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依维莫司对顺铂产生抗人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞效应的增效作用研究

中华皮肤科杂志 2017年第6期50卷 421-425页

作者：丁敏徐松李莉毕素云周之海李岷杨海平陈旭顾恒天津医科大学总医院皮肤性病科 300052 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所理疗科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室解放军第454医院皮肤科

目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200nmol／L的依维莫司和25μmol／L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24h，用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自... 详细信息

目的探讨依维莫司是否增加顺铂对人皮肤鳞状细胞癌COLO-16细胞的杀伤效应。方法分别用50、100、200nmol／L的依维莫司和25μmol／L顺铂处理人皮肤鳞状细胞癌系COLO-16细胞12、24h，用AO标记自噬体囊泡并结合溶酶体酶抑制剂分析自噬和自噬流水平。Western印迹分析自噬标记性分子LC3．Ⅰ→LC3-Ⅱ转化、Caspase3和PARP剪切；LDH释放实验分析细胞死亡；***染色分析细胞凋亡。结果50、100、200nmol／L的依维莫司处理COLO．16细胞后，12hLC3．Ⅰ→Lc3-Ⅱ转换值分别为3．52±0．21、4．03±0．39、5．05±0．22，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与未用药物处理的对照组（2．07±0．05）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。24hLC3-Ⅰ→LC3-Ⅱ转换值分别为3．38±0．26、3．29±0．06、6．57±0．16，两两之间比较，差异无统计学意义（P〉0．05），与对照组（2．61％±0．16％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。50、100、200nmol／L的依维莫司联合E64d、pepstatin处理COLO-16细胞12h后，LC3-Ⅱ与B肌动蛋白的比值分别为1．26±0．40、1．16±0．34、1．21±0．39，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．19±0．27）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。100nmol／L依维莫司联合E64d、pepstatin自噬体囊泡表达阳性率2．06-4-0．61，与E64d、pepstatin单独处理细胞组（1．68±0．62）比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。依维莫司与顺铂联合处理24h细胞死亡率42．58％±0．93％，高于顺铂单独处理的细胞（死亡率18．20％±1．46％），差异有统计学意义。依维莫司联合顺铂处理与顺铂单独处理细胞相比，Caspase3和PARP剪切、AnnexinV标记细胞数以及LC3-Ⅱ形成均无统计学差异（P〉0．05）。结论依维莫司增强顺铂诱导COLO-1细胞死亡，这种效应不依赖于凋亡和自噬调控。

关键词：顺铂细胞凋亡自噬 COLO-16细胞依维莫司

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须癣毛癣菌的组织工程皮肤感染模型的构建

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中华皮肤科杂志 2016年第1期49卷 32-35页

作者：曹玉萍沈永年吕桂霞王乐曾荣李玲珺马鹏程刘维达中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所性病科南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所真菌科南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所医务处南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室南京210042

目的体外构建须癣毛癣菌的组织工程皮肤感染模型。方法用牛Ⅰ型胶原溶液复合原代成纤维细胞培养3 d后，在其表面利用气液界面培养原代角质形成细胞和黑素细胞12 d得到组织工程皮肤，取新鲜的须癣毛癣菌悬液5 μl对其进行感染，分别... 详细信息

目的体外构建须癣毛癣菌的组织工程皮肤感染模型。方法用牛Ⅰ型胶原溶液复合原代成纤维细胞培养3 d后，在其表面利用气液界面培养原代角质形成细胞和黑素细胞12 d得到组织工程皮肤，取新鲜的须癣毛癣菌悬液5 μl对其进行感染，分别在12、24、48、72 h进行HE染色和PAS染色观察。结果成纤维细胞复合胶原构建结构致密均匀的组织工程真皮，其上角质形成细胞和黑素细胞形成了层次清晰、结构良好的组织工程表皮。须癣毛癣菌感染该组织工程皮肤后，随时间延长，HE染色和PAS染色显示须癣毛癣菌对组织工程皮肤结构的破坏逐渐加重，至48 h，表皮破坏最明显，至72 h，组织工程皮肤的整体结构被菌丝和孢子所替代。结论初步建立了须癣毛癣菌的组织工程皮肤感染模型。

