检索结果-内蒙古大学图书馆

慢病毒介导shRNA沉默Nicastrin基因的人永生化角质形成细胞模型构建

中华皮肤科杂志 2017年第4期50卷 268-272页

作者：毛秋霞张婉璐何艳艳贾苇雪 Yang Brooks 李莉李黎明张晓峰徐浩翔陈旭王宝玺李诚让中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 河南省人民医院皮肤科 Cutaneous Biology Research Center Massachusetts General Hospital 中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院皮肤科

目的构建Nicastrin（NCT）基因的RNA干扰慢病毒表达载体，并在人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）上鉴定其沉默效率，构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型，为后续研究NCT基因下调对角质形成细胞的生物学行为影响奠定实验... 详细信息

目的构建Nicastrin（NCT）基因的RNA干扰慢病毒表达载体，并在人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）上鉴定其沉默效率，构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型，为后续研究NCT基因下调对角质形成细胞的生物学行为影响奠定实验基础。方法设计3个靶向NCT基因特异性短发卡RNA（shRNA）表达序列并连接到慢病毒表达质粒pGLV3/H1/GFP ＋ Puro中，成功构建慢病毒重组表达质粒，并通过测序鉴定。将构建的重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞，产生慢病毒颗粒，并测其滴度。将HaCaT细胞分为空白组（未感染病毒）、阴性对照组（NC组，感染空载病毒LV3-shNC）和干扰组（感染NCT-shRNA1、2、3慢病毒）。流式细胞仪检测慢病毒转染效率，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹检测靶基因的沉默效率，筛选出沉默效果最佳的干扰序列。结果测序表明，NCT-shRNA慢病毒重组表达质粒构建成功。重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生的慢病毒颗粒滴度为109 TU/ml。慢病毒感染HaCaT细胞后，流式细胞仪检测，慢病毒转染效率大于95%。qRT-PCR结果，与NC组相比，干扰组NCT mRNA表达量明显下降，其中NCT-shRNA1组NCT基因沉默效果最佳，干扰效率达到75%。Western印迹结果，与NC组相比，shRNA1组NCT蛋白表达抑制率为71.7%。结论成功筛选出高效NCT-shRNA干扰序列，构建NCT-shRNA慢病毒重组表达载体，并构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型。

关键词：化脓性汗腺炎 RNA干扰慢病毒属角蛋白细胞 NCT基因模型,细胞

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儿童获得性大疱性表皮松解症二例

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中华皮肤科杂志 2017年第11期50卷 851-852页

作者：于灵冯素英李志量荆可靳培英王宝玺河南省人民医院郑州大学人民医院皮肤科郑州450003 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院皮肤科

例1 男，7岁，因全身红斑水疱5年、加重1周就诊。患儿5年前无明显诱因口周、颈部、股部出现红斑、水疱，后水疱逐渐蔓延至全身，于当地医院诊断为线状IgA大疱性皮病，病理检查示表皮下水疱，疱液及真皮可见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸... 详细信息

例1 男，7岁，因全身红斑水疱5年、加重1周就诊。患儿5年前无明显诱因口周、颈部、股部出现红斑、水疱，后水疱逐渐蔓延至全身，于当地医院诊断为线状IgA大疱性皮病，病理检查示表皮下水疱，疱液及真皮可见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润，直接免疫荧光示IgG、C3基底膜带线性沉积，IgA、IgM均阴性，予甲泼尼龙（16 mg/d）、环孢素（50 mg每日2次）口服，病情控制，药物逐渐减量，1年后病情复发加重，

关键词：获得性大疱性表皮松解症儿童治疗

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宿主对白念珠菌的免疫机制进展

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中国真菌学杂志 2017年第6期12卷 375-377页

作者：钟慧婷佘晓东刘维达中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病重点分子生物学实验室南京210042

白念珠菌通常与机体处于共生状态,不引起疾病.当机体的正常防御功能受损时,如创伤、皮质激素应用、营养失调、免疫功能缺陷、抗生素应用及细胞毒药物使用致菌群失调或黏膜屏障功能改变等,白念珠菌由酵母相转为菌丝相,在局部大量生长繁殖... 详细信息

白念珠菌通常与机体处于共生状态,不引起疾病.当机体的正常防御功能受损时,如创伤、皮质激素应用、营养失调、免疫功能缺陷、抗生素应用及细胞毒药物使用致菌群失调或黏膜屏障功能改变等,白念珠菌由酵母相转为菌丝相,在局部大量生长繁殖,引起皮肤、黏膜甚至全身性的内源性感染.-旦感染,宿主先天免疫细胞通过识别白念珠菌特异抗原,产生相应细胞因子和趋化因子,与此同时宿主适应性免疫应答也被激活,分泌相应细胞因子及抗体,协同补体系统及抗微生物肽最终导致吞噬细胞对白念珠菌的吞噬作用,从而对其杀灭及清除.

