检索结果-内蒙古大学图书馆

中华血液学杂志 2009年第2期30卷 97-102页

作者：代红胜高静韬张彤雯杨舟车永哲郑以州中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 南开大学医学院

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）α在调节造血干／祖细胞（HS／PC）归巢中的增效作用及其机制。方法将荧光染料CFSE标记的脐血CD34^＋细胞移植入接受照射（对照组）或联合TNFα预处理（实验组）的BALB／c受鼠。移植后20h，采用流式细胞术（... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）α在调节造血干／祖细胞（HS／PC）归巢中的增效作用及其机制。方法将荧光染料CFSE标记的脐血CD34^＋细胞移植入接受照射（对照组）或联合TNFα预处理（实验组）的BALB／c受鼠。移植后20h，采用流式细胞术（FACS）检测脐血CD34^＋细胞在BALB／c受鼠中的分布（外周血、肝脏、肺脏）与归巢（骨髓、脾脏）特征，计算其相应的归巢效率；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测BALB／c受鼠血清基质衍生因子（SDF）-1α水平；FACS检测TNFα预处理前、后脐血CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平的变化；免疫组化法检测BALB／c受鼠骨髓及脾脏组织切片中SDF-1α的表达水平。结果脐血CD34^＋细胞主要归巢于BALB／c受鼠骨髓和脾脏；经TNFα预处理的实验组BALB／c受鼠骨髓归巢率[（0．65±0．13）％]显著高于对照组[（0．30±0．09）％，P〈0．01]；但TNFα预处理同时显著抑制脐血CD34^＋细胞归巢于BALB／c受鼠脾脏（P〈0．01）；不同剂量的TNFα预处理不影响受鼠血清SDF-1α水平；新鲜分离的脐血CD34^＋细胞与不同浓度TNFα共孵育18h后，其表面CXCR4表达水平并无明显变化；但TNFα预处理受鼠骨髓龛组成细胞SDF—1α表达增高，且脾脏红髓区小梁动脉和小梁静脉内皮细胞SDF-1d表达增高。结论TNFα通过提升骨髓龛SDF-1α浓度梯度促进HS／PC归巢于骨髓，这一发现将有助于为临床提供可行性HS／PC归巢增效剂。

关键词：造血干细胞受体 CXCR4 归巢肿瘤坏死因子

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膜结合型干细胞因子促进白血病细胞K562的增殖和集落形成

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第1期16卷 6-11页

作者：王大刚郑国光种靖慧马翠花林永敏吴克复中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-SCF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-SCF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进... 详细信息

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-SCF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-SCF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进一步构建m-SCF的表达质粒pTARGET-m,DNA测序鉴定。通过脂质体介导分别将上述载体和空载体pTARGET转染白血病K562细胞,用G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PCR、Western blotting法鉴定。通过CCK-8细胞增殖实验以及集落形成实验观察不同细胞株体外增殖特点。结果:成功构建了s-SCF和m-SCF的真核表达载体,获得了稳定转染细胞株K562-V、K562-S、K562-M。U底培养条件下,K562-M增殖能力明显高于K562-V和K562-S(均P<0.01)。K562-M集落形成率显著高于K562-V和K562-S(均P<0.01),且集落形态大于其他两种细胞。结论:m-SCF与C-kit之间的并置性作用显著促进白血病细胞的增殖。

关键词：膜结合型干细胞因子 C-kit 白血病并置性作用

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抗脐带间充质干细胞表面分子噬菌体ScFv抗体库的构建及初步鉴定

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中国生物工程杂志 2009年第2期29卷 11-16页

作者：徐洁顾东生廖文斌许静杜伟廷张磊卢士红韩忠朝中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:利用噬菌体展示技术构建抗脐带间充质干细胞表面分子噬菌体ScFv抗体库。方法:收集P3代培养的UC-MSCs免疫BALB/c小鼠,提取其脾细胞总RNA,RT-PCR扩增全套VH和VL基因片段,将其先后克隆入噬菌粒pSEX81中,构建成完整的噬菌体ScFv抗体库... 详细信息

目的:利用噬菌体展示技术构建抗脐带间充质干细胞表面分子噬菌体ScFv抗体库。方法:收集P3代培养的UC-MSCs免疫BALB/c小鼠,提取其脾细胞总RNA,RT-PCR扩增全套VH和VL基因片段,将其先后克隆入噬菌粒pSEX81中,构建成完整的噬菌体ScFv抗体库。结果:构建的噬菌体ScFv抗体库的库容为2×107cfu,ScFv插入重组率为93%,BstN1酶切图谱呈不同多样性。ScFv抗体库经3轮初步筛选后插入重组率达100%,3个克隆出现了相同的酶切图谱,并且随着筛选次数的增加,输出/输入比明显提高,这说明抗体库得到了特异性富集。结论:成功地构建了抗脐带间充质干细胞表面分子噬菌体ScFv抗体库,这为将来筛选特异性抗体和进一步用于间充质干细胞表面特异性分子研究奠定了坚实的基础。

