检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2011年第1期25卷 49-52页

作者：孙振民肖艳任丽丽雷晓波王健伟北京协和医学院/中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100730

目的研究肠道病毒71型（EV71）诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用CCK8比色法检测EVT1感染对于人横纹肌肉瘤细胞RD增殖的影响，通过Hoechst33342染色和Caspase3活性测定检测细胞凋亡特征，用WesternBlot方法检测凋亡相关蛋白Caspase3和8... 详细信息

目的研究肠道病毒71型（EV71）诱导细胞凋亡的分子机制。方法采用CCK8比色法检测EVT1感染对于人横纹肌肉瘤细胞RD增殖的影响，通过Hoechst33342染色和Caspase3活性测定检测细胞凋亡特征，用WesternBlot方法检测凋亡相关蛋白Caspase3和8的激活。同时通过免疫共沉淀检测EV71感染后细胞内Bax的活化。结果EV71感染RD细胞可以明显抑制细胞增殖，引起Caspase3、8和PARP蛋白的激活，同时引起Bax蛋白表达增加并发生构象变化。结论EV71通过Bax构象变化诱导Caspase依赖的细胞凋亡。

关键词：肠道病毒属细胞凋亡

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丙型肝炎病毒受体研究进展

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中华肝脏病杂志 2011年第11期19卷 877-880页

作者：程敏杨威中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室 100176

丙型肝炎病毒（HCV）是丙型肝炎的主要致病因子，目前全球至少有1．7亿人感染HCV。HCV感染具有高度慢性化特点，高达50％～80％的感染者由于不能有效清除体内病毒而发展为慢性感染，以及肝硬化和肝细胞癌，对人类的生活质量构成严重威胁... 详细信息

丙型肝炎病毒（HCV）是丙型肝炎的主要致病因子，目前全球至少有1．7亿人感染HCV。HCV感染具有高度慢性化特点，高达50％～80％的感染者由于不能有效清除体内病毒而发展为慢性感染，以及肝硬化和肝细胞癌，对人类的生活质量构成严重威胁。HCV属黄病毒科单股正链RNA病毒，基因组全长9．6Kb，共编码包括包膜糖蛋白E1、E2在内的十种蛋白。

关键词：肝炎病毒,丙型受体 ,病毒病毒入侵

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TRIM38蛋白对核转录因子NF-κB的影响

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中华实验和临床病毒学杂志 2011年第1期25卷 60-62页

作者：刘新蕾雷晓波王健伟洪涛北京协和医学院/中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100730

目的TRIM家族是一类结构保守的蛋白家族，目前发现其包含70多种成员，参与了增值、分化、细胞凋亡及病毒与宿主的免疫应答等。TRIM38的功能尚不清楚。本研究拟通过实验确证TRIM38对核转录因子NF—KB活性的调节。方法在293T细胞中过表达T... 详细信息

目的TRIM家族是一类结构保守的蛋白家族，目前发现其包含70多种成员，参与了增值、分化、细胞凋亡及病毒与宿主的免疫应答等。TRIM38的功能尚不清楚。本研究拟通过实验确证TRIM38对核转录因子NF—KB活性的调节。方法在293T细胞中过表达TRIM38，采用荧光素酶报告系统检测TRIM38及其结构与缺失突变体对NF—KB启动子活性的影响。用WesternBlot方法检测TRIM38蛋白的表达。结果TRIM38可以激活NF—KB，并且在构建的TRIM38保守结构域的缺失突变体中，只有SPRY结构域缺失后不影响TRIM38的功能。结论TRIM38是一个不依赖于SPRY结构域的NF—KB的激活蛋白。

关键词： TRIM38 转录因子转录,遗传基因

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BST-2抑制HIV-1病毒样颗粒释放的研究

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病毒学报 2011年第4期27卷 319-325页

作者：杜应莲胡斯奇庞晓静岑山金奇郭斐中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100730 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所免疫生物室北京100050

BST-2是最近发现的可以抑制成熟HIV-1(human immunodeficiency virus,HIV)病毒颗粒从哺乳动物细胞表面释放的宿主因子,随之发现其也可以抑制多种包膜病毒的释放。本研究采用密码子优化的表达HIV-1 gag和gag-pol蛋白的质粒所形成的病毒... 详细信息

BST-2是最近发现的可以抑制成熟HIV-1(human immunodeficiency virus,HIV)病毒颗粒从哺乳动物细胞表面释放的宿主因子,随之发现其也可以抑制多种包膜病毒的释放。本研究采用密码子优化的表达HIV-1 gag和gag-pol蛋白的质粒所形成的病毒样颗粒作为研究对象,观测BST-2对这两种病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)的释放抑制情况及其作用机制。结果发现,瞬时表达和稳定表达的BST-2均可以显著抑制病毒样颗粒从哺乳动物细胞释放,同时发现这两种病毒样颗粒(gag/gag-pol)的释放都可以被BST-2抑制;而且,HIV-1中Vpu蛋白可以拮抗BST-2抑制HIV病毒样颗粒释放的作用,另外,通过化学试剂和酶学方法处理,确证BST-2可以被包装进病毒样颗粒中。

