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中华皮肤科杂志 2014年第10期47卷 691-694页

作者：李志量张晓东陈浩刘沐桑靳培英冯素英王宝玺中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院江苏省皮肤病与性病学重点实验室南京210042

患者男,55岁.临床表现为四肢、躯干紧张性大疱,组织学表现为表皮下水疱,真皮浅层有淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等浸润,初步诊断为大疱性类天疱疮（BP）.在血清学分析中,发现该患者血清中自身抗体与盐裂皮肤真皮侧结合,且酶联免疫吸附法未检... 详细信息

患者男,55岁.临床表现为四肢、躯干紧张性大疱,组织学表现为表皮下水疱,真皮浅层有淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等浸润,初步诊断为大疱性类天疱疮（BP）.在血清学分析中,发现该患者血清中自身抗体与盐裂皮肤真皮侧结合,且酶联免疫吸附法未检测到BP180、BP230、Ⅶ型胶原抗体,从而排除了大疱性类天疱疮、获得性大疱性表皮松解症的诊断.通过免疫印迹、免疫沉淀检测,发现该患者血清存在与真皮侧200 000蛋白结合的抗体,综合这些特点,诊断该患者为抗P200类天疱疮,即抗层黏连蛋白γ1类天疱疮。

关键词：抗层黏连蛋白γ1类天疱疮抗P200类天疱疮印迹法,蛋白质

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人参皂苷Rg1保护UVB所致皮肤成纤维细胞急性损伤

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中国麻风皮肤病杂志 2015年第3期31卷 136-139页

作者：刘勇徐浩翔惠云张晓峰肖学敏王宝玺新疆维吾尔自治区人民医院皮肤科乌鲁木齐830002 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤与性病分子生物学重点实验室南京210042 南京军区南京总医院皮肤科南京210042

目的:确定人参皂苷Rg1对UVB损伤成纤维细胞的保护作用。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞,分为正常对照组、UVB照射组、UVB照射+人参皂苷Rg1组(5,10和20μg/mL),MTT法检测细胞增殖活性,ELISA法检测细胞中SOD活性、MDA和细胞上清液中MMP-1... 详细信息

目的:确定人参皂苷Rg1对UVB损伤成纤维细胞的保护作用。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞,分为正常对照组、UVB照射组、UVB照射+人参皂苷Rg1组(5,10和20μg/mL),MTT法检测细胞增殖活性,ELISA法检测细胞中SOD活性、MDA和细胞上清液中MMP-1和MMP-3的含量,Western blot法检查细胞中MMP-1和MMP-3的表达。结果:UVB联合不同浓度人参皂苷Rg1组较UVB照射组,细胞SOD活性升高,MDA、MMP-1和-3含量均有不同程度下降,人参皂苷Rg1浓度越高作用越明显。结论:人参皂苷Rg1对UVB造成的皮肤成纤维细胞损伤具有保护作用。

关键词：人参皂苷Rg1 皮肤成纤维细胞 UVB

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银屑病患者皮肤中原位记忆T淋巴细胞的检测

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中华皮肤科杂志 2014年第11期47卷 800-802页

作者：栾超杨永红王焱刘毅陈敏蒋明军王宝玺中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

目的研究皮肤组织原位记忆T淋巴细胞在银屑病发病过程中的作用.方法收集32例进行期斑块状银屑病患者的临床资料,采集每例患者的皮损和非皮损组织、9例患者皮损消退后皮肤标本;10例健康人皮肤为对照.采用免疫组化法检测组织原位记忆T... 详细信息

目的研究皮肤组织原位记忆T淋巴细胞在银屑病发病过程中的作用.方法收集32例进行期斑块状银屑病患者的临床资料,采集每例患者的皮损和非皮损组织、9例患者皮损消退后皮肤标本;10例健康人皮肤为对照.采用免疫组化法检测组织原位记忆T淋巴细胞的特征性表面标志CD69和CD103,分析组织原位记忆T淋巴细胞在银屑病发病不同时期的情况.两组免疫组化结果进行t检验.结果 32例进行期银屑病患者皮损和非皮损每高倍视野中CD69＋CD103＋T淋巴细胞数量分别为11.34±7.60和2.72±4.20,皮损区明显高于非皮损区（t=8.46,P＜0.01）;其中9例患者皮损消退前后每高倍视野中CD69＋CD103＋T淋巴细胞数量分别为14.33±2.21和12.00±4.58,皮损消退前后比较差异无统计学意义（t=1.98,P=0.08）;健康对照组为1.70±2.98,与银屑病患者非皮损区比较,差异无统计学意义（t=0.71,P＞0.05）.结论银屑病患者皮肤中原位记忆T淋巴细胞可能在皮损的形成和复发过程中起作用.

