检索结果-内蒙古大学图书馆

中华皮肤科杂志 2016年第12期49卷 871-875页

作者：温斯健倪娜娜周晓伟吴琼王小坡宋昊张韡孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所病理科南京210042 中国医学科学院江苏省皮肤病性病分子生物学重点实验室南京210042

目的：探讨RhoD对人黑素瘤细胞株A375细胞骨架、迁移和侵袭能力等的影响及作用机制。方法实验分为A375-RhoD组和A375-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）组，分别用携带RhoD的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体转染。罗丹明标记鬼笔环肽染色观察... 详细信息

目的：探讨RhoD对人黑素瘤细胞株A375细胞骨架、迁移和侵袭能力等的影响及作用机制。方法实验分为A375-RhoD组和A375-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）组，分别用携带RhoD的慢病毒载体和阴性对照慢病毒载体转染。罗丹明标记鬼笔环肽染色观察细胞骨架，Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力，流式细胞仪检测细胞周期，Western印迹法检测丝切蛋白、磷酸化丝切蛋白、Diaph2和RhoD的表达。结果与A375-EGFP组细胞相比，A375-RhoD组细胞体积增大，应力纤维变细，软弱无力，黏着斑增多；丝状伪足形成增加；皱褶缘和板状伪足无明显变化。Transwell迁移实验显示，A375-EGFP组和A375-RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为152.67±11.23和72.67±5.03，两组间差异有统计学意义（t =11.25，P 〈0.05）。Transwell人工基底膜侵袭试验显示，A375-EGFP组和A375-RhoD组平均每200倍视野下穿膜细胞数分别为78.33±12.34和9.00±1，两组间差异有统计学意义（t=9.70，P〈0.05）。A375-EGFP和A375-RhoD两组间G1期、S期和G2期细胞所占百分比差异均无统计学意义（P〉0.05）。Western印迹结果显示，A375-RhoD组细胞可在RhoD的刺激下激活下游信号效应分子Diaph2，促进其表达，而A375-EGFP组未能激活，两组间丝切蛋白和磷酸化丝切蛋白表达差异不显著。结论 RhoD过表达可能通过下游效应分子Diaph2调节细胞骨架进而抑制A375细胞的迁移和侵袭能力。

关键词：黑色素瘤实验性 GTP磷酸水解酶类细胞骨架细胞迁移分析 A375细胞 RhoD

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Gateway技术构建人RhoD慢病毒表达载体及转染人黑素瘤A375细胞株

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中国皮肤性病学杂志 2016年第10期30卷 998-1002页

作者：温斯健倪娜娜周晓伟吴琼王小坡宋昊张韡孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所病理科江苏南京210042 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病性病分子生物学重点实验室江苏南京210042

目的构建人RhoD基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装和鉴定，转染人黑素瘤细胞A375，使其过表达RhoD蛋白，为后续研究RhoD在黑素瘤中的作用奠定基础。方法Gateway技术构建携带增强型绿色荧光蛋白EGFP的RhoD慢病毒载体，经PCR及基因测序鉴... 详细信息

目的构建人RhoD基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装和鉴定，转染人黑素瘤细胞A375，使其过表达RhoD蛋白，为后续研究RhoD在黑素瘤中的作用奠定基础。方法Gateway技术构建携带增强型绿色荧光蛋白EGFP的RhoD慢病毒载体，经PCR及基因测序鉴定后，与辅助质粒pLV／helper-SL3，pLV／helper—SIA及pLV／helper—SL5混合采用脂质体法制备DNA-Lipofectamine2000复合物，并共同转染293FT细胞进行慢病毒包装，产生相应慢病毒颗粒，通过定量PCR方法测定病毒滴度。包装好的慢病毒转染人黑素瘤A375细胞，荧光显微镜下观察荧光表达情况，流式细胞仪检测转染效率；实验分为A375（未处理对照组）、A375-EGFP（不含目的基因的空病毒对照组）和A375-RhoD（含RhoD基因的病毒组）三组，采用实时荧光定量PCR（QPCR）及免疫印记法（western blotting，WB）验证耽扣在A375-RhoD组细胞中的过表达。结果通过PCR、基因测序证实，慢病毒表达载体pLV[Exp]-EGFP／Neo—CMV〉hRhoD构建成功。与辅助质粒共转染293FT细胞包装出具高效感染力的慢病毒，经测定病毒滴度为（5．13±2）×10^8TU／mL。转染A375细胞后可见明显的绿色荧光表达，流式检测转染效率大于80％;A375-RhoD组RhoDmRNA及蛋白水平均较A375-EGFP组和A375组细胞中明显增高。结论成功构建RhoD慢病毒表达载体，包装出具高效感染力的慢病毒颗粒并成功转染人黑素瘤A375细胞，为进一步研究RhoD在黑素瘤中的作用提供实验基础。

