检索结果-内蒙古大学图书馆

中国卫生检验杂志 2010年第8期20卷 1853-1854,1857页

作者：王有为韩之波康健孟磊韩忠朝细胞产品国家工程研究中心天津昂赛细胞基因工程有限公司天津300457 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学技术研究中心天津300457

目的:构建用于检测人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品。方法:通过逆转录PCR扩增得到目的片段后连接至pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞。分别经PCR和测序验证重组质粒的正确性。分光光度计测量重组质粒的吸光值,换算成拷贝... 详细信息

目的:构建用于检测人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品。方法:通过逆转录PCR扩增得到目的片段后连接至pMD18-T载体,转化DH5α感受态细胞。分别经PCR和测序验证重组质粒的正确性。分光光度计测量重组质粒的吸光值,换算成拷贝数浓度后作梯度稀释制得质粒标准品。10倍梯度稀释质粒标准品后进行实时荧光定量PCR分析。结果:人端粒酶催化亚基(hTERT)基因片段成功克隆至pMD18-T载体之中,重组质粒序列完全正确。实时荧光定量PCR分析10倍梯度稀释的质粒标准品所得标准曲线良好。结论:成功构建了人端粒酶催化亚基(hTERT)实时荧光定量PCR标准品。

关键词：端粒酶逆转录酶逆转录多聚酶链式反应多聚酶链式反应

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脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞增殖及白细胞介素-6分泌的影响

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实用医学杂志 2010年第4期26卷 555-557页

作者：郑丽坤张磊卢士红赵辉吴寿岭陈乃耀华北煤炭医学院附属开滦医院血液科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院骨科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院心内科唐山市063000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所华北煤炭医学院附属医院天津市300020 中国医学科学院中国协和医科大学血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 天津大学化工学院生物制药实验室 300000

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中... 详细信息

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中性粒细胞的比例分别为1∶1、1∶10、1∶50、1∶100,UC-MSCs单独培养为对照组(1∶0)。在分别培养18h和40h后,用MTT法检测各组增殖,评价不同组间的增殖情况,用ELISA方法检测不同组间培养上清IL-6水平。结果:1∶50和1∶100组UC-MSCs生长受到抑制(P<0.05),18h和40h差异无显著性(P>0.05)。1∶50实验组中,IL-6的分泌水平低于1∶0和1∶1实验组(P<0.05)。结论:高浓度的脐血中性粒细胞上清液抑制UC-MSCs的增殖。高浓度的脐血中性粒细胞的上清液抑制人UC-MSCs分泌IL-6。

关键词：间质干细胞脐带细胞增殖白细胞介素-6 中性粒细胞

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钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺对人乳腺癌细胞MCF-7生长的影响及相关作用机制

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中国医学科学院学报 2009年第3期31卷 326-329,I0003,I0004页

作者：代晓华刘荣周圆杨铭范冬梅熊冬生齐静杨纯正朱惠芳中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对人乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响及其作用机制。方法采用不同浓度EBB作用于MCF-7,MTT法检测其对MCF-7细胞的作用,流式细胞仪检测细胞周期,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞骨架、线粒体... 详细信息

目的探讨钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对人乳腺癌细胞系MCF-7生长的影响及其作用机制。方法采用不同浓度EBB作用于MCF-7,MTT法检测其对MCF-7细胞的作用,流式细胞仪检测细胞周期,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞骨架、线粒体、内质网等亚细胞结构。结果EBB对MCF-7细胞的IC50为(13.0±3.7)μmol/L,并可使S期细胞显著增加(P<0.05)。EBB作用可导致MCF-7细胞出现微管解聚、微丝重排、线粒体破裂和内质网肿胀,且随剂量增加效应增强。结论EBB可将MCF-7细胞阻滞于S期,抑制其增殖,其机制可能与细胞骨架、线粒体和内质网的结构和功能改变有关。

关键词： O-4-乙氧基-丁基-小檗胺 MCF-7细胞微丝微管线粒体内质网

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中国健康正常人、骨髓增生异常综合征及再生障碍性贫血患者HFE基因突变的研究

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中华血液学杂志 2009年第4期30卷 223-228页

作者：聂玲艾晓非郑以州李庆华杨琳肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的分析健康正常人、骨髓增生异常综合征（MDS）和再生障碍性贫血（AA）患者HFE基因突变的频率并探讨其与铁代谢和铁过载脏器功能受损相关指标的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）联合测序分析的方法检测... 详细信息

