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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：宋莎莎李新宇王永芳徐兰芳唐美育郑家润中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室南京 210042

目的：研究盐酸13-己基小檗碱对T淋巴细胞活化、角质形成细胞增殖、以及白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)产生的影响,探索该化合物针对炎症性皮肤病的作用靶点. 方法：体外培养小鼠脾脏T淋巴细胞、永生化角... 详细信息

目的：研究盐酸13-己基小檗碱对T淋巴细胞活化、角质形成细胞增殖、以及白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)产生的影响,探索该化合物针对炎症性皮肤病的作用靶点. 方法：体外培养小鼠脾脏T淋巴细胞、永生化角质形成细胞株HaCaT细胞以及小鼠腹腔巨噬细胞,分别用伴刀豆球蛋白A(ConA)、重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)、312nm窄波UVB和脂多糖(LPS)诱导,采用MTT法检测盐酸13-己基小檗碱对小鼠T淋巴细胞活化和HaCaT细胞增殖的影响,用ELISA法检测其对HaCaT细胞IL-8和TNF-α,以及小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β产生的影响. 结果：盐酸13-己基小檗碱明显抑制小鼠T淋巴细胞活化(IC50≈0.123μg/ml);在0.05～0.78μg/ml 范围对HaCaT细胞增殖无明显的直接影响(抑制率＜15％),能剂量依赖性抑制25ng/ml rhTNF-α诱导的HaCaT细胞IL-8 产生(IC50=0.13μg/ml)和124.2mJ/cm2 窄波UVB照射引起的HaCaT细胞TNF-α产生(IC50=0.21μg/ml);在0.01μg/ml浓度时抑制10μg/ml LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β产生(抑制率达50％). 结论：盐酸13-己基小檗碱能抑制T淋巴细胞活化及炎症性细胞因子IL-8、TNF-α和IL-1β产生,提示以上作用可能是该化合物针对炎症性皮肤病的作用靶点.

关键词：炎症性皮肤病盐酸13-己基小檗碱 T淋巴细胞炎症细胞因子活化机制

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单纯性浅表皮肤感染小鼠模型的建立及有效性验证

单纯性浅表皮肤感染小鼠模型的建立及有效性验证

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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：王永芳李新宇宋莎莎高纪伟徐兰芳中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室南京 210042

建立与临床上单纯性浅表皮肤感染较为接近的小鼠模型,便于致病机制和外用抗菌药物筛选及疗效观察研究.选用BALB/c小鼠,采用胶带反复粘贴法破坏局部皮肤屏障,通过TEWL值标定皮肤屏障破坏程度,然后在其创面接种金葡菌(7.5×106CFU/mL... 详细信息

建立与临床上单纯性浅表皮肤感染较为接近的小鼠模型,便于致病机制和外用抗菌药物筛选及疗效观察研究.选用BALB/c小鼠,采用胶带反复粘贴法破坏局部皮肤屏障,通过TEWL值标定皮肤屏障破坏程度,然后在其创面接种金葡菌(7.5×106CFU/mL)及化脓性链球菌(1.5×108CFU/mL),建立了局部皮肤的实验感染模型,并给予氧氟沙星凝胶以验证模型的敏感性和有效性.结果显示:胶带反复粘贴7次和10次分别为金葡菌和化脓性链球菌感染前皮肤屏障破坏的最佳次数;6株金葡菌和3株化脓性链球菌局部感染后创面活菌培养结果分别为4.99±4.74、5.52±5.45、4.92±4.56、5.24±4.84、5.20±5.01、4.94±4.69和4.82±4.87、5.34±5.45、4.63±4.41CFU/g,与对照组比较差异均有统计学意义(p＜0.01).给予氧氟沙星凝胶后,对感染灶细菌生长的抑制率均大于80％.结果表明,所建立的皮肤浅表感染模型具有一定的敏感性和有效性,对皮肤浅表感染发病机制研究、外用抗菌药物筛选和疗效观察具有一定的应用前景.

关键词：单纯性浅表皮肤感染病理机制外用抗菌药物疗效评价

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雷公藤内酯醇对人黑素瘤M14细胞系增殖与凋亡的影响

雷公藤内酯醇对人黑素瘤M14细胞系增殖与凋亡的影响

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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：陶玥马鹏程孙建方周武庆 210042 南京中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室

目的：探讨雷公藤内酯醇对体外培养人黑素瘤M14细胞增殖与凋亡的影响. 方法：利用CCK8检测不同浓度和时间雷公藤内酯醇作用下对黑素瘤M14细胞的增殖抑制作用;用10nmol/L、20nmol/L和30nmol/L三种浓度雷公藤内酯醇作用48h 后,以流式... 详细信息