关键词： RhoD基因慢病毒载体 Gateway技术过表达 A375

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表皮松解性掌跖角皮症一家系KRT9基因新突变

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中国麻风皮肤病杂志 2017年第8期33卷 465-467页

作者：曾荣何艳艳惠云李志量徐浩翔李岷中国医学科学院&北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病学分子生物学重点实验室江苏南京210042 南京军区总医院皮肤科江苏南京210002

目的:检测表皮松解性掌跖角皮症一家系患者角蛋白9(KRT9)基因突变。方法:收集家系成员的临床资料和血样,提取家系中4例患者和3名正常人及50名与本家系无关的正常对照外周血DNA,采用PCR技术扩增KRT9基因所有编码区并进行测序,分别检测家... 详细信息

目的:检测表皮松解性掌跖角皮症一家系患者角蛋白9(KRT9)基因突变。方法:收集家系成员的临床资料和血样,提取家系中4例患者和3名正常人及50名与本家系无关的正常对照外周血DNA,采用PCR技术扩增KRT9基因所有编码区并进行测序,分别检测家系中的突变情况。结果:该家系中所有患者均存在KRT9基因错义突变(c.484T>C),导致第162位密码子由TCT(丝氨酸)转变为CCT(脯氨酸)(p.S162P),家系中3名正常个体和50名健康对照均未发现上述突变。结论:KRT9基因c.484T>C错义突变是导致该家系发生表皮松解性掌跖角皮症的遗传基础。

关键词：表皮松解性掌跖角皮症 KRT9基因基因突变

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紫外线诱导角质形成细胞炎症反应信号传导机制研究进展

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中华皮肤科杂志 2016年第2期49卷 140-143页

作者：李莉陈旭顾恒中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

紫外线（UV）是一种可以导致皮炎、光老化和癌变的重要的环境因子，UV诱导表皮角质形成细胞炎症因子的生成是上述疾病发生的重要分子事件。UV诱导角质形成细胞炎症涉及多种受体、细胞内信号传导相关调控分子和核转录因子的参与，主要包... 详细信息

紫外线（UV）是一种可以导致皮炎、光老化和癌变的重要的环境因子，UV诱导表皮角质形成细胞炎症因子的生成是上述疾病发生的重要分子事件。UV诱导角质形成细胞炎症涉及多种受体、细胞内信号传导相关调控分子和核转录因子的参与，主要包括表皮生长因子受体、芳香烃受体、过氧化物酶体增生物激活受体、蛋白激酶C家族、蛋白激酶B、丝裂原活化蛋白激酶家族、核转录因子κB和转录因子激活蛋白等，构成了复杂的炎症信号传导网络。

关键词：紫外线角蛋白细胞炎症信号传导蛋白激酶类

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iTRAQ技术筛选人黑素瘤A375细胞系let-7a靶标蛋白

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中华皮肤科杂志 2016年第5期49卷 342-347页

作者：王焱张倩周晓伟王震英方方孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室皮肤外科南京210042 中国医学科学院中心实验室南京210042 中国医学科学院中心实验室病理科南京210042 山东大学附属省立医院皮肤科

目的同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术在人黑素瘤A375细胞系中筛选let-7a潜在的靶标蛋白，探讨let-7a的抑癌机制。方法100nmol／Llet-7a模拟物及其对照转染A375细胞，提取细胞总蛋白，运用同位素标记的iTRAQ技术分析和鉴定差异表... 详细信息