关键词：白念珠菌宿主免疫

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人类念珠菌感染的基因易感性

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中国真菌学杂志 2017年第2期12卷 120-123页

作者：阚思玥李筱芳刘维达中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

念珠菌是引起严重黏膜感染和系统性感染的重要真菌,但不是所有个体都有感染念珠菌的风险。随着人类基因组计划的完成以及分子遗传技术的发展,人们开始从基因角度研究真菌感染的易感性。研究发现一些原发性免疫缺陷如STAT1、STAT3或CARD... 详细信息

念珠菌是引起严重黏膜感染和系统性感染的重要真菌,但不是所有个体都有感染念珠菌的风险。随着人类基因组计划的完成以及分子遗传技术的发展,人们开始从基因角度研究真菌感染的易感性。研究发现一些原发性免疫缺陷如STAT1、STAT3或CARD9缺陷与严重的念珠菌感染有关;此外,部分与免疫相关的基因多态性与念珠菌感染(如复发性外阴阴道念珠菌病和念珠菌血症等疾病)的易感性相关。念珠菌易感基因的发现可以更好地了解疾病的发病机制,同时为临床诊治念珠菌感染提供新的检测指标和治疗靶标。

关键词：念珠菌感染基因易感性原发性免疫缺陷病基因多态性

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淋病奈瑟菌对头孢菌素和阿奇霉素耐药性的研究进展

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国际皮肤性病学杂志 2017年第1期43卷 58-61页

作者：刘宏业韩燕陈绍椿尹跃平中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所参比实验室南京210042

世界范围内出现了淋病奈瑟菌对一线治疗抗菌药物低敏、耐药的情况，尤其是对广谱头孢菌素和阿奇霉素的耐药性已经引起了人们的担忧。许多地区均出现了淋病奈瑟菌对广谱头孢菌素和（或）阿奇霉素高水平耐药的报告，为淋病联合治疗方案敲... 详细信息

世界范围内出现了淋病奈瑟菌对一线治疗抗菌药物低敏、耐药的情况，尤其是对广谱头孢菌素和阿奇霉素的耐药性已经引起了人们的担忧。许多地区均出现了淋病奈瑟菌对广谱头孢菌素和（或）阿奇霉素高水平耐药的报告，为淋病联合治疗方案敲响了警钟。淋病奈瑟菌的耐药机制复杂，主要涉及到抗菌药物靶点的改变、药物内流减少和外排增加。各机制之间还存在某些依赖或协同效应。对淋病奈瑟菌耐药性的深入研究，有助于指导临床合理使用抗菌药物，延缓淋病奈瑟菌的耐药趋势。

关键词：淋病奈瑟球菌淋病头孢菌素类抗药性阿奇霉素

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依维莫司与顺铂协同损伤人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞机制的初步研究

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中华皮肤科杂志 2017年第10期50卷 738-741页

作者：丁敏徐松李莉毕素云周之海李岷陈旭顾恒天津医科大学总医院皮肤性病科 300070 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室

目的探讨依维莫司与顺铂联合损伤人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的分子机制。方法依维莫司处理细胞后的信号通路实验分为对照组、50、100、200 nmol/L依维莫司处理组4组。依维莫司与顺铂联合处理的机制实验分为对照组、50 nmol/L依维莫司... 详细信息

