检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术进展 2020年第4期10卷 409-416页

作者：马艺戈王冰蕊高洁刘金花佟静媛刘丽君石莉红北京协和医学院中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)实验血液学国家重点实验室国家血液病临床医学研究中心天津300020 东北大学生命科学与健康学院沈阳110169

细胞周期的测量是细胞增殖动力学的研究基础。通过添加30μmol·L-1氯化高铁血红素(Hemin)诱导人慢性髓系白血病K562细胞红系分化,利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)与7-AAD双染的方法检测Hemin诱导的K562红系分化细胞对细胞周期各期比... 详细信息

细胞周期的测量是细胞增殖动力学的研究基础。通过添加30μmol·L-1氯化高铁血红素(Hemin)诱导人慢性髓系白血病K562细胞红系分化,利用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)与7-AAD双染的方法检测Hemin诱导的K562红系分化细胞对细胞周期各期比例的影响,未诱导的K562细胞周期各期比例作为对照,检测发现Hemin诱导的K562红系分化细胞对其细胞周期相对值无明显影响。应用BrdU间隔染色结合流式细胞术的方法,通过分析BrdU间隔染色后BrdU阳性细胞群的动态变化规律,从而推算出K562红系分化细胞的倍增时间及细胞周期各期时长。根据测量结果发现,未诱导的K562细胞总倍增时间约为20 h,与通过生长曲线公式法计算倍增时间的结果相符,Hemin诱导的K562细胞的细胞周期倍增时长约为23 h。Hemin诱导的K562红系分化细胞较未诱导的K562细胞倍增时间与各期时长无明显差异。因此,Hemin诱导K562细胞红系分化对其细胞周期绝对值及相对值均无明显影响。

关键词：细胞周期 K562细胞氯化高铁血红素 5-溴脱氧尿嘧啶核苷

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抗体滴定在血液细胞流式细胞术中的应用

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生物技术进展 2020年第3期10卷 284-291页

作者：张晓茹张明英刘怡宁付莉霞邢文周圆中国医学科学院&北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室国家血液病临床医学研究中心天津300020 天津医科大学第二医院天津300211

流式细胞术(flow cytometry)可以实现高速、逐一的细胞定量分析和分选,是研究和诊断血液病的重要手段之一。但是由于不同实验所用细胞和实验条件不同,经常存在抗原阴性细胞非特异染色等问题。利用抗体滴定法,可通过计算、比较染色指数,... 详细信息

流式细胞术(flow cytometry)可以实现高速、逐一的细胞定量分析和分选,是研究和诊断血液病的重要手段之一。但是由于不同实验所用细胞和实验条件不同,经常存在抗原阴性细胞非特异染色等问题。利用抗体滴定法,可通过计算、比较染色指数,得到使抗原阳性细胞群和阴性细胞群达到最佳分离效果的实验条件。为了优化血液细胞流式细胞术中荧光抗体染色的实验条件,以小鼠骨髓细胞为被标记细胞,选择利用非串联荧光染料FITC标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体(FITC Rat Anti-Mouse CD11b)和串联荧光染料APC-eFluor780标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体(APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b)进行标记。通过计算不同浓度抗体标记小鼠骨髓细胞的染色指数进行抗体滴定,确定合适的抗体浓度区间,进而分析细胞数量、染色时间及固定步骤对抗体染色指数的影响,探究影响血液细胞抗体染色的关键因素。结果显示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b的浓度分别在0.156~2.500μg·mL-1和0.25~1.00μg·mL-1范围内染色指数较高,但是超出这个范围的抗体浓度会使染色指数降低;抗体浓度、染色时间一定时,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b分别在细胞数量为1.56×105~5.00×106 cells·管-1和1.56×105~3.12×105 cells·管-1范围内染色指数较高,但是超出这个范围的细胞数量会使染色指数降低;抗体浓度、细胞数量一定时,对于FITC Rat Anti-Mouse CD11b,随着染色时间的延长,染色指数降低,而APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b与之相反;通过比较固定前后染色指数的高低发现,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b在固定后染色指数均显著下降(P<0.01和P<0.05)。研究结果提供了一种通过抗体滴定优化流式分析血液细胞的方法,并指出在特定实验中根据抗体滴定结果选择合适的抗体浓度、细胞数量、染色时间和固定步骤对标记血液细胞进行流式检测的研究至关重要。