目的同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术在人黑素瘤A375细胞系中筛选let-7a潜在的靶标蛋白，探讨let-7a的抑癌机制。方法100nmol／Llet-7a模拟物及其对照转染A375细胞，提取细胞总蛋白，运用同位素标记的iTRAQ技术分析和鉴定差异表达的蛋白质，运用生物信息学分析let-7a靶标蛋白及其功能，采用双荧光素酶报告系统验证靶标。结果let-7a模拟物组和对照组相比，质谱共分析鉴定到327个显著差异蛋白，其中表达量上调〉1．2倍的蛋白有151种，下调〈0．8倍的蛋白有176种。下调的176种蛋白中，软件预测到结合靶标有47个，双荧光素酶报告系统验证表明，let-7a模拟物组与对照组相比，HMGA2和THOC2野生型3’UTR比值分别降低64．3％和46．4％。结论iTRAQ技术和生物信息学方法在人黑素瘤A375细胞系中筛选出47个let-7a候选靶标蛋白，其中HMGA2和THOC2分别为let-7a的靶标。

关键词：黑色素瘤细胞系肿瘤微RNAs 蛋白质组学 iTRAQ

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不同剂量长波紫外线照射对HaCaT细胞增殖活力和自噬体表达瞬时影响的研究

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临床皮肤科杂志 2016年第2期45卷 83-86页

作者：苑春雨李莉陈崑陈旭鞠梅黄丹顾恒中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室江苏南京210042

目的:观察人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞接受不同剂量长波紫外线(UVA)照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化,并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。方法:将HaCaT细胞分为6组,分别为10 J/cm^2UVA对照组、10 ... 详细信息

目的:观察人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞接受不同剂量长波紫外线(UVA)照射后细胞增殖活力和自噬体表达水平的变化,并初步评估增殖活力损伤程度和自噬体表达水平之间的相关性。方法:将HaCaT细胞分为6组,分别为10 J/cm^2UVA对照组、10 J/cm^2 UVA照射组、25 J/cm^2 UVA对照组、25 J/cm^2 UVA照射组、50 J/cm^2 UVA对照组及50 J/cm^2 UVA照射组。照射结束后即刻进行噻唑蓝(MTT)实验或单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色,全波长酶标仪下读取各孔A值,倒置荧光显微镜下随机选取视野,计数每视野下自噬体表达阴性细胞和阳性细胞数目。结果:经不同剂量UVA照射后,HaCaT细胞的增殖活力(A值)下降,呈剂量相关性。其中10、25及50 J/cm^2 UVA照射组(A值分别为1.179±0.007、0.791±0.015、0.522±0.046)两两之间以及与各自对照组(1.370±0.007、1.254±0.012、1.177±0.009)间差异均有统计学意义(P均<0.01);10、25及50 J/cm^2 UVA照射后,HaCa T细胞MDC染色结果示自噬体表达阳性的细胞比率增加,且呈剂量相关性。50 J/cm^2 UVA照射组自噬体表达阳性率较其对照组显著上升(χ~2=11,P<0.01)。结论:10~50 J/cm^2 UVA照射后,HaCaT细胞瞬时增殖活力降低及自噬体表达增加,且呈剂量依赖性。

关键词：角质形成细胞自噬体长波紫外线增殖活力

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T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对黑素瘤TRP-2180-188肽疫苗刺激小鼠淋巴细胞的影响

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中华皮肤科杂志 2016年第2期49卷 82-87页

作者：吕雅琳周晓伟胡彬吴琼曾学思刘毅孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所病理科南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室

目的探讨体外T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（TIM-3）对与小鼠黑素瘤B16F10细胞共培养的酪氨酸相关蛋白-2（TRP-2180-188）抗原肽刺激小鼠淋巴细胞的影响。方法构建TIM-3重组质粒pFUSE—TIM-3-mlgG2Aae1—Fc2，分别转染重组质粒及空质粒p... 详细信息