目的分析健康正常人、骨髓增生异常综合征（MDS）和再生障碍性贫血（AA）患者HFE基因突变的频率并探讨其与铁代谢和铁过载脏器功能受损相关指标的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）联合测序分析的方法检测271例MDS患者、402例AA患者和1615名健康正常对照的HFE基因H63D和C282Y突变，并比较未输注红细胞的MDS和AA患者HFE基因突变组与未突变组的铁代谢指标和铁过载脏器功能受损相关指标。结果271例MDS患者、402例AA患者及1615名正常对照中均未发现HFE基因C282Y突变及C282Y和H63D复合突变。MDS患者H63D突变率为4．1％（271例中11例），且均为杂合型。AA患者H63D杂合型突变率为9．7％（402例中39例），纯合型突变率0．25％（402例中1例）。正常对照H63D杂合型突变率为10．2％（164例），纯合型突变率0．24％（4例）。MDS患者H63D突变率明显低于正常对照（P=0．002），而AA患者与正常对照比较差异无统计学意义（P=0．988）。未输注红细胞的MDS及AA患者的血清铁蛋白（SF）值、血清铁（SI）值、铁饱和度（TS）值均接近或高于正常高限，血清未饱和铁（UIBC）值明显低于正常。未输注红细胞的MDS患者H63D突变组与未突变组的SF、SI、UIBC、总铁结合力（TIBC）、TS值差异无统计学意义（P值均〉0．05）；未输注红细胞的AA患者H63D突变组的SI值明显高于未突变组[42．6（24．6～60．4）μmol／L和32．0（8．4—63．3）μmol／L（P=0．011）]，而两组的其他铁代谢参数差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。MDS及AA患者或就诊前未输注红细胞的MDS及AA患者H63D突变组与未突变组的肝酶值、空腹血糖（FBS）值、心电图（ECG）异常率、外周血指标差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论HFE基因H63D和C282Y突变在人群的分布有种族和遗传的差异，中国人HFE基因的突变率明显低于白种人。MDS与AA患者本身均可致铁过载，HFE基因H63D和C282Y突变并不是导致其铁过载的主要原因。

关键词：基因,HFE 突变骨髓增生异常综合征贫血,再生障碍铁代谢障碍

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原发性骨髓增生异常综合征染色体核型异常特征及其预后意义的研究

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中华血液学杂志 2009年第4期30卷 217-222页

作者：李磷刘旭平聂玲于明华张悦秦铁军肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的研究原发性骨髓增生异常综合征（MDS）患者染色体核型特征及其预后意义。方法对染色体核型可供分析的351例成人原发MDS患者进行回顾性分析。结果染色体核型异常者237例（67．5％）。其中仅有染色体数目异常者99例（41．7％），仅有... 详细信息

目的研究原发性骨髓增生异常综合征（MDS）患者染色体核型特征及其预后意义。方法对染色体核型可供分析的351例成人原发MDS患者进行回顾性分析。结果染色体核型异常者237例（67．5％）。其中仅有染色体数目异常者99例（41．7％），仅有染色体结构异常者70例（29．5％），同时有数目与结构异常者68例（28．8％）；单一异常130例（54．8％），2种异常54例（22．8％），复杂异常（≥3种）53例（22．4％）。整倍体数目改变有多倍体4例（1．7％）；非整倍体及染色体臂的异常可见于所有染色体，常见的依次有＋8、-20／20q-、-7／7q-、-5／5q-、-18、-11／11q-、＋21、-Y、-21、-10、-16、-22、＋9、del（12）（p12）。-5／5q-（5．1％）的发生率低于西方国家（8．7％～23．4％），5q-综合征的发生率极低（0．3％），＋8（19．1％）和-20／20q-（9．4％）的发生率高于西方国家（分别为1．2％～7．0％和2．0％-3．5％）。237例染色体核型异常的患者中染色体易位有31例（13．1％），其中12种染色体易位在MDS中迄今尚无文献报道。i（17）（q10）有9例（3．8％），其中6例（66．7％）为单一异常。染色体重复有7例（3．0％），主要累及1号染色体（4例）。按IPSS染色体核型分组，预后差的染色体核型检出率在RA、RARS、5q-综合征组，RCMD、RCMD—RS组，RAEB-Ⅰ组，RAEB-Ⅱ组依次升高，差异有统计学意义（χ^2=2．854，P〈0．01）。351例MDS患者中，177例获得随访资料，中位随访时间14．5（1～131）个月，81例死亡，中位生存期（MS）12（1～90）个月。按IPSS染色体核型分组，染色体核型为预后好、中、差的患者MS分别为51[95％可信区间（CI5～77]、35（95％CI—65）和13（95％CI～17）个月，Log—rank检验三组总体生存（OS）率差异有统计学意义（P=0．004）。染色体核型按正常核型（NN）、嵌合核型（AN）、异常核型（AA）分组，NN、AN、AA患者MS分别为51（95％CI24～78）、36（95％CI0．3～71）和23（95％CI10～35）个月，Log—rank检验三组OS率差异有统计学意义（P=0．039）。结论我国MDS患者具有有别于西方国家MDS患者的染色体核型异常特征。染色体核型分析是MDS患者预后分层实现个体化治疗的重要依据。