关键词：间充质干细胞脐带噬菌体展示单链抗体库

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阿糖胞苷增强白血病细胞B7分子表达及促进双功能抗体对靶细胞的杀伤

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第5期16卷 447-451页

作者：杨铭范冬梅高瀛岱赵英新周圆许元富纪庆王金宏熊冬生杨纯正中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用。方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经... 详细信息

目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用。方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经Ara-C刺激不同时间后B7-1、B7-2分子的表达,RT-PCR方法检测B7-1mRNA、B7-2mRNA的表达,MTT法检测经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞对T淋巴细胞增殖的影响。CytoTox96非放射性细胞毒性分析检测Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体对人外周血淋巴细胞杀伤K562和K562/A02靶细胞的影响。结果:经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较对照组明显升高;MTT结果显示,经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞能促进T淋巴细胞增殖;Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体在0.39:1～25:1效靶比范围内,随着效靶比的升高,介导T淋巴细胞对K562和K562/A02细胞的杀伤率随之提高,对高表达Pgp的耐药K562/A02细胞尤为明显。结论:Ara-C可上调白血病细胞B7分子的表达,从而增强anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用。

关键词：阿糖胞苷白血病细胞 anti-CD3/anti-Pgp B7-1 B7-2 T淋巴细胞

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骨髓增生异常综合征患者铁代谢状况及其对预后的影响

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中华血液学杂志 2009年第1期30卷 50-53页

作者：聂玲李磷杨艺红张战强于明华徐泽锋郝玉书肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

近年来陆续有研究证实骨髓增生异常综合征（MDS）患者铁代谢存在明显紊乱，主要表现为不同程度的铁负荷过高，从而导致重要脏器损害，生存期缩短。此外，铁过载也是影响MDS患者造血干细胞移植疗效的一个独立预后因素。已有个别临床研究... 详细信息

近年来陆续有研究证实骨髓增生异常综合征（MDS）患者铁代谢存在明显紊乱，主要表现为不同程度的铁负荷过高，从而导致重要脏器损害，生存期缩短。此外，铁过载也是影响MDS患者造血干细胞移植疗效的一个独立预后因素。已有个别临床研究表明低危MDS患者采用祛铁治疗（ICT）可改善患者的总体生存。

关键词：骨髓增生异常综合征预后因素铁代谢代谢状况造血干细胞移植生存期缩短主要表现脏器损害

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范可尼贫血基因与肿瘤易感性

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中华血液学杂志 2009年第7期30卷 496-498页

作者：闫昕郑以州中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

范可尼贫血（Fanconi anemia，FA）是一种少见的常染色体或X-连锁隐性遗传性疾病，临床上以进行性骨髓造血功能衰竭、多发性先天畸形及高风险进展为肿瘤，如急性髓系白血病（AML）和实体肿瘤等为特征。近年来医学界对FA肿瘤易感性愈加... 详细信息

范可尼贫血（Fanconi anemia，FA）是一种少见的常染色体或X-连锁隐性遗传性疾病，临床上以进行性骨髓造血功能衰竭、多发性先天畸形及高风险进展为肿瘤，如急性髓系白血病（AML）和实体肿瘤等为特征。近年来医学界对FA肿瘤易感性愈加关注，我们就此方面的研究现状作一综述。

关键词：肿瘤易感性范可尼贫血 X-连锁隐性遗传性疾病骨髓造血功能衰竭急性髓系白血病基因常染色体先天畸形

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NQO1C_(609T),RAD51_(G135C)和XRCC3_(C241T)单核苷酸多态性与急性淋巴细胞白血病发病相关性研究

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中国实验血液学杂志 2009年第3期17卷 523-528页

作者：张战强杨琳张悦杨艺红聂玲李璘王建祥竺晓凡肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探索NQO1C609T,RAD51G135C和XRCC3C241T单核苷酸多态性与急性淋巴细胞白血病(ALL)发生的关系。对170例ALL患者和458名与患者无血缘关系的正常人,用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析其NQO1C609T,RAD51G1... 详细信息

本研究探索NQO1C609T,RAD51G135C和XRCC3C241T单核苷酸多态性与急性淋巴细胞白血病(ALL)发生的关系。对170例ALL患者和458名与患者无血缘关系的正常人,用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法分析其NQO1C609T,RAD51G135C和XRCC3C241T基因型。结果表明:在单基因水平分析时NQO1C609T,RAD51G135C和XRCC3C241T基因型比例在正常对照和ALL患者之间无统计学差异,提示其单独作用时对ALL发病的影响无统计学意义。当3个基因联合分析时,NQO1C609T和RAD51G135C均为变异型时伴髓系抗原阳性的ALL和伴平衡易位ALL的发病风险增加(OR值分别为5.553和2.618);NQO1C609T纯合变异型时农村儿童ALL的发病风险增加(OR值为2.541)。结论:NQO1C609T、RAD51G135C和XRCC3C241T基因型联合作用可能促进ALL的发病,提示多基因联合分析较单基因对ALL的发病分析可能更有预测意义。

