检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2009年第3期17卷 700-705页

作者：刘鹏霞张磊廖文斌杜伟廷顾东生刘蒙卢士红韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探索间充质干细胞(MSC)输注对动脉粥样硬化的作用。通过体外培养兔骨髓穿刺液获得间充质干细胞。30只新西兰白兔随机分为3组:正常饮食组6只(对照),给予普通饲料饲养;高脂饮食组12只,高胆固醇高脂饲料喂养后静脉注射生理盐水;MSC... 详细信息

本研究探索间充质干细胞(MSC)输注对动脉粥样硬化的作用。通过体外培养兔骨髓穿刺液获得间充质干细胞。30只新西兰白兔随机分为3组:正常饮食组6只(对照),给予普通饲料饲养;高脂饮食组12只,高胆固醇高脂饲料喂养后静脉注射生理盐水;MSC注射组12只,高胆固醇高脂饲料喂养后静脉注射5×107MSC。分别于实验前,实验第5周,第9周和第13周测体重和空腹血脂水平。实验第13周时处死所有动物,检测动脉粥样硬化斑块和主动脉外膜滋养血管。结果表明,MSC注射组与高脂饮食组相比,主动脉窦斑块面积显著增大(斑块面积占血管面积的百分比分别为(23.35±3.51)%和(11.39±3.08)%,p<0.05),整体主动脉斑块形成明显增多(斑块面积占主动脉面积的百分比分别为(76.64±12.70)%和(57.61±9.00)%,p<0.05)。MSC注射组兔主动脉外膜滋养血管增生明显,毛细血管密度增加。结论:异基因MSC输注促进高脂血症兔动脉粥样硬化斑块进展。采用MSC或包含MSC的细胞进行细胞治疗时应采取策略,减少MSC促进斑块形成的作用。

关键词：动脉粥样硬化细胞治疗内皮间充质干细胞滋养血管

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异基因造血干细胞移植后T细胞免疫网络及相关治疗研究进展

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中华血液学杂志 2009年第8期30卷 567-570页

作者：张丽郝牧邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）既可避免肿瘤细胞污染，又可发挥移植物抗肿瘤效应（GVT），是多种血液及免疫系统疾病的根治手段，临床应用日益广泛。随着移植技术的进步，allo—HSCT的移植相关死亡明显降低，移植物抗宿主病（GVH... 详细信息

异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）既可避免肿瘤细胞污染，又可发挥移植物抗肿瘤效应（GVT），是多种血液及免疫系统疾病的根治手段，临床应用日益广泛。随着移植技术的进步，allo—HSCT的移植相关死亡明显降低，移植物抗宿主病（GVHD）成为首要难题。二十世纪90年代提出从GVHD中分离GVT的概念，近年来，寻找GVT、GVHD免疫平衡点的新概念获得广泛认可。T细胞作为GVT和GVHD的双重执行者一直是移植研究的焦点。我们就allo—HSCT后T细胞免疫网络及相关治疗的研究近况作一综述。

关键词：异基因造血干细胞移植免疫网络 T细胞移植后治疗移植物抗肿瘤效应移植物抗宿主病免疫系统疾病

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Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的可溶性表达、纯化及活性测定

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生物工程学报 2009年第4期25卷 580-586页

作者：谢印良谷岳黄蕊李雪霞杜雪王金宏熊冬生杨纯正许元富中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学总医院天津300020

本研究旨在克隆和表达人血管内皮生长因子受体-1胞外Ⅲ区蛋白,并测定其生物学活性。应用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞中克隆Flt-1胞外Ⅲ区基因片段,经测序鉴定后再克隆到原核表达载体pAYZ中,构建出的表达载体pAYZflt-1Ⅲ转化大肠杆菌16C9... 详细信息

