检索结果-内蒙古大学图书馆

人乳头状瘤病毒16 E6/E7基因稳定表达的永生化角质形成细胞的建立及鉴定

中华皮肤科杂志 2022年第6期55卷 501-507页

作者：许翠何勇吴亦琳吕群李黎明蒋明军南京大学医学院附属鼓楼医院皮肤性病科南京210008 中国医学科学院、北京协和医学院皮肤病研究所中心实验室南京210042

目的构建人乳头状瘤病毒(HPV)16 E6/E7基因稳定表达的人永生化角质形成细胞(KC),为研究HPV16 E6/E7诱导的细胞永生化及恶性转化机制提供细胞模型。方法两步消化法分离培养原代人包皮角质形成细胞(HFK),利用慢病毒感染技术对细胞稳定转染... 详细信息

目的构建人乳头状瘤病毒(HPV)16 E6/E7基因稳定表达的人永生化角质形成细胞(KC),为研究HPV16 E6/E7诱导的细胞永生化及恶性转化机制提供细胞模型。方法两步消化法分离培养原代人包皮角质形成细胞(HFK),利用慢病毒感染技术对细胞稳定转染HPV16 E6/E7基因,连续培养30代以上,筛选出永生化KC,分为3组:①空白对照组:传代2次的原代HFK;②实验组:传代2次的原代HFK感染LV5-HPV16 E6/E7,感染细胞记录为A0代,感染后以传代次数记录(A1、A2……);③阳性对照组:HPV16阳性宫颈癌细胞SiHa。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western印迹实验分别检测空白对照组、实验组、阳性对照组HPV16 E6/E7 mRNA、蛋白及CK14蛋白的表达,CCK-8及Transwell Insert方法检测细胞的增殖及侵袭能力。裸鼠致瘤实验检测实验组A30、阳性对照组SiHa细胞的致瘤能力。结果成功分离原代HFK。LV5-HPV16 E6/E7重组质粒感染原代HFK后,空白对照组细胞无荧光表达,连续传代后出现衰老表现,实验组A30细胞体积、形态较原代HFK无明显变化,且荧光表达率为100%。与空白对照组相比,实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E6 mRNA表达水平显著升高(t值分别为7.12、8.07、6.53、5.66;P值分别<0.001、<0.001、=0.001、=0.005);与空白对照组相比,实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E7 mRNA表达水平也显著升高(t值分别为3.20、4.29、3.75、4.22;P值分别为0.024、0.008、0.013、0.014)。空白对照组未见HPV16 E6/E7蛋白的表达,而A30及SiHa细胞可见HPV16 E6/E7蛋白的表达。CCK-8实验显示,实验组A10、A20、A30细胞增殖水平显著高于空白对照组(t值分别为6.49、7.55、9.43;P值分别为0.003、0.002、0.001),而A1的增殖水平与空白对照组比较,差异无统计学意义(t=2.40,P=0.074)。Transwell Insert侵袭实验显示,A30不能穿过基底膜,SiHa细胞可穿过基底膜被染成蓝色。裸鼠接种A30细胞2个月后无肉眼可见肿瘤,组织学亦显示无肿瘤形成,裸鼠接种SiHa细胞后可于皮下形成肿瘤。结论通过采用慢病毒技术转染HPV16 E6/E7基因成功建立人永生化角质形成细胞,可作为HPV相关研究中的理想细胞模型。

关键词：人乳头瘤病毒16 角蛋白细胞慢病毒感染细胞系,转化 HPV16 E6/E7

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阴茎疣状黄瘤合并睑黄瘤一例

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中国麻风皮肤病杂志 2023年第4期39卷 291-292页

作者：钟娇娇苏晓红中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所性病科江苏南京210042

患者,男,63岁。阴茎、双侧上眼睑斑块20年。结合临床表现及组织病理学检查,诊断为疣状黄瘤合并睑黄瘤。本文首次报道了两者合并的病例,其发病是否有关联仍有待探讨。

关键词：疣状黄瘤睑黄瘤阴茎

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黄褐斑病因、加重因素及对生活质量影响的横断面研究

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中华皮肤科杂志 2016年第2期49卷 93-97页

作者：王辉郭丽芳葛一平吴余乐吴秋菊张孟丽王千秋林彤中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所激光科南京210042 中国医学科学院北京协和医学院性病临床防治室南京210042