关键词：骨髓增生异常综合征细胞遗传学分析染色体核型分析预后

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钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺对人白血病细胞K562和K562/A02生长的抑制作用

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中国药理学通报 2009年第10期25卷 1313-1317页

作者：邹凌琳周圆杨铭代晓华齐静熊冬生范冬梅杨纯正朱惠芳中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺(EBB)体外抗白血病作用及机制。方法四唑盐(MTT)比色法评价EBB的细胞毒作用;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞ROS水平;激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i含量。结果EBB明显抑制敏... 详细信息

目的研究钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺(EBB)体外抗白血病作用及机制。方法四唑盐(MTT)比色法评价EBB的细胞毒作用;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞ROS水平;激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i含量。结果EBB明显抑制敏感K562和耐药K562/A02细胞增殖,IC50分别为(8.22±1.67)mol.L-1和(8.97±1.48)mol.L-1。EBB作用早期诱导凋亡,晚期引起坏死。K562/A02细胞的ROS静息值是K562细胞的2倍,EBB诱导两种细胞ROS生成呈浓度和时间依赖性,加入SOD明显降低坏死率。K562/A02细胞的[Ca2+]i低于K562细胞。EBB能明显增加两种细胞的[Ca2+]i。结论EBB明显抑制K562和K562/A02细胞增殖。信号分子Ca2+、ROS参与了EBB的细胞毒作用。

关键词：钙调素拮抗剂 O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺人白血病细胞活性氧钙离子凋亡坏死

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二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

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生物工程学报 2009年第7期25卷 1042-1048页

作者：苏晔刘娟妮高瀛岱秦立杨铭王金宏许元富邵晓枫纪庆熊冬生杨纯正中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

向抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody)中引入二硫键,使diabody两条链以共价键交联,增强其稳定性。用重叠PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗Pgp diabody中抗CD3或抗Pgp轻重链可变区的适当部位定点突变成半胱氨酸,... 详细信息

向抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody)中引入二硫键,使diabody两条链以共价键交联,增强其稳定性。用重叠PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗Pgp diabody中抗CD3或抗Pgp轻重链可变区的适当部位定点突变成半胱氨酸,进行原核表达。表达产物经阳离子层析柱和抗Etag亲和层析柱分离纯化,还原性和非还原性SDS-PAGE电泳鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FCM)检测生物学活性。将改造前后的两种抗体分别置37oC含0.2%人血清白蛋白(Human serum albumin,HAS)的PBS中孵育,取多个时间点比较两者与两种把抗原的结合能力。基因重组质粒经测序证实序列正确。向抗Pgp轻重链引入突变的diabody(dsPgp-diabody)在原核表达系统中,SDS-PAGE显示纯化后的蛋白二硫键不能配对。而向抗CD3轻重链引入突变的diabody(dsCD3-diabody)能够在原核表达系统中进行可溶性表达,二硫键能够正确配对。并且与改造前的diabody相比,dsCD3-diabody的抗原结合特异性没有改变,抗原结合和竞争活性均无下降。改造前的diabody在37oCPBS(0.2%HAS)中孵育1h后活性即开始下降,24h后活性完全丧失;而dsCD3-diabody孵育72h后活性并无明显下降。本实验成功构建了dsCD3-diabody,并且能够进行可溶性表达。向diabody抗CD3轻重链区引入的二硫键在宿主菌中可以正确配对,抗原结合活性没有明显下降,而稳定性大大增强。向diabody轻重链区引入二硫键,以增强其稳定性的方法是可行的。

关键词：基因工程抗体 diabody 二硫键药物稳定性

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肿瘤坏死因子-α小分子抑制剂的设计、筛选及初步活性测定

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中国药理学通报 2009年第10期25卷 1287-1291页

作者：谷岳郭红星纪庆谢印良黄蕊熊冬生杨纯正刘汉芝许元富中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的结合计算机虚拟筛选和实物活性筛选,寻找新的TNF-α的小分子抑制剂,并完成对其生物学活性的测定。方法基于TNF-α受体蛋白的晶体结构和计算机辅助设计,用docking方法对含有约9万个小分子三维数据库进行筛选;选择对接结果较好的50个... 详细信息