本研究旨在克隆和表达人血管内皮生长因子受体-1胞外Ⅲ区蛋白,并测定其生物学活性。应用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞中克隆Flt-1胞外Ⅲ区基因片段,经测序鉴定后再克隆到原核表达载体pAYZ中,构建出的表达载体pAYZflt-1Ⅲ转化大肠杆菌16C9后,用低磷培养基诱导表达目的蛋白;采用E-tag亲和层析柱纯化目的蛋白;用SDS-PAGE、Western blotting和BCA法对其进行定性、定量检测鉴定;用ELISA、损伤愈合试验和Transwell法检测靶蛋白生物学活性。克隆的Flt-1胞外Ⅲ区基因经测序鉴定正确。所构建的pAflt-1Ⅲ表达载体经低磷培养基诱导后高表达出可溶性Flt-1胞外Ⅲ区蛋白,产量约为1.1mg/L;ELISA结果显示该蛋白可以结合VEGF165,并表现为剂量依赖性,其与配体结合的解离常数Kd为1.180pmol/L。损伤愈合试验和Transwell结果显示该蛋白可以抑制VEGF165(50ng/ml)和bFGF(100ng/mL)诱导的脐静脉内皮细胞的迁移,并呈剂量依赖性。这将为今后开展人flt-1基因Ⅲ区的功能研究及其单抗研制奠定了实验基础。

关键词：血管内皮生长因子受体-1 血管新生血管内皮生长因子165 克隆单抗

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Bmi-1沉默对K562细胞功能的影响

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中国实验血液学杂志 2009年第2期17卷 266-270页

作者：陈晓梨任倩陈振萍周泽平赵钦军邱志勇董春兰韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

Bmi-1是一种转录抑制子,属于Polycomb家族成员之一。Bmi-1基因在调控正常或白血病干细胞的自我更新中起着至关重要的作用。缺乏Bmi-1表达的急性髓系白血病细胞遭遇了增殖阻止和表现了分化和凋亡的征兆,这些发现导致有人提议和认为Bmi-1... 详细信息

Bmi-1是一种转录抑制子,属于Polycomb家族成员之一。Bmi-1基因在调控正常或白血病干细胞的自我更新中起着至关重要的作用。缺乏Bmi-1表达的急性髓系白血病细胞遭遇了增殖阻止和表现了分化和凋亡的征兆,这些发现导致有人提议和认为Bmi-1在白血病治疗中可作为潜在靶点。本研究探讨靶向针对Bmi-1的短发夹RNA(shRNA)对人慢性髓系白血病K562细胞功能的影响。采用RNA干扰技术,构建靶向针对Bmi-1的shRNA真核表达载体,利用脂质体lipofactamine2000将shRNA真核表达载体转染入K562细胞中,经G418(400μg/ml)筛选得到抗性克隆。用PCR和Western blot分别检测转染shRNA后K562细胞中Bmi-1的mRNA和蛋白水平的变化;以MTT法检测干扰组、对照组和未转染组细胞间的增殖情况;以集落形成实验测定3组间集落形成能力。结果表明:在设计的4个shRNA片段中,有1个片段显示显著的抑制效果。该shRNA转染K562细胞后,在mRNA水平上Bmi-1的表达明显下调,Western blot在蛋白水平上也证实了Bmi-1表达显著下调。MTT法和集落形成实验显示了干扰组、对照组和未转染组细胞3者间的增殖能力没有显著差异。结论:抑制Bmi-1的表达并不能减少K562细胞的增殖,这提示了可能存在其它一些平行的信号通路在细胞转化中起重要作用,而且可能独立于Bmi-1的过表达。Bmi-1在慢性髓系白血病的转化中起着次要的作用。

关键词： Bmi-1 短发夹RNA k562细胞系细胞增殖细胞周期

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儿童急性淋巴细胞白血病患者中期因子表达与药物外排的关系

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中国实验血液学杂志 2009年第6期17卷 1502-1506页

作者：胡蓉华芦颖李庆华马丽李彬竺晓凡王建祥庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究检测中期因子(midkine,MK)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达,探讨MK与白血病细胞化疗药物外排的关系。采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测153例儿童ALL患者骨髓及20例正常儿童外周血的标本中MK mRNA的表达,同时用激光扫... 详细信息