目的研究黄褐斑患者的病因、加重因素及对生活质量的影响。方法通过问卷形式收集166例女性黄褐斑患者的人口学资料、行为学资料、临床资料，并计算黄褐斑面积及严重程度评分（MASI）、皮肤病生活质量评分（DLQI）、黄褐斑生活质量评分（... 详细信息

目的研究黄褐斑患者的病因、加重因素及对生活质量的影响。方法通过问卷形式收集166例女性黄褐斑患者的人口学资料、行为学资料、临床资料，并计算黄褐斑面积及严重程度评分（MASI）、皮肤病生活质量评分（DLQI）、黄褐斑生活质量评分（MELA—SQOL）。通过多元线性回归分析，寻找黄褐斑严重程度及患者生活质量影响因素。结果33．13％（55／166）的患者在发病前1年内有怀孕史。4．82％（8／166）的患者发病前1个月内有明确日光暴晒史。患者MASI评分（5．99±4．01）分，DLQI评分（4．34±4．41）分，MELASQOL评分（30．54±17．91）分。黄褐斑MELA—SQOL评分随着年龄的增长降低（β=-0．220，t=2．874，P〈0．05），随着皮损颜色的加深上升（β=0．217，t=2．827，P〈0．05）。绝经前黄褐斑患者随着年龄的增长MASI评分增加（β=0．244，t=3．387，P=0．001），Fitzpatrick皮肤分型为Ⅳ型的患者MASI评分较Ⅲ型皮肤高（β=0．322，t=4．615，P〈0．001）。结论黄褐斑的发病与激素水平波动和日晒有关。黄褐斑颜色越深、年龄越小的患者生活质量受黄褐斑的影响越大。Fitzpatrickl Ⅳ患者较Ⅲ型的患者黄褐斑更重。绝经前黄褐斑患者随着年龄增长皮损有加重趋势。

关键词：黄褐斑人口统计学疾病特征生活质量横断面研究病因加重因素

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免疫球蛋白在自身免疫性大疱病的研究进展

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中华皮肤科杂志 2016年第1期49卷 62-64页

作者：于灵冯素英中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤科南京210042

免疫球蛋白作为人体内具有活性的免疫效应分子，在自身免疫性大疱病的发病、诊断及治疗中发挥着重要的作用。人免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE5大类，除IgD外其他都在自身免疫性大疱病的发病过程中存在并发挥不同的作用。Ig... 详细信息

免疫球蛋白作为人体内具有活性的免疫效应分子，在自身免疫性大疱病的发病、诊断及治疗中发挥着重要的作用。人免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE5大类，除IgD外其他都在自身免疫性大疱病的发病过程中存在并发挥不同的作用。IgG可通过激活补体、活化白细胞、释放蛋白水解酶等诱发水疱形成，其不同亚型也有所区别。IgA可引起粒细胞迁移从而导致水疱脓疱的发生。IgE与荨麻疹样红斑、嗜酸性粒细胞浸润相关。IgM多见于巴西落叶型天疱疮。这些都为自身免疫性大疱病的诊断和治疗提供了新的思路。

关键词：皮肤疾病,水疱大疱性免疫球蛋白类抗体自身免疫诊断

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银屑病患者肠道菌群多样性分析:单中心前瞻性研究

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协和医学杂志 2019年第3期10卷 223-230页

作者：王丽玮段志敏童建波曾荣徐浩翔李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤科南京210042

目的探讨银屑病患者与健康人群肠道菌群多样性的差异。方法收集2017年5月至2018年6月间在中国医学科学院皮肤病研究所住院治疗的银屑病患者(银屑病组)及同期本院健康体检人群(健康组)的新鲜粪便标本,分析受试者相关临床资料。提取肠道菌... 详细信息