关键词：组织工程皮肤动物替代试验感染须癣毛癣菌

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抗念珠菌感染免疫现状及进展

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皮肤科学通报 2017年第5期34卷 613-621页

作者：李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病分子生物学重点实验室江苏南京210042

念珠菌为引起皮肤黏膜和系统性感染的常见机会性致病真菌,近年来宿主抗念珠菌感染免疫研究取得了长足进展。本文对念珠菌相关的固有免疫和适应性免疫反应研究进展进行介绍。前者包括主要模式识别受体Toll样受体(TLR2,4,9等)、C型凝集素... 详细信息

念珠菌为引起皮肤黏膜和系统性感染的常见机会性致病真菌,近年来宿主抗念珠菌感染免疫研究取得了长足进展。本文对念珠菌相关的固有免疫和适应性免疫反应研究进展进行介绍。前者包括主要模式识别受体Toll样受体(TLR2,4,9等)、C型凝集素受体(CLRs,包括Dectin-1,2,3,Mincle,DC-SIGN,DC-SIGN等)、核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)蛋白样受体(NLRs,包括NLRP3和NLRC4等),与念珠菌胞壁相应的病原体相关分子模式及其相关信号通路,在诱导固有免疫效应中的作用及机制以及相关基因突变导致的易感性。适应性免疫方面,主要包括Th17,Th1和Treg免疫反应的作用机制,及Th17免疫相关分子的基因突变与慢性皮肤黏膜念珠菌病易感性,并初步提出本领域的研究展望。

关键词：白念珠菌模式识别受体固有免疫 Th17

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组氨酸三聚体核苷结合蛋白1在黑素瘤组织中的表达及其基因启动子甲基化水平研究

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中华皮肤科杂志 2016年第7期49卷 478-481页

作者：温斯健倪娜娜张韡宋昊王小坡邵雪宝李阿梅程伟孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所病理科南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所中心实验室南京210042

目的：检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（HINT1）在黑素瘤中的表达和HINT1基因启动子甲基化状态，探讨HINT1启动子甲基化与临床病理参数的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测56例黑素瘤及瘤旁组织和51例色素痣组织中HINT1基因... 详细信息

目的：检测组氨酸三聚体核苷结合蛋白1（HINT1）在黑素瘤中的表达和HINT1基因启动子甲基化状态，探讨HINT1启动子甲基化与临床病理参数的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测56例黑素瘤及瘤旁组织和51例色素痣组织中HINT1基因启动子区甲基化水平，免疫组化法检测56例黑素瘤和51例色素痣组织中HINT1蛋白的表达。结果 MSP显示，黑素瘤组织、瘤旁组织及色素痣组织中HINT1基因启动子区甲基化率分别为76.8%（43/56）、33.9%（19/56）和35.3%（18/51），黑素瘤组HINT1基因启动子区甲基化率明显高于瘤旁组织组和色素痣组，且差异有统计学意义（χ2=20.810、18.749，均P〈0.05），瘤旁组织组与色素痣组间差异无统计学意义（χ2=0.022，P〉0.05）。免疫组化显示，56例黑素瘤和51例色素痣组织中分别有12例（21.4%）和42例（82.4%）HINT1蛋白阳性表达，两组阳性率差异有统计学意义（χ2=39.633，P〈0.01）。12例HINT1蛋白阳性的黑素瘤组织中，有6例HINT1基因启动子甲基化，而在44例HINT1蛋白阴性的癌组织中HINT1启动子甲基化率高达84.1%（37/44），两组差异有统计学意义（χ2=6.147，P=0.013）。56例黑素瘤中，HINT1基因启动子区甲基化率在Clark分级Ⅰ~Ⅱ级组（59.1%，13/22）与Ⅲ~Ⅴ级组（88.2%，30/34）间差异有统计学意义（χ2=6.365，P=0.012）。结论 HINT1在黑素瘤组织中低表达，其机制可能与启动子区发生高甲基化有关；HINT1启动子区高甲基化可能参与黑素瘤的发生及发展。

