚层的全能性。结论:利用非整合型质粒的方法重编程CB CD34+细胞形成iPSC,该方法无外源基因插入、重复性好、操作简单、且效率较高,为建立相对安全的iPSC提供了一个行之有效的途径,为深入探索iPSC应用于临床药物的筛选、组织工程和再生医学研究等提供了很好的研究材料。

关键词：多潜能干细胞脐带血CD34+细胞非整合型质粒

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NKT细胞与移植物抗宿主病

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中国实验血液学杂志 2013年第5期21卷 1345-1350页

作者：赵蕾郝莎袁卫平程涛中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

NKT细胞(自然杀伤T细胞)是一种免疫T细胞,同时表达传统T细胞和自然杀伤细胞的表面标志,经特异抗原刺激后能够分泌大量细胞因子,调节Th1/Th2平衡,在预防和治疗移植物抗宿主病方面发挥重要作用。与此同时,NKT细胞能够发挥抗肿瘤和抗感染效... 详细信息

NKT细胞(自然杀伤T细胞)是一种免疫T细胞,同时表达传统T细胞和自然杀伤细胞的表面标志,经特异抗原刺激后能够分泌大量细胞因子,调节Th1/Th2平衡,在预防和治疗移植物抗宿主病方面发挥重要作用。与此同时,NKT细胞能够发挥抗肿瘤和抗感染效应,进而加大了NKT细胞在异基因造血干细胞移植方面的应用,帮助患者重建移植后免疫。因此,进一步了解NKT细胞生物学和免疫学特征及其具体免疫调节机制,对运用NKT细胞防治移植中出现移植物抗宿主病有重要的指导意义。本文就NKT细胞的生物学特征、分类、分化发育,免疫活化及NKT细胞与GVHD(包括机制)、NKT细胞与肿瘤、NKT细胞与感染和NKT细胞与临床GVHD研究进行综述。

关键词：自然杀伤T细胞移植物抗宿主病细胞因子异基因造血干细胞移植

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抑制Larp4b表达不影响小鼠Lin^-造血细胞集落形成能力

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 735-740页

作者：王晓娟庞雅坤程辉董芳梁昊岳张英驰汪晓敏许静程涛袁卫平中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

Larp4b是人类LARP家族中的一员,为广谱翻译因子,可结合RNA并促进mRNA的翻译。前期本实验室的研究工作提示白血病患者存在Larp4b基因表达变化。本研究检测Larp4b基因在造血各系细胞中的表达量,敲降Larp4b表达对Lin-造血细胞生物行为的影... 详细信息

Larp4b是人类LARP家族中的一员,为广谱翻译因子,可结合RNA并促进mRNA的翻译。前期本实验室的研究工作提示白血病患者存在Larp4b基因表达变化。本研究检测Larp4b基因在造血各系细胞中的表达量,敲降Larp4b表达对Lin-造血细胞生物行为的影响。利用RT-PCR检测Larp4b基因在造血各系细胞中的表达,用病毒上清感染Lin-细胞,分选EGFP+细胞,PI染色法检测细胞周期,AnnexinV-PE/7-AAD双染法检测细胞凋亡,并进行集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)。结果表明:Larp4b基因在造血各系细胞中表达不同,Larp4b基因在粒系和巨噬祖细胞(GMP)以及髓细胞(M)的表达较高,在T淋巴细胞中表达明显低,抑制Larp4b表达不影响Lin-造血细胞体外集落形成能力,不影响Lin-造血细胞的细胞周期和凋亡。结论:Larp4b基因在髓系细胞中表达较高。抑制Larp4b表达不影响Lin-造血细胞集落形成能力,不影响Lin-造血细胞的增殖,这为后续Larp4b体内实验研究奠定了基础。

关键词： Larp4b 造血干祖细胞造血细胞慢病毒载体

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转录因子GATA-2对iASPP基因的转录调控研究

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 550-555页

作者：邢海燕贾玉娇唐克晶田征陈一瑞饶青王敏王建祥中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

癌基因iASPP促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其转录起始位点上游序列有转录因子GATA-2的假定结合位点,GATA-2在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要作用。本研究旨在探讨GATA-2对iASPP的转录调控作用。首先检测了部分白血病细胞系中iASPP和G... 详细信息

癌基因iASPP促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其转录起始位点上游序列有转录因子GATA-2的假定结合位点,GATA-2在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要作用。本研究旨在探讨GATA-2对iASPP的转录调控作用。首先检测了部分白血病细胞系中iASPP和GATA-2蛋白的表达,然后构建带有GATA-2开放读码框的真核表达载体与带有iASPP转录起始位点上游3000 bp至下游500 bp序列中GATA-2假定结合位点的荧光素酶报告载体,共转染HEK293和CV-1细胞,检测荧光素酶活性,并对荧光素酶活性上调的结合位点区进行染色质免疫共沉淀实验。结果显示,白血病细胞系中iASPP高表达的细胞大多存在GATA-2的高表达;GATA-2对iASPP报告基因荧光素酶活性有显著影响,并呈现明显的"剂量-效应"关系。当pCMV5-GATA2转染剂量上升至100 ng时,iASPP荧光素酶活性在HEK293细胞中上调到2倍;此转录激活作用在CV-1细胞中尤为显著,荧光素酶活性上调可达6.7。染色质免疫共沉淀结果证实GATA-2与iASPP转录起始区nt-361～-334有特异性结合。结论:转录因子GATA-2可以与iASPP的转录调控区结合,并促进iASPP基因转录。