本研究检测中期因子(midkine,MK)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达,探讨MK与白血病细胞化疗药物外排的关系。采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测153例儿童ALL患者骨髓及20例正常儿童外周血的标本中MK mRNA的表达,同时用激光扫描共聚焦显微镜观察30例进展期B-ALL患者和正常儿童的单个核细胞对罗丹明123(Rhodamine 123,Rhl23)的外排作用,应用流式细胞术测定细胞内平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)观察药物累积。结果表明:正常对照、完全缓解期及进展期B-ALL患者的单个核细胞MK mRNA表达水平依次增高,分别为0.795(0.697-1.570),3.012(0.932-5.076),12.909(2.385-26.347),差异具有统计学意义(p<0.01)。进展期B-ALL细胞中MK mRNA表达水平较进展期T-ALL增高,差异具有统计学意义(p<0.01)。在罗丹明123的外排实验中发现,进展期淋巴白血病细胞中MFI较正常对照明显减低,差异具有统计学意义(p<0.01),进展期淋巴白血病细胞药物累积与患者MK mRNA水平呈明显的负相关(r=-0.869,p<0.001)。结论:高表达MK的淋巴白血病细胞药物外排能力较强,中期因子可能影响血液肿瘤的化疗耐受。

关键词：急性淋巴细胞白血病中期因子药物外排多药耐药

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不同来源人Vα24＋NKT细胞体外扩增及细胞因子分泌

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中国实验血液学杂志 2009年第3期17卷 633-636页

作者：翟卫华黄勇王玫周征翟文静张荣莉张平韩明哲中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

为了研究人脐血(CB)、外周血(PB)及G-CSF动员后外周血采集物单个核细胞(G-PBMNC)中Vα24+NKT细胞的表型及体外扩增、细胞因子分泌情况,分别取来自CB和PB的单个核细胞(MNC)以及G-PBMNC,在含α-半乳糖酰基鞘胺醇(α-GalCer)及细胞因子IL-2... 详细信息

为了研究人脐血(CB)、外周血(PB)及G-CSF动员后外周血采集物单个核细胞(G-PBMNC)中Vα24+NKT细胞的表型及体外扩增、细胞因子分泌情况,分别取来自CB和PB的单个核细胞(MNC)以及G-PBMNC,在含α-半乳糖酰基鞘胺醇(α-GalCer)及细胞因子IL-2、IL-15的体系中,体外扩增培养Vα24+NKT细胞;采用间标磁珠分选纯化NKT细胞;流式细胞术(FCM)检测NKT细胞表型、NKT细胞含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞因子IL-4、IFN-γ浓度。结果表明:由CB或PB或G-PBMNC诱导扩增Vα24+NKT细胞可分别扩增221.5倍、456.5倍、756.38倍。CB或PB来源的Vα24+NKT细胞经PMA刺激后,24小时生成IL-4、IFN-γ浓度和IL-4/IFN-γ比率分别为180.33vs190.67ng/ml、864.33vs508.49ng/ml、0.503vs0.455。由G-PBMNC诱导扩增Vα24+NKT细胞,培养9天及12天时生成IL-4、IFN-γ浓度及IL-4/IFN-γ比率分别为139.08vs89.3ng/ml、14264.8vs14488ng/ml、0.0531vs0.0376。结论:不同来源MNC在α-GalCer、IL-2、IL-15诱导下可以短期有效扩增Vα24+NKT细胞,G-PBMNC诱导扩增的效果优于CB和PB。NKT细胞活化后可以分泌大量IL-4及IFN-γ,但以IFN-γ为主。

关键词： Vα24+NKT细胞细胞扩增细胞因子

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FLT3抑制剂在急性髓细胞白血病中的研究进展

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白血病．淋巴瘤 2009年第2期18卷 120-123页

作者：刘家卓(综述) 王建祥(审校) 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

FLT3是一种受体酪氨酸激酶（RTK），是急性髓细胞白血病（AML）中最常见的突变基因之一，有内部重复串联序列和激活环点突变两种形式，FLT3基因突变与AML的发病密切相关，作为一项独立指标，在疾病的发生中具有重要的意义，并且是AML的... 详细信息

FLT3是一种受体酪氨酸激酶（RTK），是急性髓细胞白血病（AML）中最常见的突变基因之一，有内部重复串联序列和激活环点突变两种形式，FLT3基因突变与AML的发病密切相关，作为一项独立指标，在疾病的发生中具有重要的意义，并且是AML的独立预后因素。以FLT3为靶点的研究已成为当今AML治疗的热点。文章阐述了FLT3的临床意义、FLT3抑制剂的作用机制以及数种新型药物的最新研究进展，并针对目前FLT3抑制剂存在的困难及前景进行了讨论。

关键词：受体蛋白质酪氨酸激酶类突变抑制素类白血病,髓细胞,急性

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重新编程与白血病干／祖细胞的起源与演化

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中国实验血液学杂志 2009年第5期17卷 1123-1126页