关键词：急性淋巴细胞白血病 NQO1基因 RAD51基因 XRCC3基因同源重组修复单核苷酸多态性

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人骨髓和脐带来源间充质干细胞体外支持造血能力的比较研究

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中国实验血液学杂志 2009年第5期17卷 1294-1300页

作者：刘蒙杨少光刘鹏霞杜伟廷顾东生卢士红邢文韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究分离鉴定人骨髓和脐带来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),比较两种间充质干细胞体外支持长期造血的能力。用密度梯度离心或酶消化方法分离骨髓和脐带间充质干细胞,通过贴壁培养的方法进一步纯化MSC。检测骨髓和脐带... 详细信息

本研究分离鉴定人骨髓和脐带来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC),比较两种间充质干细胞体外支持长期造血的能力。用密度梯度离心或酶消化方法分离骨髓和脐带间充质干细胞,通过贴壁培养的方法进一步纯化MSC。检测骨髓和脐带MSC的表型以及成脂、成骨分化潜能。通过LTC-IC(long-termculture-initiatingcells)实验,检测骨髓和脐带间充质干细胞体外支持长期造血的能力,并在培养的第3、5、7周分析两种MSC组悬浮细胞的表型。结果表明,骨髓和脐带间充质干细胞体外培养时均呈纺锤形、贴壁生长,2种MSC均表达CD90、CD105、CD73、CD29、CD54、CD166和HLA-ABC,不表达HLA-DR、CD34和CD45。化学染色证实,2种MSC体外能分化为脂肪细胞和成骨细胞。LTC-IC实验第5周脐带间充质干细胞组CFC(colony forming cell)的产率与骨髓间充质干细胞组比较无统计学差异(p>0.05);第6、7、9周,脐带MSC组CFC的产率均低于骨髓MSC组(p<0.05)。第3、5、7周悬浮细胞表型检测结果显示,随着培养时间的延长,2种MSC组CD34和CD117的阳性率均明显下降,而CD33、CD13、CD11b的阳性率逐渐上升。结论:从人骨髓和脐带组织中成功分离并鉴定出间充质干细胞,脐带间充质干细胞能够在体外支持长期造血,但其造血支持能力弱于骨髓间充质干细胞。

关键词：骨髓脐带间充质干细胞造血支持能力

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细胞酸化对K562／A02耐药细胞株中P-糖蛋白的影响

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中国实验血液学杂志 2009年第3期17卷 568-573页

作者：芦颖李庆华马丽李彬袁文肃茹永新王建祥庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探讨细胞酸化对K562/A02细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法。利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定K562及K562/A02细胞内pH值(intracellularp H,pHi);采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/A02细胞中P-gp功能的影响;分别采用Western blot及实时定量RT-PCR技术检测P-gp的蛋白表达水平和mRNA表达水平的变化。结果表明:细胞酸化3小时对K562及K562/A02细胞的活力影响较小。在K562/A02细胞中,P-gp的功能随pHi的降低而减弱,细胞酸化明显增加了细胞对罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)的累积,并抑制了P-gp介导的Rh123外排。细胞酸化还分别在蛋白水平和mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达,并且这种抑制具有pHi及时间的依赖性。结论:细胞酸化能够抑制K562/A02耐药细胞株中P-gp的表达和功能。

关键词：细胞酸化细胞内pH值 P一糖蛋白多药耐药

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原始细胞不增高的骨髓增生异常综合征患者按WHO标准诊断分型的回顾性分析

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中华内科杂志 2009年第8期48卷 678-680页

作者：徐泽锋于明华张悦秦铁军肖志坚中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组异质性克隆性造血干细胞疾病，是髓系细胞一系或多系发育异常和无效造血，可以伴有原始细胞增多。WHO于2001年颁布的MDS分型标准已被国际上普遍采用。随着MDS分型标准、预后积分系统及疗效标准的提出并... 详细信息

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组异质性克隆性造血干细胞疾病，是髓系细胞一系或多系发育异常和无效造血，可以伴有原始细胞增多。WHO于2001年颁布的MDS分型标准已被国际上普遍采用。随着MDS分型标准、预后积分系统及疗效标准的提出并被广泛接受，MDS的分型标准往往被作为诊断标准。在执行上，特别是对于骨髓原始细胞比例不增高（〈5％）的MDS的诊断往往偏于宽泛。2006年维也纳MDS工作会议经讨论一致提出一个MDS最低诊断标准，明确和细化了诊断条件。WHO于2008年颁布了修订后的MDS分型标准，该标准主要对原始细胞比例不增高的MDS的分型诊断进行了修订。

关键词：骨髓增生异常综合征原始细胞增多 WHO标准诊断分型克隆性造血干细胞疾病分型标准骨髓原始细胞 MDS

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