关键词：银屑病记忆T淋巴细胞原位

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解脲脲原体血清1型与8型对小鼠生殖道的致病性研究

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中华皮肤科杂志 2014年第5期47卷 324-327页

作者：郑冰洁尹跃平韩燕施美琴向志于瑞星中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所、中国疾病预防控制中心性病中心参比实验室南京210042

目的探讨相同条件下，解脲脲原体血清1型（Upl）和8型（Uu8）在BALB／c小鼠生殖道感染模型中的致病性。方法48只BALB／c小鼠随机分为空白对照组、雌激素组、Upl感染组、Uu8感染组，每组12只。分别接种无菌液体培养基、Upl、Uu8标准菌液... 详细信息

目的探讨相同条件下，解脲脲原体血清1型（Upl）和8型（Uu8）在BALB／c小鼠生殖道感染模型中的致病性。方法48只BALB／c小鼠随机分为空白对照组、雌激素组、Upl感染组、Uu8感染组，每组12只。分别接种无菌液体培养基、Upl、Uu8标准菌液。接种后第3、7、14、21天，每组随机取3只小鼠，采集阴道灌洗液后处死，取阴道、子宫标本固定后，HE染色镜检。阴道灌洗液用于培养和肿瘤坏死因子（TNF）一仅检测。结果接种后空白组和雌激素组均无解脲脲原体生长，TNF-d为（4．17±0．85）pg／ml。两个感染组各时间点小鼠阴道冲洗液经培养均为阳性，随着时间延长，测定颜色改变单位逐渐下降。TNF-d在感染后第14天达峰值，分别为（14．93±1．11）pg／ml和（27．04±24．26）pg／ml。组织病理结果显示，Upl和Uu8感染后均可导致急慢性炎症反应，以子宫病变为主，Upl可导致官腔粘连。结论BALB／c小鼠下生殖道感染Upl和Uu8后，主要导致宫颈炎，两组致病性未见明显差异。Upl可能与宫腔粘连有关。

关键词：解脲支原体小鼠近交BALB c 毒力

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雷帕霉素对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬诱导效应及其分子机制的初步研究

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临床皮肤科杂志 2014年第5期43卷 267-271页

作者：陈旭徐松黄丹鞠梅陈崑李新宇顾恒中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室江苏南京210042

目的:初步探讨雷帕霉素在不同浓度和不同孵育时间下,对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的诱导效应及其分子机制。方法:不同浓度雷帕霉素处理HaCaT细胞4 h或12 h后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测雷帕霉素对细胞活力的影响,并提取蛋白... 详细信息

目的:初步探讨雷帕霉素在不同浓度和不同孵育时间下,对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的诱导效应及其分子机制。方法:不同浓度雷帕霉素处理HaCaT细胞4 h或12 h后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测雷帕霉素对细胞活力的影响,并提取蛋白进行蛋白印迹实验,检测LC3-Ⅱ表达水平,作为自噬的检测方法;通过透射电镜分析自噬体形成,确认雷帕霉素对自噬的诱导效果。检测自噬调控上游关键元件哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达及其se^(2481)和ser^(2448)磷酸化产物水平,分析mTOR活性;并分析自噬调控下游的另一关键基因Atg7的表达,初步分析雷帕霉素诱导HaCaT细胞的分子机制。结果:不同浓度雷帕霉素处理4 h,对HaCaT细胞的活力没有显著的影响。高剂量雷帕霉素(80 nmol/L和100 nmol/L)在处理12 h后对HaCaT细胞的活力产生毒性效应。20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育4 h诱导HaCaT细胞LC3-Ⅱ表达上调,而20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育12 h仍具有诱导效应。相较于其他浓度,在50 nmol/L雷帕霉素孵育诱导的LC3-Ⅱ表达上调效应最为显著,并且在药物孵育4h时超微结构水平诱导产生胞质内大量自噬体形成。1~50nmol/L浓度的雷帕霉素孵育4 h或12 h均可诱导HaCaT细胞mTOR ser^(2481)和mTOR ser^(2448)磷酸化产物水平降低:然而Atg7表达不能观测到显著的差异。结论:50 nmol/L雷帕霉素孵育4 h具有显著的诱导HaCaT细胞自噬效应。HaCaT细胞mTOR分子对雷帕霉素处理敏感,可被其诱导产生蛋白活化抑制效应。这种mTOR信号抑制可能参与了雷帕霉素对HaCaT细胞的自噬诱导效应,但Atg7没有参与这种调控效应。

关键词：雷帕霉素角质形成细胞自噬

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乙酰胆碱受体对HaCaT细胞黏附功能的影响及作用机制

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中国皮肤性病学杂志 2014年第10期28卷 994-997页

作者：李志量张洁尘杨永红冯素英王宝玺江苏省皮肤病与性病学重点实验室中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院江苏南京210042