目的结合计算机虚拟筛选和实物活性筛选,寻找新的TNF-α的小分子抑制剂,并完成对其生物学活性的测定。方法基于TNF-α受体蛋白的晶体结构和计算机辅助设计,用docking方法对含有约9万个小分子三维数据库进行筛选;选择对接结果较好的50个化合物进行初步的抑制TNF-α细胞毒活性实验;MTT法进一步分析筛选出的小分子化合物的细胞毒性,以及其在不同剂量时抑制TNF-α对L929细胞毒性的作用;采用AnnexinV-FITC检测上述小分子对TNF-α诱导的细胞凋亡的抑制作用。结果确定受体p55蛋白第二结构域的第二loop环中7肽(RKEMGQV)作为docking的配体模板;经计算机虚拟筛选后得到965种结构相似的化合物,综合分析后最终选择并购买了50个代表性化合物做进一步生活性测定;活性筛选结果显示有3个小分子化合物(C-12、C-34、C-35)能抑制TNF-α的细胞毒活性;对其中抑制活性较好的C-12进行了深入研究的结果表明:该化合物具有较低的细胞毒性和较强的抑制TNF-α(1μg.L-1)对L929细胞毒性的作用,表现为剂量依赖性,半数抑制浓度(IC50)为10μmol.L-1;该化合物能抑制TNF-α诱导的L929细胞凋亡,并呈剂量依赖性。结论通过计算机虚拟筛选并结合生物活性分析,筛选到一种能直接靶向TNF-α,并能中和TNF-α的细胞毒活性的全新的先导化合物。

关键词：肿瘤坏死因子-α 虚拟筛选小分子抑制剂分子对接细胞凋亡受体

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3-取代芳基氧化吲哚在肿瘤细胞内的定位

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中国药理学通报 2009年第6期25卷 751-754页

作者：周园王彩云苏晔程昕彭洪薇杨纯正熊冬生中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的观察3-取代芳基氧化吲哚(PHⅡ-7)在肿瘤细胞内的定位。方法通过化学合成的方法,在PHⅡ-7的1位引入氨烷基侧链,并将其氨基端进行FITC衍生化,在进行此衍生物体外抗肿瘤活性测定后,用激光共聚焦成像技术进行其在肿瘤细胞内的定位。结... 详细信息

目的观察3-取代芳基氧化吲哚(PHⅡ-7)在肿瘤细胞内的定位。方法通过化学合成的方法,在PHⅡ-7的1位引入氨烷基侧链,并将其氨基端进行FITC衍生化,在进行此衍生物体外抗肿瘤活性测定后,用激光共聚焦成像技术进行其在肿瘤细胞内的定位。结果成功合成具有氨烷基侧链的PHⅡ-7衍生物,并使之与FITC偶联;合成衍生物具有一定体外抗肿瘤活性;随着PHⅡ-7作用时间的增加,药物在肿瘤细胞系K562及其耐药肿瘤细胞系K562/A02中均逐渐由细胞质向细胞核内聚集。结论对于肿瘤细胞系K562及其耐药肿瘤细胞系K562/A02,PHⅡ-7作用靶位均为细胞核。

关键词：氧化吲哚衍生物多药耐药细胞内定位共聚焦激光扫描显微镜

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203例慢性淋巴细胞白血病患者预后相关因素分析

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中华血液学杂志 2009年第7期30卷 435-439页

作者：吴瞳李增军王亚非赵耀中齐军元钱林生邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者预后的主要影响因素。方法回顾性分析2000年至2007年就诊于中国医学科学院血液病医院并获得有效随访的203例CLL患者临床资料，收集可能影响预后的因素，以Kaplan—Meier法绘制生存曲线，用Log—r... 详细信息

目的探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者预后的主要影响因素。方法回顾性分析2000年至2007年就诊于中国医学科学院血液病医院并获得有效随访的203例CLL患者临床资料，收集可能影响预后的因素，以Kaplan—Meier法绘制生存曲线，用Log—rank检验进行单因素分析，运用COX回归模型评估独立预后因素。结果全组CLL患者中位随访时间为48．0（3．0～156．0）个月，5年总体生存（OS）率为（87．3±2．4）％，10年OS率为（77．4±3．3）％，死亡48例（23．6％）。单因素分析显示临床分期为晚期、有B症状、结外器官受累、受累淋巴区≥3个、肝脏肿大、Hb〈100g／L、BPC〈100×10^9／L、外周血淋巴细胞计数（ALC）〉50×10^9／L、形态学表现为混合细胞型、病程中出现分期进展、对治疗无反应、并发感染、并发第二肿瘤或类型转化为不良预后因素。多因素分析显示受累淋巴区≥3个和形态学表现为混合细胞型为独立的不良预后因素，根据这两项结果重新分组，低危、中危、高危组患者5年OS率分别为（89．8±3．5）％、（66．4±7．2）％、（15．0±13．8）％，各组间差异均具有统计学意义（P值均〈0．05）。结论初诊时受累淋巴区数和CLL细胞形态学特征有助于评估CLL患者的预后。

关键词：白血病淋巴细胞患者临床分析

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