目的探讨银屑病患者与健康人群肠道菌群多样性的差异。方法收集2017年5月至2018年6月间在中国医学科学院皮肤病研究所住院治疗的银屑病患者(银屑病组)及同期本院健康体检人群(健康组)的新鲜粪便标本,分析受试者相关临床资料。提取肠道菌群DNA,采用16S r DNA基因扩增和Illumina平台双端2×300策略测序,基于Gold数据库按>97%的相似性聚类操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU),对照Silva数据库进行物种注释及分类,各层级样本采用轶和检验分析物种差异; QIIME软件计算α多样性主要指数、β多样性分析,t检验分析指数差异,P<0. 05为差异有统计学意义。相关研究结果通过R及GraphPad Prism作图展示。结果符合入选和排除标准的11例银屑病患者及21例健康对照者入选本研究,两组研究对象的性别构成比、年龄和体质量指数无统计学差异(P均>0. 05)。DNA测序分析显示样本测序覆盖深度> 0. 99。银屑病组肠道菌群的OTU数量(278. 18±89. 75比722. 95±152. 81,t=10. 36,P<0. 01)、赵氏指数(433. 38±147. 47比1156. 08±292. 50,t=9. 291,P<0. 01)、香农指数(3. 56±0. 87比5. 73±0. 78,t=6. 972,P<0. 01)和辛普森指数(0. 79±0. 15比0. 94±0. 04,t=3. 287,P <0. 01)均显著低于健康组。RankAbundance曲线显示银屑病组肠道菌群均匀程度较低。PCoA分析(unweighted)显示银屑病组与健康组在第一主成分(24. 35%)可显著分离,Weighted Uni Frac分析可见银屑病组混杂在健康样本中无法区分,且与银屑病亚型无关。样本聚类分析显示,银屑病组肠道菌群与健康组有一定重叠性,银屑病样本特异性菌群少;在门层级,健康组中可检测到TM7,相对丰度为0. 000 066 9 (0. 000 033 4～0. 000 200 5),而银屑病组仅在个别样本中显示有微量存在,相对丰度为0(P<0. 05);在属层级,银屑病组双歧杆菌属[0. 000 033 4 (0. 000 016 7～0. 000 100 3)比0. 000 401 1 (0. 000 200 5～0. 001 337 0)]、布劳特氏菌属[0. 000 467 9 (0. 000 183 8～0. 000 434 5)比0. 002 206 0 (0. 000 935 9～0. 005 582 0)]、粪球菌属[0. 000 033 4 (0～0. 000 401 1)比0. 000 902 5 (0. 000 334 2～0. 005 315 0)]较健康组显著降低,健康组中的戴阿利斯特杆菌属和嗜血菌属仅在银屑病组个别样本中微量存在,克雷伯氏杆菌属在健康组和银屑病组个别样本中存在,但在银屑病组的相对丰度更低,接近0 (P均<0. 05)。个体样本高丰度菌群分析显示,银屑病组个别样本中多糖及短链脂肪酸代谢相关菌群的相对丰度降低。结论银屑病患者肠道菌群多样性低于健康人群。

关键词：银屑病肠道菌群 16SrDNA 测序

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氨基酮戊酸光动力对痤疮丙酸杆菌生物膜的作用

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中国医学科学院学报 2020年第3期42卷 283-288页

作者：刘宇甄曾荣段志敏徐浩翔吴秋菊陈青林彤李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所激光科南京210042 江苏省血液中心南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病学分子生物学重点实验室南京210042

目的探讨氨基酮戊酸光动力治疗(ALA-PDT)对痤疮丙酸杆菌生物膜的作用。方法在细胞爬片上培养构建痤疮丙酸杆菌生物膜,然后进行ALA-PDT处理。将实验分为不同光照剂量(50、100、200 J/cm^2)的ALA-PDT组(ALA-PDT1、ALA-PDT2、ALA-PDT3组)... 详细信息