关键词：流式细胞术抗体滴定染色指数

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AGM-S3基质细胞共培养对中性粒细胞自发凋亡及其免疫功能的影响

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中国细胞生物学学报 2019年第8期41卷 1558-1568页

作者：王永荣范玉龙吕梦楠马润芝孙孟宇孔鑫王彤冯四洲韩明哲许元富中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室国家血液病临床医学研究中心

AGM-S3细胞是从小鼠主动脉–性腺–中肾区(aorta-gonad-mesonephros, AGM)分离的细胞系。该文通过建立体外AGM-S3基质细胞共培养体系,以揭示AGM-S3细胞对终末分化中性粒细胞存活和功能的影响。结果表明, AGM-S3细胞共培养显著延迟了中... 详细信息

AGM-S3细胞是从小鼠主动脉–性腺–中肾区(aorta-gonad-mesonephros, AGM)分离的细胞系。该文通过建立体外AGM-S3基质细胞共培养体系,以揭示AGM-S3细胞对终末分化中性粒细胞存活和功能的影响。结果表明, AGM-S3细胞共培养显著延迟了中性粒细胞的死亡(半衰期从20 h延长到48 h),同时维持中性粒细胞正常的趋化、吞噬和活性氧释放功能。进一步研究表明,AGM-S3细胞可能通过分泌细胞因子(如IL-6、MCP-1和IL-1α等)激活中性粒细胞促存活信号通路(比如Akt),促进Mcl-1和Bcl-xl持续表达,且抑制Caspase-3分子活化。在腹膜炎小鼠模型中,将体外共培养24 h的中性粒细胞从尾静脉输注到小鼠体内,其可以正常募集到炎症部位。研究结论提示,AGM-S3细胞可以维持终末分化中性粒细胞的存活和功能,而且这些中性粒细胞在移植到小鼠体内后具有正常的免疫活性。该研究将为今后针对粒缺和难治性感染病人的输注,以及中性粒细胞功能修饰等研究提供新的策略和实验依据。

关键词：中性粒细胞 AGM-S3细胞凋亡细胞因子

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艾曲泊帕治疗再生障碍性贫血的疗效与安全性:中国多中心调查结果

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中华血液学杂志 2020年第11期41卷 890-895页

作者：杨文睿韩冰常红吴秉毅孟凡凯纪德香李英梅郑正津费妍沈建平胡平丁晓庆张鹏王永庆张凤奎中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室国家血液系统疾病临床医学研究中心天津300020 中国医学科学院、北京协和医学院北京协和医院血液内科 100730 四川大学华西医院成都610041 南方医科大学顺德医院佛山528308 华中科技大学同济医学院附属同济医院武汉430030 南昌大学第一附属医院 330006 郑州大学第一附属医院 450052 福建医科大学附属协和医院福州350001 南昌大学第二附属医院 330008 浙江省中医院杭州310006 湖北医药学院附属太和医院十堰442099 北京中医药大学东方医院 100078 厦门大学附属中山医院 361004 安徽医科大学附属阜阳医院 236000

目的评估艾曲泊帕联合免疫抑制治疗(IST)在中国再生障碍性贫血(AA)患者中的疗效及安全性。方法调查分析2015年4月至2019年5月来自中国14个血液病治疗中心、连续应用艾曲泊帕治疗至少3个月的输血依赖非重型和重型AA患者临床资料。结果纳... 详细信息

目的评估艾曲泊帕联合免疫抑制治疗(IST)在中国再生障碍性贫血(AA)患者中的疗效及安全性。方法调查分析2015年4月至2019年5月来自中国14个血液病治疗中心、连续应用艾曲泊帕治疗至少3个月的输血依赖非重型和重型AA患者临床资料。结果纳入19例IST初治及37例IST难治性AA患者,中位艾曲泊帕治疗时间为7(3~31)个月,中位艾曲泊帕最大稳定使用剂量为75(50~150)mg/d。10例应用艾曲泊帕联合标准IST一线治疗的SAA患者3个月血液学反应(HR)率为60%,完全HR(CR)率为30%;9例艾曲泊帕联合环孢素A(CsA)一线治疗SAA患者后3个月HR率为89%,CR率为44%。19例患者应用艾曲泊帕联合IST一线治疗,至调查随访时HR率为79%,CR率为52.6%。19例CsA±雄激素治疗无效的AA患者,艾曲泊帕开始治疗后3个月HR率为57.9%(11/19),最佳HR率为68.4%;标准IST治疗无效的难治性AA,艾曲泊帕治疗最佳HR率为44%。51%患者应用艾曲泊帕发生不同严重程度的不良反应,以胃肠道不适最为常见。结论艾曲泊帕治疗可加快HR的获得,改善HR质量;残存造血细胞较多的AA患者或可采用非抗胸腺细胞球蛋白免疫抑制联合艾曲泊帕治疗;艾曲泊帕可作为CsA±雄激素治疗无效AA的补救治疗;艾曲泊帕不良反应轻微,多可耐受。