目的探讨体外T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（TIM-3）对与小鼠黑素瘤B16F10细胞共培养的酪氨酸相关蛋白-2（TRP-2180-188）抗原肽刺激小鼠淋巴细胞的影响。方法构建TIM-3重组质粒pFUSE—TIM-3-mlgG2Aae1—Fc2，分别转染重组质粒及空质粒pFUSE—mIgG2Aae1—Fc2至人上皮293T细胞，继续培养48h，制备含TIM-3、免疫球蛋白（Ig—tail）的上清液。TRP-2180-188肽疫苗免疫C57BL／6小鼠，分离小鼠脾淋巴细胞，用TRP-2180-188抗原肽和白细胞介素（IL）-2刺激培养5d，以未刺激细胞作为对照组。构建B16F10细胞与上述TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系，分为空白对照组（加293T细胞培养48h上清液）、TIM-3组（加含TIM-3上清液）、阴性对照组（加含Ig-tail上清液）。CCK-8法检测细胞增殖情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测共培养体系中干扰素（IFN）-γ和肿瘤坏死因子（TNF）-α浓度，流式细胞仪检测共培养体系中CD8^＋淋巴细胞。结果酶切和测序鉴定证实目的基因正确插入真核表达载体中，检测到转染重组质粒pFUSE—TIM-3-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有TIM-3表达，转染空质粒pFUSE-mIgG2Aae1-Fc2的293T细胞上清液中有Ig-tail的表达。CCK-8法检测显示24h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组淋巴细胞增殖活力分别为（100．00±10．42）％、（108．70±9．90）％、（78．06±6．37）％，48h时分别为（100．00±6．24）％、（168．00±2．98）％、（42．93±5．93）％；24h、48h时TIM-3组淋巴细胞活力低于空白对照组和阴性对照组（均P〈0．05）。TIM-3组48h相比24h淋巴细胞增殖倍数低于空白对照组和阴性对照组（均P〈0．05）。24h时，空白对照组、阴性对照组、TIM-3组IFN-γ浓度分别为（216．44±7．85）、（223．67±7．79）、（192．96±5．05）ng／L，48h时分别为（230．06±4．23）、（167．24±3．33）、（54．95±0．57）ng／L。24h、48h时，TIM-3组IFN-γ浓度低于空白对照组和阴性对照组（均P〈0．05）。24h、48h时，TIM-3组TNF-α浓度低于空白对照组和阴性对照组（均P〈0．05）。24h时空白对照组、阴性对照组、TIM-3组CD8^＋淋巴细胞中位数分别为0．421％、2．22％、3．30％，48h时分别为0．577％、0．691％、4．06％。24h、48h时TIM-3组CD8^＋T淋巴细胞中位数高于空白对照组和阴性对对照组。结论TIM-3在体外能够抑制B16F10细胞与TRP-2180-188抗原肽刺激淋巴细胞共培养体系中淋巴细胞增殖和分泌IFN-γ、TNF-α，提高CD8＆^＋T淋巴细胞。

关键词：黑色素瘤实验性疫苗亚单位 T淋巴细胞细胞毒性干扰素γ T细胞免疫球蛋白粘蛋白-3

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Nicastrin基因突变的反常性痤疮患者皮损Notch—HES信号通路的表达

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中华皮肤科杂志 2016年第6期49卷 415-419页

作者：李诚让何艳艳张晓峰徐浩翔王宝玺福建医科大学附属协和医院皮肤科福州350001 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室皮肤科中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院皮肤科

目的检测nicastrin基因突变的反常性痤疮患者皮损标本中，nicastrin及其下游Notch—HES信号通路蛋白的表达。方法免疫组化法检测nicastrin及Notch—HES信号通路分子在4例nicastrin基因突变的患者皮损石蜡标本的表达，并用6例正常皮肤组... 详细信息

目的检测nicastrin基因突变的反常性痤疮患者皮损标本中，nicastrin及其下游Notch—HES信号通路蛋白的表达。方法免疫组化法检测nicastrin及Notch—HES信号通路分子在4例nicastrin基因突变的患者皮损石蜡标本的表达，并用6例正常皮肤组织作对照，同时采用Spearman相关分析，分析nicastrin与Notch—HES信号通路分子表达的相关性。结果Nicastrin蛋白广泛表达于表皮全层、皮肤附属器，如，毛囊皮脂腺单位、大汗腺及小汗腺。在携带nicastrin基因突变的患者皮损中，表皮及毛囊漏斗部nicastrin表达较正常对照明显减少；同时，Notch—HES信号通路分子表达亦较正常对照明显减少。Nicastrin蛋白与Notchl、Notch3以及HES一1的表达呈明显正相关（r分别为0．831、0．748、0．807，P值分别〈0．01，〈0．05、〈0．01），而与Notch2、HES一5的表达之间的相关性，差异无统计学意义（r分别为0．597和0．591，均P〉0．05）。结论Nicastrin基因突变患者的皮损中nicastrin低表达，且与多种Notch—HES信号通路分子表达呈正相关，提示nicastrin表达减少可能通过影响下游Notch—HES信号通路的表达参与反常性痤疮的发病。