目的探讨氨基酮戊酸光动力治疗(ALA-PDT)对痤疮丙酸杆菌生物膜的作用。方法在细胞爬片上培养构建痤疮丙酸杆菌生物膜,然后进行ALA-PDT处理。将实验分为不同光照剂量(50、100、200 J/cm^2)的ALA-PDT组(ALA-PDT1、ALA-PDT2、ALA-PDT3组)和单纯ALA作用组(ALA组)、单纯LED光照射组(LED组)及阴性对照组(ALA-PDT-组),采用激光共聚焦显微镜(CLSM)观察生物膜结构及死菌/活菌比值,四甲基氮盐法(XTT)检测生物膜活力。结果CLSM观察结果显示,与ALA-PDT-组相比,ALA组和LED组的生物膜结构无明显差异;ALA-PDT1组、ALA-PDT2组和ALA-PDT3组的生物膜结构则明显被破坏,且光照强度越强,生物膜结构破坏越严重。ALA-PDT-组、ALA组、LED组、ALA-PDT1组、ALA-PDT2组和ALA-PDT3组的痤疮丙酸杆菌生物膜死菌/活菌比值分别为0.350±0.033、0.305±0.046、0.330±0.032、1.525±0.439、2.293±0.148和3.092±0.189,其中,ALA组(md=0.003,P=1.000)和LED组(md=-0.025,P=1.000)与ALA-PDT-组差异无统计学意义;ALA-PDT1组(md=-0.162,P<0.001)、ALA-PDT2组(md=-0.254,P<0.001)和ALA-PDT3组(md=-0.352,P<0.001)明显高于ALA-PDT-组。XTT检测结果显示,ALA-PDT-组、ALA组、LED组、ALA-PDT1组、ALA-PDT2组和ALA-PDT3组的痤疮丙酸杆菌生物膜活力分别为0.462±0.028、0.465±0.044、0.437±0.047、0.301±0.040、0.207±0.001和0.110±0.007,其中,ALA组(md=-0.044,P=1.000)和LED组(md=-0.020,P=1.000)与ALA-PDT-组相比差异没有统计学意义;ALA-PDT1(md=1.175,P<0.001)、ALA-PDT2(md=1.942,P<0.001)和ALA-PDT3组(md=2.742,P<0.001)明显低于ALA-PDT-组。结论ALA-PDT对痤疮丙酸杆菌生物膜有抑制作用,不仅能够破坏生物膜的结构,还能够抑制生物膜的活力。

关键词：痤疮丙酸杆菌生物膜氨基酮戊酸光动力

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炎症性肠病的皮肤表现

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中华皮肤科杂志 2017年第9期50卷 689-691页

作者：李锁李志量荆可向睿宇冯素英中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤科南京210042

炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是一类病因和发病机制尚不明确的慢性非特异性肠道疾病，包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis）和克罗恩病（Crohn disease）。目前普遍认为，环境、基因、免疫及肠道微生态共同作用，... 详细信息

炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）是一类病因和发病机制尚不明确的慢性非特异性肠道疾病，包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis）和克罗恩病（Crohn disease）。目前普遍认为，环境、基因、免疫及肠道微生态共同作用，致使遗传易感个体肠道免疫系统对肠腔内抗原，如食物代谢成分或肠道共生微生物等产生异常免疫反应。高达40%的炎症性肠病患者可并发肠外表现，肠外表现的临床谱非常广泛，其表现有时甚至比IBD本身更为严重。

关键词：炎症性肠病皮肤表现肠道免疫系统慢性非特异性溃疡性结肠炎异常免疫反应肠道疾病肠外表现

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结节性红斑的诊疗进展

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中华皮肤科杂志 2017年第3期50卷 225-228页

作者：王丽玮徐浩翔崔盘根中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤科南京210042

结节性红斑（erythema nodosum，EN）是一种皮下脂肪小叶间的急性、非特异性、炎症性皮肤病，典型表现为发生于胫前、红色或紫红色伴疼痛的皮下结节。在不同年龄、性别、种族的人群中均可出现EN。EN病因复杂，约半数以上EN患者为特发性... 详细信息

结节性红斑（erythema nodosum，EN）是一种皮下脂肪小叶间的急性、非特异性、炎症性皮肤病，典型表现为发生于胫前、红色或紫红色伴疼痛的皮下结节。在不同年龄、性别、种族的人群中均可出现EN。EN病因复杂，约半数以上EN患者为特发性（或皮肤型），病因不明，另一些患者可由多种因素引起，

关键词：结节性红斑诊疗炎症性皮肤病病因不明皮下脂肪非特异性皮下结节 EN

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先天性大疱性表皮松解症诊断及治疗进展

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中华皮肤科杂志 2016年第7期49卷 516-519页