关键词：再生障碍性贫血艾曲泊帕

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干细胞临床研究的现状及展望

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中国医药生物技术 2020年第3期15卷 290-294页

作者：何萍程涛郝莎中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)实验血液学国家重点实验室/国家血液系统疾病临床医学研究中心天津300020 中国医学科学院科技管理处天津300020 中国医学科学院干细胞医学中心/北京协和医学院干细胞与再生医学系天津300020

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,在一定条件下可以分化为多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段可分为胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)和成体干细胞(adultstemcell,ASC);根据干细胞发育潜能可分为全能干细胞(如E... 详细信息

干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,在一定条件下可以分化为多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段可分为胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)和成体干细胞(adultstemcell,ASC);根据干细胞发育潜能可分为全能干细胞(如ESC)、多能干细胞(pluripotentstem cells,PSCs)和单能干细胞(如造血干细胞、神经干细胞等)。

关键词：造血干细胞多能干细胞发育潜能神经干细胞胚胎干细胞多向分化潜能成体干细胞发育阶段

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携带AFP启动子凋亡诱导配体基因的间充质干细胞与5-FU联用对HepG2细胞移植瘤的抑制作用

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药物生物技术 2019年第3期26卷 194-198页

作者：范冬梅杨圆圆杨铭颜次慧熊冬生苑庆华中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 天津一瑞生物科技股份有限公司天津300020

利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对Hep G2肝癌原位移植瘤的抑制作用。以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体... 详细信息

利用人脐带组织来源的MSCs (Human umbilical cord-derived MSCs,HUMSCs)运载AFP启动子驱动的凋亡诱导基因ILZ-sTRAIL,并与化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)联合应用,探讨其对Hep G2肝癌原位移植瘤的抑制作用。以克隆载体pUp-AFP、报告基因载体pGL3-basic及慢病毒表达载体pLentiR. ILZ-sTRAIL、pLentiR. Cop GFP为基础,采用PCR、酶切、连接的方法构建AFP启动子特异性驱动TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达的载体pLentiR. AFPILZ-sTRAIL及其对照载体p LentiR. AFPCop GFP。利用双荧光素酶法检测Hep G2、MCF-7和3T3细胞中AFP启动子的特异性活性;利用慢病毒感染的方法将HUMSCs标记AFP启动子驱动的Luc(MSC. AFPILZ-sTRAIL),建立Balb/c裸鼠的Hep G2肝癌原位移植瘤模型。应用MSC. AFPILZ-sTRAIL与5-FU联合进行治疗,利用Western blot检测ILZ-sTRAIL蛋白于肿瘤部位的表达,并于治疗后对肝脏中的肿瘤进行测量,同时眼眶取血检测血浆中谷氨酸转氨酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)的表达水平。结果表明,成功构建了报告基因载体p GL3-AFP、慢病毒表达载体p LentiR. AFPILZ-sTRAIL及pLentiR. AFPCop GFP,测序正确。AFP启动子在Hep G2细胞中的相对活性为49. 05%±5. 47%,由AFP启动子调控表达ILZ-sTRAIL基因的慢病毒可有效的感染HUMSCs。成功建立了Balb/c裸鼠的Hep G2肝癌原位移植瘤模型,ILZ-sTRAIL蛋白能特异的表达于肿瘤部位。MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组的肿瘤体积明显小于PBS组(P<0. 01),并且效果强于MSC. AFPILZs TRAIL单独治疗组;MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组可见肿瘤细胞固缩、坏死,并有不同程度的淋巴细胞浸润。MSC. AFPILZ-sTRAIL+5-FU组裸鼠血浆中ALT和AST的表达水平较对照组显著下降,其中ALT下降的更为明显(ALT,P<0. 01;AST,P <0. 05)。这一调控性治疗模式与5-FU联合应用在肝癌原位治疗中取得了良好的治疗效果,为肝癌的基因治疗和临床化疗提供了新思路。