作者：吴克复马小彤中国医学科学院、北京协和医学院、血液学研究所血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

由体细胞建立诱导性多潜能干细胞系(iPS)的成功证明重新编程在干细胞生成中的重要作用,引发对白血病干/祖细胞起源的思考。白血病干/祖细胞的起源和演化是白血病发生发展的核心。白血病有两类不同类型,真正的白血病(bona fide leukemia... 详细信息

由体细胞建立诱导性多潜能干细胞系(iPS)的成功证明重新编程在干细胞生成中的重要作用,引发对白血病干/祖细胞起源的思考。白血病干/祖细胞的起源和演化是白血病发生发展的核心。白血病有两类不同类型,真正的白血病(bona fide leukemia)和非真正的白血病(non-bona fide leukemia),不同类型的白血病有不同起源的白血病干/祖细胞,近年来的研究进展表明它们受起源细胞的重新编程状态影响。

关键词：重新编程肿瘤干细胞白血病干细胞祖细胞

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序列特异性短发夹状RNA逆转白血病多药耐药性研究

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中国实验血液学杂志 2009年第3期17卷 563-567页

作者：杜伟廷刘斌顾东生韩之波刘鹏霞徐洁梁璐赵海丰卢士红杨仁池中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究旨在构建并筛选MDR1序列特异性短发夹状RNA干扰载体,研究其对K562/A02细胞的影响。采用脂质体介导方法,将含mdr1-sh RNA质粒转入K562/A02细胞,经G418筛选得到稳定表达细胞株,用实时定量RT-PCR和Western blot分别检测干扰后mdr1 m... 详细信息

本研究旨在构建并筛选MDR1序列特异性短发夹状RNA干扰载体,研究其对K562/A02细胞的影响。采用脂质体介导方法,将含mdr1-sh RNA质粒转入K562/A02细胞,经G418筛选得到稳定表达细胞株,用实时定量RT-PCR和Western blot分别检测干扰后mdr1 mRNA水平及蛋白水平的表达变化,通过CCK8测定干扰后细胞对化疗药的敏感性变化,Rhodamine123外排实验检测P-gp功能的变化。结果发现:与对照组相比,4种MDR1-sh RNA载体均能显著下调P-gp的表达,其中508-526靶位点的shRNA作用效果最好。结论:筛选得到的MDR1-sh RNA载体能够显著下调MDR1的表达,逆转耐药表型,为后续进行的动物实验研究创立了条件。

关键词： RNA干扰白血病多药耐药 shRNA

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胎肺间充质干细胞对脐血来源的单个核细胞体外扩增为巨核细胞的影响

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中国实验血液学杂志 2009年第5期17卷 1312-1315页

作者：张晓光杨少光任红英赵钦军韩忠朝中国医学科学院北京协和医学院、血液病医院、血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探讨胎儿肺部组织来源的间充质干细胞在无血清条件下体外对脐血单个核细胞诱导扩增为巨核细胞的影响。取脐血单个核细胞,在TPO,IL-l1,肝素的扩增体系中分为2组培养。第1组为脐血单个核细胞单独培养,第2组脐血单个核细胞与间充质... 详细信息

本研究探讨胎儿肺部组织来源的间充质干细胞在无血清条件下体外对脐血单个核细胞诱导扩增为巨核细胞的影响。取脐血单个核细胞,在TPO,IL-l1,肝素的扩增体系中分为2组培养。第1组为脐血单个核细胞单独培养,第2组脐血单个核细胞与间充质干细胞共培养,在第7,10,14天时进行活细胞计数,用流式细胞仪分析CD41a和CD61的表达情况。采用免疫组织化学和透射电子显微镜观察第14天细胞的形态与结构,用流式细胞仪分析细胞DNA含量。结果表明,第2组在第10天时获得的CD41+细胞和CD61+细胞数量最多,分别为第1组的4.5倍和4.7倍;但免疫组织化学和电子显微镜显示,2个组的CD41a+和CD61+细胞的核发育不成熟。结论:胎肺间充质干细胞能有效刺激CD41a+和CD61+细胞生成,但不能促进幼巨核细胞核的发育。

关键词：胎肺间充质干细胞脐血单个核细胞巨核细胞

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