关键词： BST-2 人类免疫缺陷病毒细胞限制因子病毒释放

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人IgG Fc标签融合表达载体的构建及H5 HA1融合蛋白的表达

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中国生物制品学杂志 2011年第10期24卷 1130-1133页

作者：赵荣茂郭丽吴超王健伟洪涛北京协和医学院中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100730

目的构建人IgG Fc标签融合表达载体,表达并纯化H5 HA1融合蛋白。方法以pCAGGS载体为基础,依次插入IL-2信号肽及人IgG Fc片段,构建人IgG Fc标签融合表达载体。将H5 HA1克隆至含人IgG Fc标签的融合表达载体pCAGGS-F-IL-2/Fc中,瞬时转染293... 详细信息

目的构建人IgG Fc标签融合表达载体,表达并纯化H5 HA1融合蛋白。方法以pCAGGS载体为基础,依次插入IL-2信号肽及人IgG Fc片段,构建人IgG Fc标签融合表达载体。将H5 HA1克隆至含人IgG Fc标签的融合表达载体pCAGGS-F-IL-2/Fc中,瞬时转染293T细胞,进行融合蛋白的表达。表达的蛋白经Protein G亲和层析一步法纯化。结果人IgG Fc标签融合表达载体经酶切及测序证明构建正确;在293T细胞中分泌表达的H5 HA1与人IgG Fc的融合蛋白HA1-Fc相对分子质量约75 000,转染后72和96 h表达量最高;纯化的融合蛋白纯度达90%以上,含量为1.63μg/ml。结论成功构建了人IgG Fc标签融合表达载体,表达并纯化了HA1-Fc融合蛋白,为流感病毒侵入及免疫机制的研究奠定了基础。

关键词：免疫球蛋白Fc片段血凝素糖蛋白类,流感病毒融合蛋白

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人博卡病毒结构和非结构蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

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中国生物制品学杂志 2011年第5期24卷 497-501页

作者：王雅英郭丽吴超王健伟洪涛北京协和医学院中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100730

目的原核表达、纯化人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)结构蛋白(VP2)和非结构蛋白(NS1和NP1),并制备多克隆抗体。方法采用PCR法扩增HBoV VP2、NS1和NP1基因,克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重... 详细信息

目的原核表达、纯化人博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)结构蛋白(VP2)和非结构蛋白(NS1和NP1),并制备多克隆抗体。方法采用PCR法扩增HBoV VP2、NS1和NP1基因,克隆入原核表达载体pET-30a(+)中,转化*** BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经离子交换和Ni2+金属螯合层析纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot分析,并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,ELISA法检测多抗效价。结果重组原核表达质粒pET-30a-VP2、pET-30a-NS1和pET-30a-NP1经双酶切和测序证实构建正确;重组VP2蛋白以包涵体形式表达为主,重组NP1蛋白以可溶性表达为主,重组NS1蛋白为包涵体形式表达,表达量分别为菌体总蛋白的20%、40%和30%;纯化的重组蛋白纯度分别可达85%、95%以上和80%,免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体效价分别为VP2和NP1高于1∶16 000,NS1为1∶8 000。结论已成功表达了HBoV VP2、NS1和NP1蛋白,并制备了高效价的多克隆抗体,为进一步研究HBoV的致病机制及开展流行病学调查等提供了材料。

关键词：博卡病毒属原核细胞基因表达纯化抗体

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肠道病毒71型3C蛋白表达后细胞蛋白质组差异分析

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基础医学与临床 2011年第6期31卷 652-655页

作者：雷晓波孙振民刘新蕾任丽丽王健伟中国医学科学院北京协和医学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100730

目的利用蛋白质组学技术研究肠道病毒71型(EV71)编码3C蛋白对宿主细胞蛋白表达的影响。方法在293T细胞中瞬时过表达EV71 3C蛋白,应用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)检测3C表达后293T细胞中蛋白的差异。选取表达水平有明显变化的蛋白用We... 详细信息

目的利用蛋白质组学技术研究肠道病毒71型(EV71)编码3C蛋白对宿主细胞蛋白表达的影响。方法在293T细胞中瞬时过表达EV71 3C蛋白,应用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)检测3C表达后293T细胞中蛋白的差异。选取表达水平有明显变化的蛋白用Western blot进行验证。结果在293T细胞中过表达3C蛋白后,可引起5个蛋白表达水平发生明显改变,其中4个蛋白表达上调,1个蛋白(HSPA4)表达下调。Western blot验证表明过表达3C可降低HSPA4的表达,HeLa细胞中HSPA4表达为对照的46.8%±10.1%(P<0.05)。结论过表达EV713C蛋白可引起细胞内蛋白表达差异。