目的探讨依维莫司与顺铂联合损伤人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的分子机制。方法依维莫司处理细胞后的信号通路实验分为对照组、50、100、200 nmol/L依维莫司处理组4组。依维莫司与顺铂联合处理的机制实验分为对照组、50 nmol/L依维莫司、25 μmol/L顺铂、50 nmol/L依维莫司＋ 25 μmol/L顺铂处理细胞组4组。通过Western印迹进行mTOR、Akt、DNA损伤相关信号以及Chk通路分析。结果 50、100、200 nmol/L依维莫司处理COLO-16细胞12、24 h后，mTOR 2448位点和2481位点的磷酸化水平降低，Rictor 1135位点磷酸化水平也降低。然而，下游信号ULK1蛋白的ser757位点的磷酸化水平、P70 S6激酶的thr389位点的磷酸化水平以及PKCα的thr638/641位点磷酸化水平的变化并不显著。依维莫司处理对Akt的总蛋白水平和磷酸化水平无明显影响。顺铂处理COLO-16细胞12、24 h后，Rictor的thr1135位点磷酸化水平和Chk1的ser345位点磷酸化水平明显升高，但依维莫司单独处理无类似效应。当依维莫司与顺铂联合处理后12和24 h，相对于顺铂单独处理的细胞，上调的Chk1和Rictor磷酸化水平受到明显抑制。结论 COLO-16细胞mTOR信号对依维莫司处理敏感，但其下游信号并非同步产生级联反应。依维莫司可能通过抑制检测点激酶1的激活增强顺铂诱导COLO-16细胞死亡，但无加重顺铂所导致的DNA损伤。

关键词：顺铂细胞凋亡 COLO-16细胞依维莫司检测点激酶1

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慢病毒介导的靶向沉默HPV16 E7-shRNA对SiHa细胞DNA甲基转移酶表达的影响

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中华皮肤科杂志 2017年第2期50卷 81-85页

作者：杨佳李黎明许翠龙嘉王尧杨雪源蒋明军中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所中心实验室江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 南京农业大学生命科学与技术基地班

的探讨慢病毒携带的靶向人乳头瘤病毒16（HPV16）E7基因的短发夹干扰RNA（shRNA）对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞中4种甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L）表达水平的影响。方法构建HPV16 E7基因靶序列的shRNA重组质粒，用BLOCK-... 详细信息

的探讨慢病毒携带的靶向人乳头瘤病毒16（HPV16）E7基因的短发夹干扰RNA（shRNA）对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞中4种甲基转移酶（DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L）表达水平的影响。方法构建HPV16 E7基因靶序列的shRNA重组质粒，用BLOCK-iT^TM Lentiviral RNAi Expression System试剂盒进行慢病毒包装，分别转染293T细胞48、72 h后收集病毒上清液。分别用含靶向HPV16 E7-shRNA重组质粒的病毒上清液与完全培养基（1∶1）的混合液（shRNA组）、含空白质粒（即不含靶向HPV16 E7-shRNA序列）的病毒上清液与完全培养基（1∶1）的混合液（阴性对照组）、完全培养基（空白对照组）培养SiHa细胞。感染0、48、96 h后，用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测3组SiHa细胞中HPV16 E7和4种甲基转移酶mRNA的表达，Western印迹检测4种甲基转移酶的蛋白表达。结果感染0 h时，shRNA组、阴性对照组、空白对照组SiHa细胞HPV16 E7、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（均P 〉 0.05）；感染48、96 h时，3组细胞间HPV16 E7和4种DNMT mRNA相对表达量比较，差异有统计学意义（均P 〈 0.05）。shRNA组HPV16 E7、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L mRNA表达水平在48 h时的沉默效率分别为71.13%、50.53%、13.72%、46.27%和17.92%，96 h时分别为83.50%、74.2%、47.8%、64.7%和48.9%；而阴性对照组和空白对照组各时间点表达水平差异无统计学意义（均P 〉 0.05）。慢病毒感染48、96 h时，3组细胞间上述4种DNMT蛋白表达量差异有统计学意义（均P 〈 0.01）。shRNA组4种DNMT蛋白表达水平随感染时间的延长而逐渐下降，感染48 h时DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L蛋白表达抑制率分别为84%、37.2%、59.8%、49.3%，96 h时分别为73.1%、68.7%，55.5%、65.5%。结论靶向沉默HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞E7基因能够干扰DNMT1、DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L mRNA及蛋白的表达。

关键词：人乳头瘤病毒16 乳头瘤病毒E7蛋白质类 RNA 小分子干扰甲基转移酶类细胞系,肿瘤

来源：评论

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依维莫司对顺铂产生抗人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞效应的增效作用研究

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中华皮肤科杂志 2017年第6期50卷 421-425页

作者：丁敏徐松李莉毕素云周之海李岷杨海平陈旭顾恒天津医科大学总医院皮肤性病科 300052 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所理疗科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室解放军第454医院皮肤科

目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200nmol／L的依维莫司和25μmol／L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24h，用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自... 详细信息