关键词：基因突变信号传导反常性痤疮 Nicastrin基因 Notch—HES信号通路

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β受体阻滞剂治疗婴儿血管瘤的研究进展

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中国皮肤性病学杂志 2016年第11期30卷 1172-1174页

作者：苑春雨陈崑北京协和医学院中国医学科学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室江苏南京210042

婴儿血管瘤是婴儿期最常见的良性肿瘤,临床多见。尽管大多数具有自限性的良性病程,但部分仍有导致严重功能障碍及毁容的风险,需要积极治疗。治疗方法多种多样,传统的治疗方法如糖皮质激素、干扰素、长春新碱、手术、激光等副作用大,并... 详细信息

婴儿血管瘤是婴儿期最常见的良性肿瘤,临床多见。尽管大多数具有自限性的良性病程,但部分仍有导致严重功能障碍及毁容的风险,需要积极治疗。治疗方法多种多样,传统的治疗方法如糖皮质激素、干扰素、长春新碱、手术、激光等副作用大,并非对所有血管瘤都有效。目前β受体阻滞剂以其安全高效的优点成为一线首选药物。

关键词：婴儿血管瘤分类流行病学自然病程 β受体阻滞剂

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西罗莫司和饥饿处理对人A431细胞自噬水平的影响

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中华皮肤科杂志 2016年第11期49卷 776-780页

作者：张云杨晓雯徐倩倩施辛陈旭李莉徐松黄丹鞠梅陈崑顾恒苏州大学附属第二医院皮肤科 215004 中国医学科学院、北京协和医学院、皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室、理疗科

目的：探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组（单纯DMEM培养基处理）、二甲基亚砜（DMSO）组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫... 详细信息

目的：探讨经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿处理对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和人宫颈癌细胞系HeLa分为对照组（单纯DMEM培养基处理）、二甲基亚砜（DMSO）组、20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、平衡盐溶液（EBSS）组。作用4 h后，Western印迹检测A431细胞和HeLa细胞自噬微管相关蛋白轻链3A/3B（LC3A/B）、重组人γ-氨基丁酸受体相关蛋白（GABARAP）的表达水平。吖啶橙染色分析细胞自噬体表达水平。结果 Western印迹检测显示，对照组与DMSO组A431细胞中LC3A/B-Ⅱ与LC3 A/B-Ⅰ比值差异无统计学意义（P〉0.05）；20 nmol/L西罗莫司组、80 nmol/L西罗莫司组、EBSS组LC3 A/B-Ⅱ与LC3 A/B-Ⅰ比值较对照组均明显升高，差异均有统计学意义（P〈0.05）。HeLa细胞Western印迹检测结果与A431细胞类似。双变量相关性分析显示，HeLa细胞中LC3A/B-Ⅰ与GABARAP表达呈正相关（r=0.869，95%CI：0.807~0.999，P=0.051），LC3A/B-Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r=-0.742，95%CI：-0.982~0.406，P=0.042）；A431细胞中LC3A/B-Ⅰ与GABARAP表达亦呈正相关（r=0.837，95%CI：-0.173~0.989，P=0.037），LC3A/B-Ⅱ与GABARAP表达呈负相关（r=-0.684，95%CI：-0.977~0.500，P=0.047）。吖啶橙染色显示，A431细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（23.750%±0.260%）与EBSS组（32.450%±0.488%）同样高于对照组（15.987%±0.242%，均P 〈0.05）；HeLa细胞自噬阳性细胞比例在西罗莫司组（33.307%±0.715%）和EBSS组（66.097%±1.141%）高于对照组（14.117%±0.295%，均P〈0.05）。结论经典自噬诱导剂西罗莫司和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平，GABARAP蛋白可能与LC3A/B高度相关。

关键词：自噬细胞系肿瘤 HeLa细胞西罗莫司饥饿 A431细胞 GABARAP

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