目的:建立一种微柱离心方法测定紫杉醇脂肪乳包封率。方法:采用Sephadex G-50微柱,分别以适量体积的水及乙醇为洗脱液分离脂肪乳中的包封药物和游离药物。通过考察洗脱过程中紫杉醇及脂肪乳中油相成分大豆油的含量(紫杉醇的含量测定采用HPLC法,大豆油的含量测定采用HPLC-ELSD法),并以外加法制备的包封不完全的紫杉醇脂肪乳的洗脱曲线确立包封药物和游离药物的分界点,确定了最终的洗脱方式及洗脱液用量:以1 m L水,共洗3次将脂肪乳中包封药物完全洗脱,以3 m L乙醇,共洗2次将脂肪中游离药物完全洗脱。并以方法的回收率和重复性,对方法进行了验证。最终以建立的方法测定了3批紫杉醇脂肪乳样品的包封率。结果:微柱离心法能有效实现紫杉醇脂肪乳中包封药物和游离药物的分离。方法的回收率为100.4%,RSD为0.60%(n=9);重复性为99.4%,RSD为0.58%(n=5)。3批样品的包封率分别为99.2%、99.3%、99.5%。结论:该法操作简便,回收率高,重复性好,能区分不同包封情况的紫杉醇脂肪乳,测定结果准确可靠。
目的:建立黄芩素中有关物质的分离检测方法,鉴定其结构并初步探讨降解机制。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)检测黄芩素与合成过程中的有关杂质及强制破坏降解产物:色谱柱为ES Industries?Fluoro Sep-RP Phenyl,流动相为0.3%甲酸-甲醇-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为275 nm,柱温为10℃,进样量为10μL。采用LC-串联质谱法鉴定有关物质并推测降解机制:色谱柱为ES Industries?Fluoro Sep-RP Phenyl,流动相为0.3%甲酸-甲醇(梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为275 nm,柱温为10℃,进样量为10μL;离子源为电喷雾离子源,正负离子同时检测,雾化器压力为55 psi,干燥气体流速为11L/min,干燥气体温度为350℃,毛细管电压为4.0 k V,检测模式为全扫描一级质谱和选择离子全扫描二级质谱,扫描范围为m/z 100~1 000(一级质谱),50~500(二级质谱),电离电压为80~135 e V,碰撞能量为10~30 e V。结果:黄芩素检测质量浓度线性范围为2.4~480μg/m L(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;定量限、检测限分别为7.2、2.4 ng。黄芩素与有关物质及3个主要降解产物分离良好,有关物质为化学合成前体木蝴蝶素;碱降解产物为6,7位邻醌衍生物和7,8位邻醌衍生物,两者互为异构体;氧化降解产物为苯甲酸苯酯类衍生物。结论:黄芩素碱降解和氧化降解的主要机制包括吡喃环开环、互变重排和氧化反应等;该研究所建方法专属性好、灵敏度高,可用于黄芩素有关物质的分离检测。
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