关键词：黑色素瘤甲基化痣,色素 HINT1基因 Gene,HINT1

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表观遗传学在瘢痕疙瘩发病中的作用

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国际皮肤性病学杂志 2017年第3期43卷 170-172页

作者：李黎明许翠龙嘉李凤娟蒋明军中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所中心实验室江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

越来越多的证据表明，表观遗传学与瘢痕疙瘩形成机制可能相关。与正常皮肤相比，瘢痕疙瘩全基因组胞嘧啶-磷酸二酯键鸟苷岛中低甲基化比高甲基化更常见，且相关基因的启动子区亦存在同样现象。启动子的高甲基化通常发生在易感基因的相... 详细信息

越来越多的证据表明，表观遗传学与瘢痕疙瘩形成机制可能相关。与正常皮肤相比，瘢痕疙瘩全基因组胞嘧啶-磷酸二酯键鸟苷岛中低甲基化比高甲基化更常见，且相关基因的启动子区亦存在同样现象。启动子的高甲基化通常发生在易感基因的相同位点，甲基化可能起到早期标记物的作用。去乙酰化酶的表达明显增高，活性增强，基因的组蛋白乙酰化修饰水平降低，细胞凋亡下降，最终促进了瘢痕疙瘩的发生发展。miR-21等23种miRNA表达上调，miR-203等9种miRNA表达下调。表观遗传学路径在瘢痕疙瘩的形成和发展中的作用值得进一步研究。

关键词：瘢痕疙瘩后成说,遗传甲基化乙酰化作用微RNAs

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遗传性对称性色素异常症一家系A-DAR1基因新突变

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中国麻风皮肤病杂志 2017年第9期33卷 517-519页

作者：曾荣刘宇甄童建波何艳艳林彤徐浩翔李岷中国医学科学院&北京协和医学院皮肤病研究所 210042 江苏省皮肤性病学分子生物学重点实验室 210042

目的:确定一遗传性对称性色素异常症家系ADAR1基因的突变位点。方法:提取家系中2例患者、2名表型正常者及50名与本家系无关的正常对照外周血DNA,采用PCR技术扩增ADAR1基因所有编码区并进行测序。结果:该家系中2例患者均存在ADAR1基因错... 详细信息

目的:确定一遗传性对称性色素异常症家系ADAR1基因的突变位点。方法:提取家系中2例患者、2名表型正常者及50名与本家系无关的正常对照外周血DNA,采用PCR技术扩增ADAR1基因所有编码区并进行测序。结果:该家系中2例患者均存在ADAR1基因错义突变(c.662C>T),导致p.P211R改变,家系中2名未患病的个体和50名健康对照均未发现上述突变。结论:ADAR1基因c.662C>T错义突变是导致该家系发生DSH的致病性突变,在国内外属首次报道。

关键词：遗传性对称性色素异常症 ADAR1 基因突变

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黄褐斑病因、加重因素及对生活质量影响的横断面研究

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中华皮肤科杂志 2016年第2期49卷 93-97页

作者：王辉郭丽芳葛一平吴余乐吴秋菊张孟丽王千秋林彤中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所激光科南京210042 中国医学科学院北京协和医学院性病临床防治室南京210042

目的研究黄褐斑患者的病因、加重因素及对生活质量的影响。方法通过问卷形式收集166例女性黄褐斑患者的人口学资料、行为学资料、临床资料，并计算黄褐斑面积及严重程度评分（MASI）、皮肤病生活质量评分（DLQI）、黄褐斑生活质量评分（... 详细信息

