检索结果-内蒙古大学图书馆

药学学报 2017年第6期52卷 1007-1011页

作者：梁兰王庆华胡宗风朱平侯琦杨金玲中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

蝎毒活性肽BmK AngM1具有良好的镇痛活性,但目前对其抗炎活性的研究尚未有报道。本研究利用Escherichia coli BL21 trx B(DE3)对BmK AngM1进行了重组表达,利用IMPACTTM-TWIN系统建立了重组BmK AngM1(rBmK AngM1)的纯化方法,并对r BmK An... 详细信息

蝎毒活性肽BmK AngM1具有良好的镇痛活性,但目前对其抗炎活性的研究尚未有报道。本研究利用Escherichia coli BL21 trx B(DE3)对BmK AngM1进行了重组表达,利用IMPACTTM-TWIN系统建立了重组BmK AngM1(rBmK AngM1)的纯化方法,并对r BmK AngM1进行了抗炎活性检测。为了进一步提高其抗炎活性,本研究对BmK AngM1功能结构域中可能的活性位点(Y5、Y42和R58)进行了定点突变。结果表明,rBmK AngM1及其突变体均具有显著的抗炎活性,其中单突变体R58N及双突变体Y5F/R58N、Y42F/R58N与野生型蛋白相比,抗炎活性均有明显提高。由此推测,58位残基在BmK AngM1的抗炎活性中起重要作用。本研究为通过蛋白质工程设计改造BmK AngM1以提高其药理活性奠定了基础。

关键词：蝎毒几丁质定点突变抗炎活性

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麦角菌Cp-1菌株遗传转化体系的建立

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药学学报 2016年第5期51卷 828-833页

作者：王维波陈晶晶朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

麦角菌Cp-1菌株是本实验室筛选获得的工业生产菌株,能产生多种麦角生物碱。为了实现该菌株定向生物合成某种特定的药用麦角碱,遗传转化体系的建立不可或缺,但由于麦角菌本身存在遗传异质性,现有的遗传转化体系不能满足Cp-1菌株的需要。... 详细信息

麦角菌Cp-1菌株是本实验室筛选获得的工业生产菌株,能产生多种麦角生物碱。为了实现该菌株定向生物合成某种特定的药用麦角碱,遗传转化体系的建立不可或缺,但由于麦角菌本身存在遗传异质性,现有的遗传转化体系不能满足Cp-1菌株的需要。本文研究了菌丝体浓度、溶壁酶浓度和酶解时间对原生质体形成的影响,并考察了该菌株对不同抗生素的敏感性,以期建立其遗传转化体系。结果表明,使用1%溶壁酶(5 mL)25℃酶解菌丝体(1g)2 h后,即可产生大量的原生质体。在PEG的介导下,以1.5 mg·mL^(-1)的潮霉素B为筛选标记,转化质粒pAN7-1于原生质体,可获得大量转化子,PCR诊断证明外源基因已成功地整合到Cp-1菌株的基因组上。本研究为进一步改良Cp-1生产菌株奠定了重要的基础。

关键词：麦角菌麦角生物碱原生质体制备遗传转化

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人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶在酿酒酵母中的表达、定位及功能研究

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药学学报 2016年第6期51卷 998-1003页

作者：梁会超高丽丽胡宗风巩婷陈晶晶杨金玲朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

为了研究人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶(dammarenediol-Ⅱ synthase,DS)在酿酒酵母中的重组表达和定位,本研究克隆了人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds,并将其与绿色荧光蛋白基因gfp融合,构建了相应的重组表达质粒pESC-HIS-DS和pESC-HIS-DS-GFP,... 详细信息

为了研究人参达玛烯二醇-Ⅱ合酶(dammarenediol-Ⅱ synthase,DS)在酿酒酵母中的重组表达和定位,本研究克隆了人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds,并将其与绿色荧光蛋白基因gfp融合,构建了相应的重组表达质粒pESC-HIS-DS和pESC-HIS-DS-GFP,转化酿酒酵母INVSc1,获得了重组菌INVSc1-DS和INVSc1-DS-GFP。通过差速离心法制备重组菌微粒体,荧光显微镜下观察达玛烯二醇-Ⅱ合酶的表达及亚细胞定位,并通过酶促反应对该酶进行了功能鉴定,结果表明,DS为膜结合型蛋白,在体外能催化2,3-氧化鲨烯生成达玛烯二醇-Ⅱ。对重组菌发酵产物进行分析,结果表明,重组菌中产生了达玛烯二醇-Ⅱ,且通过将ds与gfp融合,重组菌中的达玛烯二醇-Ⅱ产量由7.53 mg·g^(-1)提高到12.24 mg·g^(-1),该结果为优化在酿酒酵母中构建的人参皂苷代谢途径提供了新思路。