目的：探讨雷公藤内酯醇对体外培养人黑素瘤M14细胞增殖与凋亡的影响. 方法：利用CCK8检测不同浓度和时间雷公藤内酯醇作用下对黑素瘤M14细胞的增殖抑制作用;用10nmol/L、20nmol/L和30nmol/L三种浓度雷公藤内酯醇作用48h 后,以流式细胞仪检测细胞周期变化、Annexin-Ⅴ/PI法观察M14细胞凋亡的变化;用Hoechst33258染色法观察30nmol/L雷公藤内酯醇作用48h后细胞凋亡的形态变化. 结果：细胞周期显示雷公藤内酯醇处理过的M14细胞S期比例高于对照组,G2/M期比例低于对照组.空白对照组及10nmol/L、20nmol/L和30 nmol/L浓度雷公藤内酯醇处理的M14细胞凋亡率分别为2.92 ± 0.17％,20.99±0.40％,34.28±2.04％和63.38±0.71％,呈剂量依赖性诱导M14细胞凋亡,经30nmol/L雷公藤内酯醇作用后Hoechst33258染色示凋亡细胞形态改变. 结论：雷公藤内酯醇对黑素瘤M14细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用.

关键词：人黑素瘤雷公藤内酯醇 M14细胞系增殖作用细胞凋亡疗效评价

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LC-ESI-MS方法测定裸鼠皮肤中的醋酸地塞米松的浓度

LC-ESI-MS方法测定裸鼠皮肤中的醋酸地塞米松的浓度

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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：李玲珺马鹏程魏峻钱坤陶蕾中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室南京210042中国

目的:建立以醋酸曲安奈德为内标测定裸鼠皮肤中醋酸地塞米松浓度的液相色谱电喷雾离子化质谱联用方法.方法:以甲醇沉淀皮肤匀浆液中的药物,以液相色谱柱(150mm×2.0mm,5μm)分离化合物,流动相是甲醇-水(80:20,v/v),流速是0.2mL/min... 详细信息

目的:建立以醋酸曲安奈德为内标测定裸鼠皮肤中醋酸地塞米松浓度的液相色谱电喷雾离子化质谱联用方法.方法:以甲醇沉淀皮肤匀浆液中的药物,以液相色谱柱(150mm×2.0mm,5μm)分离化合物,流动相是甲醇-水(80:20,v/v),流速是0.2mL/min.结果:标准曲线的线性范围是0.05–5μg/mL;批内相对精密度偏差小于9.59％,批间相对精密度偏差小于7.82％,平均绝对回收率是89.95–95.97％.结论:该方法可成功地用于测定醋酸地塞米松在裸鼠皮肤中的浓度,并用于研究醋酸地塞米松在裸鼠皮肤中的经皮吸收过程.

关键词：醋酸地塞米松药物浓度皮肤高效液相色谱电喷雾离子化串联质谱方法

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醋酸地塞米松乳膏在裸鼠皮肤中的含量测定及不同处方的醋酸地塞米松乳膏对裸鼠经皮吸收的影响

醋酸地塞米松乳膏在裸鼠皮肤中的含量测定及不同处方的醋酸地塞米...

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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：李玲珺魏峻马鹏程钱坤陶蕾中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室江苏南京 210042

目的：研究醋酸地塞米松乳膏在裸鼠皮肤中的含量测定方法,同时对三种不同处方的醋酸地塞米松乳膏对裸鼠经皮吸收的影响进行考察.方法：选择裸鼠皮肤在体涂复方醋酸地塞米松乳膏约0.025g 后,于0、0.25、0.75、1.75、3、5、8、12、24h 取... 详细信息

目的：研究醋酸地塞米松乳膏在裸鼠皮肤中的含量测定方法,同时对三种不同处方的醋酸地塞米松乳膏对裸鼠经皮吸收的影响进行考察.方法：选择裸鼠皮肤在体涂复方醋酸地塞米松乳膏约0.025g 后,于0、0.25、0.75、1.75、3、5、8、12、24h 取皮,甲醇匀浆,采用LC-MS法测定皮肤中的醋酸地塞米松浓度,计算药代动力学参数,同时对含二甲基亚砜和粒度大的乳膏对裸鼠经皮吸收的影响进行评价.结果：该方法没有内源性物质干扰测定,醋酸地塞米松皮肤匀浆液浓度在0.0524～5.24μg/mL范围,线性关系良好.三种浓度的回收率分别是95.97％、89.95％、91.72％,精密度的RSD均＜15％,样品的稳定性良好.含DMSO的乳膏AUC 大于不含DMSO的乳膏,粒度大的乳膏AUC小于粒度小的乳膏.但三种乳膏的药动学参数经统计学分析没有统计学差异.结论：LC-ESI-MS分析方法快速、灵敏、准确,回收率高,重现性好,检测限低,可成功的用于测定醋酸地塞米松在裸鼠皮肤中的浓度,较好地反映醋酸地塞米松在裸鼠皮肤中的经皮吸收行为.本试验研究结果验证了DMSO 确实能增加药物的经皮吸收,乳膏粒度大会减少药物的经皮吸收,但统计学结果显示AUC 没有统计学差异.但从减少毒性作用,避免不良气味,以及宜于涂抹,增加适用人群的用药依从性方面来讲,最好在处方中不加DMSO,以及研制膏体细腻的乳膏.