目的研究黄褐斑患者的病因、加重因素及对生活质量的影响。方法通过问卷形式收集166例女性黄褐斑患者的人口学资料、行为学资料、临床资料，并计算黄褐斑面积及严重程度评分（MASI）、皮肤病生活质量评分（DLQI）、黄褐斑生活质量评分（MELA—SQOL）。通过多元线性回归分析，寻找黄褐斑严重程度及患者生活质量影响因素。结果33．13％（55／166）的患者在发病前1年内有怀孕史。4．82％（8／166）的患者发病前1个月内有明确日光暴晒史。患者MASI评分（5．99±4．01）分，DLQI评分（4．34±4．41）分，MELASQOL评分（30．54±17．91）分。黄褐斑MELA—SQOL评分随着年龄的增长降低（β=-0．220，t=2．874，P〈0．05），随着皮损颜色的加深上升（β=0．217，t=2．827，P〈0．05）。绝经前黄褐斑患者随着年龄的增长MASI评分增加（β=0．244，t=3．387，P=0．001），Fitzpatrick皮肤分型为Ⅳ型的患者MASI评分较Ⅲ型皮肤高（β=0．322，t=4．615，P〈0．001）。结论黄褐斑的发病与激素水平波动和日晒有关。黄褐斑颜色越深、年龄越小的患者生活质量受黄褐斑的影响越大。Fitzpatrickl Ⅳ患者较Ⅲ型的患者黄褐斑更重。绝经前黄褐斑患者随着年龄增长皮损有加重趋势。

关键词：黄褐斑人口统计学疾病特征生活质量横断面研究病因加重因素

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携带HPV11基因组的HaCaT细胞APOBEC3s表达及α干扰素的调控

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中华皮肤科杂志 2016年第2期49卷 88-92页

作者：王永芳李新宇宋莎莎孙洋中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室南京210042

目的探讨携带HPV11基因组的HaCaT细胞（***）中载脂蛋白B信使RNA编辑酶催化多肽样蛋白3家族（APOBEC3s，A3s）mRNA表达、主要A3蛋白在细胞内的表达、分布，以及外源性仅干扰素对其调节。方法qRT—PCR检测***细胞中A3A、A3B、A3C和A3H m... 详细信息

目的探讨携带HPV11基因组的HaCaT细胞（***）中载脂蛋白B信使RNA编辑酶催化多肽样蛋白3家族（APOBEC3s，A3s）mRNA表达、主要A3蛋白在细胞内的表达、分布，以及外源性仅干扰素对其调节。方法qRT—PCR检测***细胞中A3A、A3B、A3C和A3H mRNA的基础表达水平，并与正常HaCaT细胞作比较；分别用不同浓度的重组人IFN—α2b（rhIFN—α2b）作用于HaCaT、***、Hela细胞6、24、48h后，qRT—PCR检测A3A、A3B、A3C和A3H mRNA表达水平。细胞免疫荧光染色法观察rhIFN—α2b刺激6h时，A3A蛋白在3种细胞中的表达和分布情况。结果***细胞内A3A、A3B、A3CmRNA表达量均明显高于正常HaCaT细胞（P〈0．05）。在不同浓度rhIFN—α2b刺激下，3种细胞4种A3成员mRNA表达趋势存在差异，其中A3A升高最为明显。与各自正常对照组相比，10^6IU／ml rhIFN—α2b刺激6h时3种细胞的A3AmRNA表达明显升高，差异有统计学意义（HaCaT细胞35．77±5．01比1．00±0．05，P〈0．05；***细胞15．34±2．14比0．99±0．01，P〈0．05；Hela24．60±5．45比0．97±0．03，P〈0．05），而A3B、A3C和A3HmRNA相对表达量均低于10倍。经10^6IU／ml rhIFN-α2b处理6h后，3种细胞胞质和胞核中均可见到A3A蛋白的阳性染色增加。结论HPV11进入HaCaT细胞后，可激活A3s（尤其是A3A）免疫系统。α干扰素诱导A3A的高表达可能是其发挥免疫调控功能的机制之一。