关键词： GATA-2 iASPP 转录调控荧光素酶活性

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Survivin在急性髓系白血病患者中的表达

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中国实验血液学杂志 2013年第5期21卷 1099-1104页

作者：孙文宣张培红方立环田征唐克晶饶青王敏王建祥中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究通过检测Survivin在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达,探讨其表达水平与临床变量之间的关系及其与BCL-2、Bcl-xL和MCL-1之间的相关性。应用免疫组织化学染色技术检测63例初诊AML患者的Survivin表达水平,比较其表达量与正常对... 详细信息

本研究通过检测Survivin在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达,探讨其表达水平与临床变量之间的关系及其与BCL-2、Bcl-xL和MCL-1之间的相关性。应用免疫组织化学染色技术检测63例初诊AML患者的Survivin表达水平,比较其表达量与正常对照者的差别,并分析其与年龄、性别、白细胞计数、诊断分型、预后分型以及治疗疗效等临床参数之间关系,特别是与AML1/ETO融合蛋白之间的联系;描绘患者的生存曲线;分析Survivin表达与BCL-2、Bcl-xL和MCL-1表达之间的相关性。结果表明:AML患者骨髓中Survivin的表达量显著高于对照组(P<0.01),其表达量与患者的年龄、性别、白细胞计数等无关;在不同NCCN预后分组中表达量无显著差异;伴AML1/ETO阳性以及FLT3-ITD突变的患者,其Survivin表达水平与其他类型患者无明显差异;Survivin阳性患者,其CR率低于阴性患者而复发率高于阴性患者,但无统计学差异;Survivin阳性患者的累积生存率低于阴性患者(P=0.04);Survivin表达水平与MCL-1呈明显正相关(R=0.639,P=0.000)。结论:Survivin的表达与白血病发生、发展密切相关,有可能用作为预后分析的参考指标;Survivin与MCL-1可能相互作用或协同作用。

关键词： Survivin 急性髓系白血病 AML1 ETO MCL-1

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细胞周期抑制剂SNS-032对小鼠造血干细胞生物活性的影响研究

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中国实验血液学杂志 2013年第3期21卷 741-745页

作者：祁瑞哲纪庆张丽艳张宇袁卫平程涛高瀛岱许静中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究旨在探讨SNS-032(C17H24N4O2S2)对小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)细胞周期、凋亡、分化及自我更新的影响及其可能的相关机制。利用极限稀释实验检测SNS-032作用前后HSC自我更新的变化,用流式细胞术检测SNS-03... 详细信息

本研究旨在探讨SNS-032(C17H24N4O2S2)对小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)细胞周期、凋亡、分化及自我更新的影响及其可能的相关机制。利用极限稀释实验检测SNS-032作用前后HSC自我更新的变化,用流式细胞术检测SNS-032作用前后小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+及Lin-c-kit+Sca-1-表型细胞的细胞周期及凋亡的变化,用实时定量PCR检测SNS-032作用前后细胞周期相关基因、凋亡相关基因及HSC自我更新相关基因mRNA表达量的水平。结果显示,SNS-032处理后,小鼠骨髓细胞中HSC的自我更新能力没有明显变化;加SNS-032处理后,小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞的细胞周期无统计学意义的变化(P>0.05),小鼠骨髓Lin-c-kit+Sca-1-表型细胞的G1期细胞增多(P<0.05);小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+Sca-1+表型细胞和Lin-c-kit+Sca-1-表型细胞的细胞凋亡增多,与对照相比均无显著性差异(P>0.05)。小鼠骨髓细胞经SNS-032处理后,HSC周期相关基因CDK1、CDK2、CDK7、p27的表达量均明显降低(P<0.05),而CDK4,CDK6,p21,p18,p19,p16的表达与对照组相比没有明显变化(P>0.05)。凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Puma和p53表达量与对照组相比没有明显区别(P>0.05),与干细胞自我更新相关的基因中Bim,Sall4,Notch1表达量升高,但与对照组相比没有显著性差异(P>0.05)。结论:SNS-032没有明显的抑制正常造血干细胞自我更新、分化作用,而且SNS-032没有明显的诱导正常造血干、祖细胞的凋亡作用。

关键词： CDK2 造血干细胞 SNS-032

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信号通路在套细胞淋巴瘤发病机制中作用的研究进展

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中华血液学杂志 2013年第12期34卷 1073-1075页

作者：杨文娟于珍邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）大约占B细胞非霍奇金淋巴瘤的6％，其肿瘤细胞来源于淋巴结的套区或初级滤泡的幼稚B细胞，病理学分型可以分为经典型、小细胞型、母细胞型及多形型，它们具有不同的增殖特点及基因表达谱。免... 详细信息

套细胞淋巴瘤（mantle cell lymphoma，MCL）大约占B细胞非霍奇金淋巴瘤的6％，其肿瘤细胞来源于淋巴结的套区或初级滤泡的幼稚B细胞，病理学分型可以分为经典型、小细胞型、母细胞型及多形型，它们具有不同的增殖特点及基因表达谱。免疫表型特点为表达CD5及B细胞相关抗原CD20、CD22、CD79，

关键词：套细胞淋巴瘤 B细胞非霍奇金淋巴瘤发病机制信号通路 lymphoma 小细胞型病理学分型基因表达谱

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