关键词：醋酸地塞米松裸鼠皮肤测定经皮吸收

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儿童尖锐湿疣的流行病学及治疗的研究进展

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国际皮肤性病学杂志 2014年第6期40卷 370-373页

作者：苑春雨鞠梅陈崑中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

尖锐湿疣是人乳头瘤病毒所引起的性传播疾病.近年来,儿童患病的报道有所增加,其传播途径多样,不能忽略性虐待的可能,儿童感染人乳头瘤病毒类型及临床表现有别于成年人.儿童尖锐湿疣的治疗主要包括物理治疗、手术治疗、局部药物治疗等.... 详细信息

尖锐湿疣是人乳头瘤病毒所引起的性传播疾病.近年来,儿童患病的报道有所增加,其传播途径多样,不能忽略性虐待的可能,儿童感染人乳头瘤病毒类型及临床表现有别于成年人.儿童尖锐湿疣的治疗主要包括物理治疗、手术治疗、局部药物治疗等.选择治疗方案需要充分考虑安全性、有效性及耐受性,目前尚无美国食品药品监督管理局批准的可用于治疗＜ 12岁儿童尖锐湿疣的药物.

关键词：尖锐湿疣流行病学治疗应用儿童

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采用在体分时取样法研究2种咪喹莫特乳膏的裸鼠皮肤药动学行为

采用在体分时取样法研究2种咪喹莫特乳膏的裸鼠皮肤药动学行为

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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：李玲珺魏峻马鹏程曹玉萍陶蕾中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室江苏南京 210042

目的:利用裸鼠在体皮肤给药,比较两种外用咪喹莫特乳膏皮肤药代动力学行为,同时探讨裸鼠在体皮肤药代动力学方法的应用前景. 方法:选择裸鼠皮肤在体外用咪喹莫特乳膏约0.03g后,于0.25、0.5、1、2、4、6、8、24h取皮匀浆,采用高效液... 详细信息

目的:利用裸鼠在体皮肤给药,比较两种外用咪喹莫特乳膏皮肤药代动力学行为,同时探讨裸鼠在体皮肤药代动力学方法的应用前景. 方法:选择裸鼠皮肤在体外用咪喹莫特乳膏约0.03g后,于0.25、0.5、1、2、4、6、8、24h取皮匀浆,采用高效液相色谱法测定皮肤中的咪喹莫特浓度,比较药代动力学参数,计算主要药代动力学参数的偏差并对该方法进行评价. 结果:国产和进口乳膏中的咪喹莫特的Cmax分别为(82.80±8.13)μg·g-1、(76.46±13.08)μg·g-1,Tmax分别为(6.0±0.0)h、(5.0±1.2)h,t1/2分别为(25.28±4.27)h、(23.30±7.42)h,AUC0-24分别为(992.27±226.55)μg·h·g-1和(1037.02±175.93)μg·h·***、Tmax、AUC0-24的RSD分别为9.8％和17.1％、0％和24.0％及22.8％和17.0％.药动学数据符合一房室模型. 结论:两种乳膏中咪喹莫特的药代动力学参数无统计学差异,表明两种乳膏的裸鼠皮肤药代动力学行为无显著性差异.咪喹莫特的Cmax、Tmax、AUC0-24的RSD偏差均较小,回收率稳定,可重复,表明在体给药分时取样法能较好地反映药物在裸鼠体内的经皮代谢过程,适用于临床前外用药物的皮肤药代动力学筛选与评价.

关键词：咪喹莫特乳膏药动学行为皮肤给药分时取样法

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皮肤光老化小鼠模型的构建

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中国麻风皮肤病杂志 2014年第3期30卷 131-136页

作者：陈旭王莹鞠梅陈崑顾恒中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 天津市儿童医院皮肤科天津300074

目的:构建昆明鼠皮肤光老化小鼠模型。方法:采用模拟日光组分的紫外线照射昆明小鼠,初始照射剂量为最小红斑量,剂量周递增。然后进行照射组和对照组小鼠皮肤大体形态参数和组织学特征比较,进而从分子水平比较丙二醛产物水平和p53表达水... 详细信息