关键词：肠道病毒EV71 3C 蛋白质组差异

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自噬抑制剂3-MA抑制EV71病毒颗粒的产生与释放

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中华实验和临床病毒学杂志 2011年第3期25卷 176-178页

作者：张晓延郗雪艳赵振东北京协和医学院中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室山西医科大学汾阳学院医学检验系

目的通过研究肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）感染引起细胞的自噬及抑制自噬对病毒滴度的影响,为进一步明确EV71的致病机制提供基础.方法利用Western Blot检测EV71感染后RD-A细胞内源性LC3的型别转换和P62的降解来指示细胞发生... 详细信息

目的通过研究肠道病毒71型（Enterovirus 71,EV71）感染引起细胞的自噬及抑制自噬对病毒滴度的影响,为进一步明确EV71的致病机制提供基础.方法利用Western Blot检测EV71感染后RD-A细胞内源性LC3的型别转换和P62的降解来指示细胞发生自噬的水平,通过测定染毒细胞培养上清中EV71病毒CCID50来观察抑制自噬后细胞释放EV71感染性病毒颗粒的变化.结果 EV71的感染促进了细胞LC3的型别转换和F62的降解,诱导了细胞发生自噬;3-MA抑制细胞自噬后,EV71染毒细胞产生的感染性EV71病毒颗粒数量减少.结论 EV71可以诱导细胞发生自噬,细胞自噬可能促进EV71感染性病毒颗粒的产生和释放.

关键词：肠道病毒属自噬 3-甲基腺嘌呤病毒滴度

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红色毛癣菌不同生长阶段的基因表达谱分析

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中国科学：生命科学 2011年第5期41卷 414-421页

作者：徐星晔刘涛冷文川董杰薛颖杨汉春金奇中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人兽共患病重点实验室农业微生物技术国家重点实验室北京100094 中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京100176

红色毛癣菌是最重要的浅表感染真菌.目前对红色毛癣菌分子和遗传学方面的研究还比较有限.应用cDNA芯片技术对红色毛癣菌不同生长阶段的基因表达谱进行了分析,获得了2044个在不同生长阶段差异表达的基因.聚类分析表明,这些基因可以分为3... 详细信息

红色毛癣菌是最重要的浅表感染真菌.目前对红色毛癣菌分子和遗传学方面的研究还比较有限.应用cDNA芯片技术对红色毛癣菌不同生长阶段的基因表达谱进行了分析,获得了2044个在不同生长阶段差异表达的基因.聚类分析表明,这些基因可以分为3种不同的表达模式.本研究验证了先前的结论,即在红色毛癣菌中存在预储存的mRNA.对不同生长状态下转录谱和基因功能分析表明,糖酵解过程中的一些重要的酶具有相似的表达模式,说明在红色毛癣菌的生长过程中,这些酶可能具有共同的调控模式.同时,在红色毛癣菌生长过程中,一些参与诸如小GTPase调控、cAMP依赖的调控途径以及MAPK信号传导途径的基因表达也发生了变化.尽管这些基因和相关的调控途径在红色毛癣菌中的具体生物学功能还不清楚,但它们可能在其生长过程中起了调控作用.

关键词：红色毛癣菌基因表达谱 cDNA 芯片生长阶段

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轮状病毒NSP1蛋白的泛素连接酶活性研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2010年第6期24卷 451-454页

作者：秦岚雷晓波任丽丽王健伟洪涛中国医学科学院病原生物学研究所病毒基因工程国家重点实验室北京协和医学院100730 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

目的通过实验确证轮状病毒（Rotavirus,RV）非结构蛋白1（NSP1）的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建到pEGFP-C1质粒上,与表达泛素的质粒pBlue-Script-HA-Ubiqu... 详细信息

目的通过实验确证轮状病毒（Rotavirus,RV）非结构蛋白1（NSP1）的泛素连接酶活性,为阐明其在RV复制和致病机制中的作用提供线索.方法将NSP1基因及其RING结构域缺失突变体构建到pEGFP-C1质粒上,与表达泛素的质粒pBlue-Script-HA-Ubiquitin共转染人胚肾293FT细胞,用免疫荧光和Western blot方法确定蛋白的表达,并通过免疫共沉淀方法分析蛋白的泛素化.结果 NSP1蛋白的表达可增加细胞内的泛素化水平,并且自身也发生泛素化.结论 NSP1蛋白具有E3泛素连接酶活性.可能在泛素化调控机制中发挥作用.

关键词：轮状病毒属病毒非结构蛋白质类泛素连接酶类

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