目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200nmol／L的依维莫司和25μmol／L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24h，用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自噬流水平。Western印迹分析自噬标记性分子LC3．Ⅰ→LC3-Ⅱ转化、Caspase3和PARP剪切；LDH释放实验分析细胞死亡；***染色分析细胞凋亡。结果50、100、200nmol／L的依维莫司处理COLO．16细胞后，12hLC3．Ⅰ→Lc3-Ⅱ转换值分别为3．52±0．21、4．03±0．39、5．05±0．22，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与未用药物处理的对照组（2．07±0．05）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。24hLC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转换值分别为3．38±0．26、3．29±0．06、6．57±0．16，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与对照组（2．61％±0．16％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。50、100、200nmol／L的依维莫司联合E64d、pepstatin处理COLO-16细胞12h后，LC3-Ⅱ与B肌动蛋白的比值分别为1．26±0．40、1．16±0．34、1．21±0．39，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．19±0．27）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。100nmol／L依维莫司联合E64d、pepstatin自噬体囊泡表达阳性率2．06-4-0．61，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．68±0．62）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。依维莫司与顺铂联合处理24h细胞死亡率42．58％±0．93％，高于顺铂单独处理的细胞（死亡率18．20％±1．46％），差异有统计学意义。依维莫司联合顺铂处理与顺铂单独处理细胞相比，Caspase3和PARP剪切、AnnexinV标记细胞数以及LC3-Ⅱ形成均无统计学差异（P〉0．05）。结论依维莫司增强顺铂诱导COLO-1细胞死亡，这种效应不依赖于凋亡和自噬调控。

关键词：顺铂细胞凋亡自噬 COLO-16细胞依维莫司

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表观遗传学在瘢痕疙瘩发病中的作用

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国际皮肤性病学杂志 2017年第3期43卷 170-172页

作者：李黎明许翠龙嘉李凤娟蒋明军中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所中心实验室江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

越来越多的证据表明，表观遗传学与瘢痕疙瘩形成机制可能相关。与正常皮肤相比，瘢痕疙瘩全基因组胞嘧啶-磷酸二酯键鸟苷岛中低甲基化比高甲基化更常见，且相关基因的启动子区亦存在同样现象。启动子的高甲基化通常发生在易感基因的相... 详细信息

越来越多的证据表明，表观遗传学与瘢痕疙瘩形成机制可能相关。与正常皮肤相比，瘢痕疙瘩全基因组胞嘧啶-磷酸二酯键鸟苷岛中低甲基化比高甲基化更常见，且相关基因的启动子区亦存在同样现象。启动子的高甲基化通常发生在易感基因的相同位点，甲基化可能起到早期标记物的作用。去乙酰化酶的表达明显增高，活性增强，基因的组蛋白乙酰化修饰水平降低，细胞凋亡下降，最终促进了瘢痕疙瘩的发生发展。miR-21等23种miRNA表达上调，miR-203等9种miRNA表达下调。表观遗传学路径在瘢痕疙瘩的形成和发展中的作用值得进一步研究。

关键词：瘢痕疙瘩后成说,遗传甲基化乙酰化作用微RNAs

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抗念珠菌感染免疫现状及进展

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皮肤科学通报 2017年第5期34卷 613-621页

作者：李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病分子生物学重点实验室江苏南京210042

念珠菌为引起皮肤黏膜和系统性感染的常见机会性致病真菌,近年来宿主抗念珠菌感染免疫研究取得了长足进展。本文对念珠菌相关的固有免疫和适应性免疫反应研究进展进行介绍。前者包括主要模式识别受体Toll样受体(TLR2,4,9等)、C型凝集素... 详细信息

念珠菌为引起皮肤黏膜和系统性感染的常见机会性致病真菌,近年来宿主抗念珠菌感染免疫研究取得了长足进展。本文对念珠菌相关的固有免疫和适应性免疫反应研究进展进行介绍。前者包括主要模式识别受体Toll样受体(TLR2,4,9等)、C型凝集素受体(CLRs,包括Dectin-1,2,3,Mincle,DC-SIGN,DC-SIGN等)、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白样受体(NLRs,包括NLRP3和NLRC4等),与念珠菌胞壁相应的病原体相关分子模式及其相关信号通路,在诱导固有免疫效应中的作用及机制以及相关基因突变导致的易感性。适应性免疫方面,主要包括Th17,Th1和Treg免疫反应的作用机制,及Th17免疫相关分子的基因突变与慢性皮肤黏膜念珠菌病易感性,并初步提出本领域的研究展望。

关键词：白念珠菌模式识别受体固有免疫 Th17

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