关键词：间充质干细胞 TRAIL 5-氟尿嘧啶 HepG2细胞移植瘤原位

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非细胞病原体(纳米病原体)及其致病作用

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医学研究杂志 2019年第6期48卷 1-6页

作者：吴克复马小彤郑国光宋玉华中国医学科学院/北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室

近几个世纪的科技发展表明,不同尺度的时空遵循不同的运动规律,亦即直观世界与宏观、微观世界有不同的运行规则,近半个世纪的研究发现纳米尺度(约0.1 ~ 100.0nm)的颗粒有特殊性能,形成了新的研究领域-纳米科学和纳米技术.纳米生物学从... 详细信息

近几个世纪的科技发展表明,不同尺度的时空遵循不同的运动规律,亦即直观世界与宏观、微观世界有不同的运行规则,近半个世纪的研究发现纳米尺度(约0.1 ~ 100.0nm)的颗粒有特殊性能,形成了新的研究领域-纳米科学和纳米技术.纳米生物学从纳米尺度研究细胞内部各种细胞器的结构和功能,研究细胞内部、细胞微环境与整个生物体的物质、能量和信息交换.但是,生命科学工作者习惯于直观世界的分析与思维,现有的生命科学理论都是按照直观世界的运行规律建立的,对于近年来科技发展揭示的纳米领域的事物感到困惑,本文从纳米生物学和细胞分子生物学的视角探讨非细胞结构的纳米病原体.

关键词：纳米生物学病原体细胞器致病作用细胞分子生物学细胞结构细胞微环境科学工作者

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成人急性B淋巴细胞白血病患者基因突变谱及预后意义

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中华血液学杂志 2018年第2期39卷 98-104页

作者：冯娟弓晓媛贾玉娇刘凯奇李艳董小宝房秋云汝昆李庆华王慧君赵邢力贾艳楠宋洋田征王敏唐克晶王建祥秘营昌中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

【摘要】目的探讨成人急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）患者的基因突变谱，并分析其对患者预后的影响。方法收集113例2009年6月至2015年9月收治的成人B—ALL患者DNA标本，采用靶向特异的二代测序技术，针对血液恶性疾病相关的112种基因进... 详细信息

【摘要】目的探讨成人急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）患者的基因突变谱，并分析其对患者预后的影响。方法收集113例2009年6月至2015年9月收治的成人B—ALL患者DNA标本，采用靶向特异的二代测序技术，针对血液恶性疾病相关的112种基因进行突变分析，通过多个数据库筛选出可能致病的基因突变，描述其发生频谱，并通过Kaplan—Meier、Cox回归模型分析突变基因对患者总生存（OS）和无复发生存（RFS）的影响。结果113例患者中103例（92．0％）发生至少一种基因突变，29例（25．6％）患者发生≥3种基因突变。所有患者中突变率较高的基因有SFl、FATl、MPL、PTPNll、NRAS等，Ph阳性B—ALL和Ph阴性B—ALL患者中基因突变特点不尽一致。进一步分析基因突变对患者预后的影响，发现在Ph阴性B—ALL中伴JAK—STAT信号通路相关基因突变的患者（如JAKl、JAK2突变）较该信号通路未受影响的患者预后差（OS：P值分别为0．011和0．001；RFS：P值分别为0．014和〈0．001），而伴PTPNll突变的B—ALL患者较不伴PTPN11突变的患者有较好的OS及RFS，但差异无统计学意义（P值均〉0．05）；在Ph阳性***患者中，表观遗传学修饰相关的信号通路异常的患者预后较差（OS：P=0．038；RFS：P=0．047）。结论基因突变在成人***中存在普遍性，发生频谱因亚型而异，涉及多种信号通路，JAK家族相关基因突变常提示患者预后较差，突变基因之间的共存现象也预示着成人B—ALL患者的遗传复杂性和不稳定性。