关键词：尖锐湿疣干扰素α 角蛋白细胞载脂蛋白B类载脂蛋白B信使RNA编辑酶催化多肽样蛋白3家族

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泛素连接酶Cbl-b在黑素瘤组织和细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义

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中华皮肤科杂志 2016年第12期49卷 861-864页

作者：王小坡温斯健粟倩雅宋昊倪娜娜姜祎群陈浩孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所病理科南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所激光科南京210042 江苏省皮肤病性病分子生物学重点实验室

目的：探讨泛素连接酶Cbl-b在皮肤黑素瘤组织及黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义。方法收集69份黑素瘤、30份色素痣组织，采用免疫组化法检测Cbl-b蛋白表达水平。实时荧光定量PCR、免疫印迹法分别检测黑素瘤细胞系A375、M14、... 详细信息

目的：探讨泛素连接酶Cbl-b在皮肤黑素瘤组织及黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义。方法收集69份黑素瘤、30份色素痣组织，采用免疫组化法检测Cbl-b蛋白表达水平。实时荧光定量PCR、免疫印迹法分别检测黑素瘤细胞系A375、M14、MV3及黑素细胞中Cbl-b mRNA及蛋白表达水平。结果69份皮肤黑素瘤标本中，52份（75.36%）表达Cbl-b；30份色素痣标本中，4份（13.33%）表达Cbl-b，两组Cbl-b蛋白表达水平差异有统计学意义（χ2=32.745，P〈0.01）。黑素瘤组织中Cbl-b表达水平与肿瘤进展程度、Clark分级和Breslow厚度均呈正相关（rs分别为0.569、0.654、0.727，均P〈0.01）。实时荧光定量PCR显示，A375、M14、MV3细胞Cbl-b mRNA表达差异有统计学意义（F=176.537，P〈0.01）。免疫印迹法显示，A375细胞Cbl-b蛋白表达水平最高，黑素细胞最低。结论 Cbl-b蛋白在皮肤黑素瘤组织及其细胞株中均高表达。

关键词：泛素蛋白连接酶类黑色素瘤黑素细胞肿瘤侵润肿瘤分级 Cbl-b

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申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞NF-κB信号通路及TNF-α的影响

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中国麻风皮肤病杂志 2017年第2期33卷 74-78页

作者：刘彩霞段志敏杜蕾蕾曾荣沈永年胡素泉刘维达陈青李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病分子生物学重点实验室南京210042 江苏省血液中心南京210042

目的:明确申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)NF-κB信号通路激活和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的影响。方法:实时荧光定量PCR分析申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞TNF-αmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α分泌量... 详细信息

目的:明确申克孢子丝菌酵母相对人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)NF-κB信号通路激活和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌的影响。方法:实时荧光定量PCR分析申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞TNF-αmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测TNF-α分泌量,免疫印迹法分析申克孢子丝菌酵母相体外作用于THP-1细胞后IκBα和磷酸化IκBα的水平,免疫荧光法观察NF-κB-p65核转位。同时设置地塞米松(NF-κB抑制剂)抑制组,并检测100 n M地塞米松预处理THP-1细胞后TNF-αmRNA水平的变化。结果:申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞后6 hTNF-αmRNA水平显著高于空白对照组(P<0.001)。申克孢子丝菌酵母相刺激THP-1细胞后24 h,TNF-α蛋白水平为(4610.419±121.501)pg/mL,显著高于空白对照组(186.964±98.073)pg/m L,差异具有统计学意义(P<0.001)。申克孢子丝菌酵母相作用THP-1细胞后30~60 min,磷酸化IκBα蛋白水平显著升高,为时间依赖性。申克孢子丝菌酵母相组细胞核内NF-κB-p65较空白对照组荧光强度增强。100 nM地塞米松预处理各组THP-1细胞后,TNF-αmRNA水平较前明显降低。结论:人THP-1细胞体外与申克孢子丝菌酵母相作用后激活NF-κB信号通路并上调TNF-α分泌。

关键词：申克孢子丝菌单核细胞白血病肿瘤坏死因子α NF-κB

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