目的:构建昆明鼠皮肤光老化小鼠模型。方法:采用模拟日光组分的紫外线照射昆明小鼠,初始照射剂量为最小红斑量,剂量周递增。然后进行照射组和对照组小鼠皮肤大体形态参数和组织学特征比较,进而从分子水平比较丙二醛产物水平和p53表达水平。结果:照射小鼠皮肤厚度为0.0507±0.0082 cm较对照小鼠皮肤0.0397±0.0063 cm厚(P<0.05);照射组皮肤皱纹评分较对照组增高(P<0.05);组织学特征分析发现照射组小鼠皮肤出现显著的胶原纤维和弹力纤维光老化组织学特征。照射组小鼠皮肤丙二醛水平和p53表达显著升高。结论:皮肤光老化小鼠模型的建立为皮肤光老化的研究提供了可用的模型。

关键词：光老化紫外线小鼠

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丹皮酚对人黑素瘤A375和M14细胞系增殖与凋亡的影响

丹皮酚对人黑素瘤A375和M14细胞系增殖与凋亡的影响

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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：陶玥张孟丽马鹏程孙建方周武庆 210008 南京南京市鼓楼医院皮肤科 210042 南京中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室

目的:探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375和M14细胞增殖与凋亡的影响. 方法:利用CCK8检测不同浓度和时间丹皮酚作用下对黑素瘤A375和M14细胞的增殖抑制作用;用1.25mmol/L、2.5mmol/L和5mmol/L 三种浓度丹皮酚作用24h后,分别以流式细... 详细信息

目的:探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375和M14细胞增殖与凋亡的影响. 方法:利用CCK8检测不同浓度和时间丹皮酚作用下对黑素瘤A375和M14细胞的增殖抑制作用;用1.25mmol/L、2.5mmol/L和5mmol/L 三种浓度丹皮酚作用24h后,分别以流式细胞仪检测细胞周期变化、Annexin-Ⅴ/PI法观察A375和M14细胞凋亡的变化;用Hoechst33258 染色法观察5mmol/L丹皮酚作用48h后A375和M14细胞凋亡的形态变化. 结果:细胞周期显示丹皮酚处理过的A375和M14细胞G2/M期比例均高于对照组.以0mmol/L、1.25mmol/L、2.5mmol/L、5mmol/L丹皮酚作用24h后,A375细胞的早期凋亡率分别为3.11％±0.53％,13.74％±1.73％,25.95％±0.57％和46.44％±0.81％;M14细胞的早期凋亡率则分别为1.00％±0.08％,2.00％±0.01％,2.99％±0.29％和14.73％±0.94％,呈剂量依赖性诱导A375和M14细胞凋亡.经5mmol/L丹皮酚作用后Hoechst33258染色示凋亡细胞形态改变. 结论:丹皮酚对黑素瘤A375和M14细胞均具有抑制增殖和诱导凋亡的作用.

关键词：人黑素瘤丹皮酚 A375细胞 M14细胞系增殖作用凋亡机理

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丹皮酚对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

丹皮酚对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

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第七届全国皮肤病与性病防治学术研讨会

作者：陶玥张孟丽马鹏程孙建方周武庆 210008 南京南京市鼓楼医院皮肤科 210042 南京中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所药物研究室

目的探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法利用CCK8检测不同浓度和时间丹皮酚作用下对黑素瘤A375细胞的增殖抑制作用;用0mmol/L、1.25mmol/L、2.5mmol/L和5mmol/L 三种浓度丹皮酚作用24h后,以Annex... 详细信息

目的探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法利用CCK8检测不同浓度和时间丹皮酚作用下对黑素瘤A375细胞的增殖抑制作用;用0mmol/L、1.25mmol/L、2.5mmol/L和5mmol/L 三种浓度丹皮酚作用24h后,以Annexin-Ⅴ/PI法观察A375细胞凋亡的变化、分别测定caspase 3,caspase 8和caspase 9的活性,并以WesternBlot检测p53,NF-κB及相关蛋白水平的变化.结果丹皮酚处理A375细胞的24、48和72h的半数抑制浓度(IC50)分别约为5.19 mmol/L,1.50mmol/L和1.09mmol/L.1.25mM,2.5mM和5mM 丹皮酚在作用24h时,A375细胞早期凋亡率由对照组的3.11％±0.53％分别上升至13.74％±1.73％,25.95％±0.57％和46.44％±0.81％,各组与对照组间差异均有统计学意义(P ＜0.05 或P ＜ 0.01).;2.5 mM和5 mM 作用组的caspase3,caspase8,caspase9 活性与对照组间差异均有统计学意义(P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01);p53及Bax的蛋白水平随药物浓度的增加而升高,NF-κB、Bcl-2、Bcl-XL的蛋白水平随药物浓度增加而降低.结论丹皮酚对黑素瘤A375细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用;丹皮酚可通过细胞内和细胞外两条途径发挥促凋亡作用,其机制可能与调节p53及NF-κB基因有关.

关键词：丹皮酚黑素瘤凋亡 caspase p53 NF-κB

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