关键词：达玛烯二醇-Ⅱ合酶绿色荧光蛋白融合表达酿酒酵母

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过表达HMGR催化结构域以优化酵母工程菌原人参二醇代谢途径的研究

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药学研究 2016年第8期35卷 444-448,493页

作者：梁会超胡宗风梁兰巩婷陈晶晶杨金玲朱平中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

目的过表达3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)催化结构域提高酵母工程菌中原人参二醇的产量。方法分别克隆酿酒酵母中编码3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶催化结构域的基因t HMG1、人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds和原人参... 详细信息

目的过表达3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)催化结构域提高酵母工程菌中原人参二醇的产量。方法分别克隆酿酒酵母中编码3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶催化结构域的基因t HMG1、人参中达玛烯二醇-Ⅱ合酶基因ds和原人参二醇合酶基因cyp1、拟南芥中CYP450还原酶基因cyp-re,构建相应表达质粒,转化酿酒酵母INVSc1,并检测重组菌中原人参二醇产量。结果重组菌INVSc1-DS-GFP/CYP1/CYP-Re和INVSc1-DS-GFP/CYP1/CYP-Re/t HMG1中原人参二醇产量分别为3.04 mg·L-1和26.5 mg·L-1。结论导入基因t HMG1,使原人参二醇产量提高了8.7倍,该结果为优化酵母工程菌中人参皂苷代谢途径奠定了基础。

关键词：原人参二醇 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR) 酿酒酵母代谢途径

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人参皂苷生物合成相关糖基转移酶研究基本策略及进展

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药学学报 2015年第2期50卷 148-153页

作者：梁会超王庆华巩婷杜国华杨金玲朱平中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

人参、西洋参和三七等传统中药材因其广泛且良好的药理活性一直倍受关注,而人参皂苷是其主要活性成分。糖基转移酶是催化人参皂苷生物合成最后一步的关键酶。人参皂苷苷元经过糖基转移酶的修饰,产生了复杂多样的人参皂苷,从而具有广泛... 详细信息

人参、西洋参和三七等传统中药材因其广泛且良好的药理活性一直倍受关注,而人参皂苷是其主要活性成分。糖基转移酶是催化人参皂苷生物合成最后一步的关键酶。人参皂苷苷元经过糖基转移酶的修饰,产生了复杂多样的人参皂苷,从而具有广泛的药理活性。目前人们已通过合成生物学技术实现了人参皂苷苷元和稀有人参皂苷compound K的合成。人参皂苷苷元的糖基化作为人参皂苷生物合成途径的最后一步,是整个合成途径中最重要的环节之一,近年来也取得了一些研究进展。本文介绍了人参皂苷生物合成途径中相关糖基转移酶研究的基本策略,并对相关进展进行了综述,为人参皂苷生物合成途径的深入解析及通过合成生物学途径获得人参皂苷提供理论参考。

关键词：人参人参皂苷生物合成糖基转移酶合成生物学

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植物蔗糖合酶的结构、功能及应用

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第9期31卷 904-913页

作者：李丽娜孔建强中国医学科学院&北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室&国家卫生计生委天然药物生物合成重点实验室北京100050

蔗糖合酶(Sucrose synthase,EC 2.4.1.13,Su S)是植物中广泛存在的一种糖基转移酶,能催化蔗糖的分解及合成反应,是叶片光合作用产物蔗糖进入各种代谢途径所必需的关键酶之一,在植物的生长发育过程中发挥着至关重要的作用.近年研究表明,... 详细信息

蔗糖合酶(Sucrose synthase,EC 2.4.1.13,Su S)是植物中广泛存在的一种糖基转移酶,能催化蔗糖的分解及合成反应,是叶片光合作用产物蔗糖进入各种代谢途径所必需的关键酶之一,在植物的生长发育过程中发挥着至关重要的作用.近年研究表明,蔗糖合酶不仅在植物淀粉合成、提高植株抗逆性和影响植株生长等方面扮演着重要的角色,也能为机体提供核苷单糖供体,而这个特性也使得蔗糖合酶基因可以作为一个催化成分被用于核苷单糖的生物合成,具有广泛的应用前景.本文对蔗糖合酶家族基因的染色体定位及功能、蔗糖合酶的结构及亚细胞定位,以及其所具有的生物学功能进行了综述,旨在为蔗糖合酶的进一步研究奠定理论基础.

关键词：蔗糖合酶核苷单糖结构及亚细胞定位生物学功能

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