作者：于灵冯素英中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤科南京210042

先天性大疱性表皮松解症是一组以皮肤脆性增加、轻微摩擦或外伤即可导致皮肤或黏膜水疱、糜烂为共同特点的遗传性皮肤病。目前该病可分为4型，即单纯型、交界型、营养不良型和Kindler综合征型。诊断方面，提倡“洋葱皮诊断方法”，即先... 详细信息

先天性大疱性表皮松解症是一组以皮肤脆性增加、轻微摩擦或外伤即可导致皮肤或黏膜水疱、糜烂为共同特点的遗传性皮肤病。目前该病可分为4型，即单纯型、交界型、营养不良型和Kindler综合征型。诊断方面，提倡“洋葱皮诊断方法”，即先进行免疫荧光定位，而后针对性进行基因检测明确致病基因位点。治疗上要加强护理，药物、手术对症治疗可缓解不适症状。细胞、蛋白、基因治疗等方面研究不断深入有望为患者带来希望，及时进行产前诊断，避免不良后果的发生。

关键词：大疱性表皮松解荧光抗体技术,直接免疫组织化学基因检测药物疗法基因疗法

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Wnt5A基因过表达对黑素细胞骨架蛋白的影响

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中华皮肤科杂志 2017年第8期50卷 584-588页

作者：粟倩雅林彤周启艳彭霖中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所激光科南京210042

目的探讨携带Wnt5A全基因序列的质粒转染原代黑素细胞后，Wnt5A表达升高对黑素细胞骨架蛋白的影响。方法培养原代人表皮黑素细胞，并分为3组：①空白对照组：除细胞外不加任何试剂；②阴性对照组：加入空白的去内毒素pcDNA3.1（＋）... 详细信息

目的探讨携带Wnt5A全基因序列的质粒转染原代黑素细胞后，Wnt5A表达升高对黑素细胞骨架蛋白的影响。方法培养原代人表皮黑素细胞，并分为3组：①空白对照组：除细胞外不加任何试剂；②阴性对照组：加入空白的去内毒素pcDNA3.1（＋）质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000；③Wnt5A质粒组：加入Wnt5A去内毒素pcDNA3.1（＋）质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000。Wnt5A质粒转染黑素细胞，采用qPCR法检测各组Wnt5A、Ras相关C3肉毒素底物1（Rac1）、丝状肌动蛋白（F肌动蛋白）和β微管蛋白基因表达，Western印迹法测定Wnt5A、酪氨酸激酶受体2（ROR2）、Rac1、F肌动蛋白和β微管蛋白表达，并通过细胞免疫荧光试验观察细胞骨架蛋白表达情况。结果 qPCR法显示，Wnt5A质粒组、阴性对照组和空白对照组Wnt5A mRNA及其下游基因Rac1和F肌动蛋白mRNA表达量3组间差异均有统计学意义（F = 1 374.179、112.576、66.458，均P 〈 0.01），但β微管蛋白mRNA表达差异无统计学意义（P 〉 0.05）。Wnt5A质粒组Wnt5A、Rac1和F肌动蛋白mRNA表达量均显著高于空白对照组及阴性对照组（P 〈 0.05）。Western印迹法显示，Wnt5A质粒组Wnt5A蛋白表达较空白对照及阴性对照明显升高，差异均有统计学意义（P 〈 0.05）。Wnt5A质粒组Rac1、ROR2、F肌动蛋白表达均明显低于空白对照组和阴性对照组（P 〈 0.05），但β微管蛋白表达在3组间差异无统计学意义（P 〉 0.05）。细胞免疫荧光实验显示，Wnt5A质粒组绿色（β微管蛋白）、红色（F肌动蛋白）荧光强度与两个对照组相比均无明显差别，但黑素细胞体积明显增大，树突数目明显增多，细胞骨架显著改变，表现为F肌动蛋白强弱不一，纹理模糊，张力丝断裂，局部呈团块状。结论黑素细胞Wnt5A基因表达升高可调控细胞骨架相关基因及蛋白表达，使黑素细胞体积增大、树突增多、骨架改变，可能有利于黑素小体的输送传递，参与色素沉着性疾病的发病。

关键词：黑素细胞 Wnt信号通路细胞骨架肌动蛋白类微管蛋白 rac1 GTP结合蛋白质 Wnt5A蛋白质

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