关键词：白血病,B细胞二代测序技术 DNA突变分析预后

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成人早期前体T细胞急性淋巴细胞白血病的临床特征和预后分析

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中华血液学杂志 2018年第12期39卷 977-982页

作者：弓晓媛王迎刘兵城魏辉周春林林冬刘凯奇魏述宁宫本法张广吉刘云涛赵邢力李艳顾闰夏邱少伟秘营昌王建祥中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)、实验血液学国家重点实验室天津300020

目的分析成人早期前体T细胞急性淋巴细胞白血病(ETP-ALL)的临床、实验室特征及预后情况。方法回顾性分析2009年1月至2017年3月确诊的13例ETP-ALL患者的临床和实验室资料,并与非ETP的T-ALL(Non-ETPALL)患者进行比较。结果75例T-ALL患者中... 详细信息

目的分析成人早期前体T细胞急性淋巴细胞白血病(ETP-ALL)的临床、实验室特征及预后情况。方法回顾性分析2009年1月至2017年3月确诊的13例ETP-ALL患者的临床和实验室资料,并与非ETP的T-ALL(Non-ETPALL)患者进行比较。结果75例T-ALL患者中,符合ETP-ALL诊断标准患者13例(17.3%),其中男10例(76.9%),女3例(23.1%),诊断时中位年龄为35(15~49)岁。与62例Non-ETPALL患者相比,ETP-ALL患者的WBC、LDH、外周血原始细胞计数较低,胸腺肿物发生率更低,PLT水平更高。ETP-ALL与Non-ETPALL患者1个疗程CR率分别为33.3%和90.1%,差异具有统计学意义(χ2=26.521,P<0.001)。两组患者的中位总生存(OS)时间分别为11.33(95%CI0~28.46)和25.69(95%CI11.98~39.41)个月,3年OS率分别为41.7%和40.7%(P=0.699)。两组患者的中位元事件生存(EFS)时间分别为1.51(95%CI 1.23~1.79)和21.36(95%C14.67~38.04)个月,3年EFS率分别为16.7%和39.5%(P=0.002),3年元复发生存(RFs)率分别为53.0%和52.0%(P=0.797)。多因素分析显示是否为ETP-ALL并不是影响T-ALL总体预后的独立因素,而是否合并中枢神经系统白血病、是否行异基因造血干细胞移植为T-ALL的独立预后因素。结论该研究为国内首次关于成人ETP-ALL特征以及预后分析的报道。在成人T-ALL患者中,ETP-ALL占17.3%,具有起病时肿瘤负荷不高,但1个疗程化疗CR率较低的临床特点。异基因造血干细胞移植有可能克服ETP-ALL的不良预后。

关键词：白血病,T淋巴细胞,急性预后成人

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BET bromodomain蛋白在人胚胎干细胞造血分化中的作用研究

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中国实验血液学杂志 2018年第4期26卷 1186-1193页

作者：冯子岑温玉琪王梦鸽涂茜王洪涛王征宇周家喜中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨BET bromodomain蛋白在人胚胎干细胞造血分化中的作用。方法:应用人胚胎干细胞单层造血分化体系,通过免疫荧光技术、流式细胞术及实时定量PCR技术,研究BET bromodomain蛋白抑制剂I-BET151对造血分化的影响,并在不同分化阶段添... 详细信息

目的:探讨BET bromodomain蛋白在人胚胎干细胞造血分化中的作用。方法:应用人胚胎干细胞单层造血分化体系,通过免疫荧光技术、流式细胞术及实时定量PCR技术,研究BET bromodomain蛋白抑制剂I-BET151对造血分化的影响,并在不同分化阶段添加I-BET 151探讨其在造血分化过程中的作用阶段。结果:I-BET151能够显著抑制CD43^+造血干/祖细胞的产生,并且在APLNR^+侧板中胚层生成、CD34^+CD31^+生血内皮产生及内皮细胞生血转化3个阶段添加I-BET 151对CD43^+造血干/祖细胞的产生均有显著抑制作用。结论:人胚胎干细胞造血分化过程中添加BET bromodomain蛋白抑制剂I-BET 151,能够抑制CD43^+造血干/祖细胞的产生,并进一步证实BET

关键词：人胚胎干细胞造血分化 BET bromodomain蛋白 I-BET 151

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