目的研究乙酰胆碱途径药物对Ha Ca T细胞黏附功能的影响及其作用机制。方法培养Ha Ca T细胞至融合状态后,分别加入适当浓度的乙酰胆碱途径药物(M受体抑制剂阿托品,N受体抑制剂筒箭毒碱,乙酰胆碱受体激动剂卡巴胆碱),用细胞黏附检测方法... 详细信息

目的研究乙酰胆碱途径药物对Ha Ca T细胞黏附功能的影响及其作用机制。方法培养Ha Ca T细胞至融合状态后,分别加入适当浓度的乙酰胆碱途径药物(M受体抑制剂阿托品,N受体抑制剂筒箭毒碱,乙酰胆碱受体激动剂卡巴胆碱),用细胞黏附检测方法检测细胞黏附的变化情况,结果以细胞碎片数表示;分别用Triton X-100和RIPA裂解细胞,得到胞浆蛋白和总蛋白,用蛋白免疫印迹测定细胞表面与黏附相关的蛋白桥粒芯蛋白1、桥粒芯蛋白3、桥斑珠蛋白、E-钙黏素的变化;用定量多聚酶链反应(q PCR)检测上述细胞表面蛋白在mRNA水平的变化。结果对照组、阿托品、筒箭毒碱、卡巴胆碱作用后细胞碎片数目分别为6.33±1.15,35.00±2.65,6.33±1.53,6.00±1.00;阿托品在蛋白质和mRNA水平减少桥粒芯蛋白3表达,并使桥粒芯蛋白3从胞膜脱离,卡巴胆碱可增加桥粒芯蛋白1、桥粒芯蛋白3、桥斑珠蛋白表达,并促使桥粒芯蛋白1、桥斑珠蛋白黏附于胞膜。筒箭毒碱对各种细胞表面蛋白均无明显影响。结论 Ha Ca T细胞表面的乙酰胆碱受体可以调节细胞间黏附分子,尤其是桥粒分子的表达,并影响这些分子在细胞膜上的稳定性,从而介导细胞间黏附,这种作用主要通过M受体实现。

关键词：乙酰胆碱受体黏附 HaCaT细胞

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不同剂量中波紫外线对HaCaT细胞p62及自噬体形成关键基因Beclin-1、Atg12和Atg3的调控效应研究

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中华皮肤科杂志 2014年第4期47卷 233-236页

作者：金慧陈旭徐松曹蕾黄丹鞠梅陈崑李新宇周之海顾恒天津医科大学总医院皮肤科 300052 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室

目的探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射培养的HaCaT细胞后不同时间点对p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白表达水平的调控效应。方法使用4．5、10和50mJ／cm2 UVB照射HaCaT细胞，照射后加入新鲜培养基继续培养4h和12h，同时设相同处理但... 详细信息

目的探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射培养的HaCaT细胞后不同时间点对p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白表达水平的调控效应。方法使用4．5、10和50mJ／cm2 UVB照射HaCaT细胞，照射后加入新鲜培养基继续培养4h和12h，同时设相同处理但不照射UVB的细胞为对照细胞。另设观察组，在照射后立即（包括对照细胞），使用含蛋白酶抑制剂E64D（10ug／L）和胃酶抑素（10ug／L）的培养基孵育4h和12h，以阻断对p62的降解。使用Western印迹法测定Hac胛细胞p62、Beclin-1、Atg12和Atg3蛋白的表达水平。结果50mJ／cm2 UVB照射HaCaT细胞后4h，p62表达水平（p62与内参的比值为0．473±0．022）较对照细胞（0．246±0．038）升高（t=15．27，P〈0．05）；阻断溶酶体后，细胞新生p62的水平（0．445±0．035）与阻断溶酶体的对照（0．244±0．016）相比，仍为上调（t=7．62，P〈0．05）。在4．5mJ／cm2 UVB照射细胞后12h，与对照（0．254±0．035）相比，HacaT细胞p62表达上调（0．497±0．047，t=22．89，P〈0．05）；阻断溶酶体后，与阻断溶酶体的对照（0．257±0．025）相比，p62表达水平仍然上调（0．548±0．051，t=17．42，P〈0．05）。4．5mJ／cm2和50mJ／cm2 UVB照射后4h和12h，对照细胞和照射细胞间的Beelin-1、Atg12和Atg3的表达差异均无统计学意义（P〉0．05），阻止溶酶体对白噬体内容物的降解也未能发现Beclin-1、Atg12和Atg3的表达差异（P〉0．05）。结论p62表达在不同剂量UVB照射和照射后不同时间存在差异调控，并且这种调控效应与自噬体形成可能没有生物学联系。

关键词：紫外线角蛋白细胞原癌基因蛋白质类 Beclin-1 Atg12 Atg3

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白念珠菌对人THP-1细胞产生白细胞介素6、活化信号分子IκBα的影响

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中华皮肤科杂志 2014年第11期47卷 803-805页

作者：杨海平杜蕾蕾曾荣段志敏沈永年胡素泉刘维达陈青李岷解放军454医院南京210002 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室江苏省血液中心

目的探讨白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞系）分泌白细胞介素6（IL-6）和细胞内信号分子NF-κB抑制蛋白（IκBα）激活的影响.方法实时荧光定量PCR分析105、106 CFU/ml灭活白念珠菌刺激THP-1细胞IL-6 mRNA表达水平变... 详细信息

目的探讨白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞系）分泌白细胞介素6（IL-6）和细胞内信号分子NF-κB抑制蛋白（IκBα）激活的影响.方法实时荧光定量PCR分析105、106 CFU/ml灭活白念珠菌刺激THP-1细胞IL-6 mRNA表达水平变化,酶联免疫吸附法检测IL-6分泌量.免疫印迹法分析白念珠菌体外作用THP-1细胞后不同时间IκBα和磷酸化IκBα的水平.结果 105 CFU/ml白念珠菌刺激THP-1细胞后l、3、6h,IL-6 mRNA水平（2-△△α）分别为1.48±0.06、6.48±0.30、125.34±1.47,刺激3h、6h后明显高于空白对照组（P＜ 0.001）.106 CFU/ml白念珠菌刺激THP-1细胞后1、3、6h,IL-6 mRNA水平分别为2.96±0.35、8.57±1.27、588.10±2.31,与空白对照组比较,P值分别为0.036、0.001、＜0.001.106 CFU/ml白念珠菌刺激THP-1细胞后24 h,IL-6蛋白水平为（924.9±30.13） ng/L,与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜ 0.001）.106 CFU/ml白念珠菌作用THP-1细胞后30 min、60 min,磷酸化IκBα蛋白水平显著升高,而IκB α蛋白水平相应降低.结论人THP-1细胞体外与白念珠菌作用后激活信号分子NF-κB并分泌IL-6,参与抗念珠菌感染固有免疫反应.

关键词：念珠菌白色白血病单核细胞急性白细胞介素6 I—KB蛋白质类 NF—KB

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伴肥大细胞增生的皮肤浆细胞增多症一例

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中华皮肤科杂志 2014年第8期47卷 604-605页

作者：魏瑾张宇陈浩金江董建强张建中北京大学人民医院皮肤科 100044 北京大学人民医院中心实验室实验病理 100044 中国航天七三一医院皮肤科中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所

患者女,41岁,以躯干部紫红色皮疹9年余为主诉入院.9年前患者无明显诱因于腰腹部出现紫红色皮疹,微痒,于当地医院诊断为色素性荨麻疹,给予抗组胺类药物治疗,皮疹未见消退,逐渐增多至背部.患者自患病以来一般状况可,体重无明显变化.既往... 详细信息

患者女,41岁,以躯干部紫红色皮疹9年余为主诉入院.9年前患者无明显诱因于腰腹部出现紫红色皮疹,微痒,于当地医院诊断为色素性荨麻疹,给予抗组胺类药物治疗,皮疹未见消退,逐渐增多至背部.患者自患病以来一般状况可,体重无明显变化.既往患慢性非萎缩性胃炎3年余,表现为偶尔返酸、暖气,无其他胃肠道症状.无其他疾病史及家族史.

关键词：浆细胞增多症肥大细胞增生慢性非萎缩性胃炎皮肤红色皮疹色素性荨麻疹胃肠道症状医院诊断

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淋球菌耐药机制及分子流行病学研究

淋球菌耐药机制及分子流行病学研究

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：陈绍椿尹跃平中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所参比实验室

目的了解中国不同地区淋球菌耐药监测点产青霉素酶淋球菌（PPNG）的比例及相应bla突变体在PPNG中的分布,比较PPNG及bla突变体淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）的型别分布,了解不同地区PPNGbla突变体的差异与联系。方法 2012年在江苏、... 详细信息

目的了解中国不同地区淋球菌耐药监测点产青霉素酶淋球菌（PPNG）的比例及相应bla突变体在PPNG中的分布,比较PPNG及bla突变体淋球菌多抗原测序分型（NG-MAST）的型别分布,了解不同地区PPNGbla突变体的差异与联系。方法 2012年在江苏、上海、浙江、天津、广东、广西6个淋球菌耐药监测点共收集572株淋球菌,经过分离纯化及鉴定后,采用头孢硝噻吩纸片法测定PPNG;菌株培养后利用试剂盒提取DNA,通过错配扩增突变分析PCR（MAMAPCR）鉴定bla突变体,采用NG-MAST进行分型研究。

关键词：淋球菌耐药监测监测点耐药机制分子流行病学

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