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中华医学会第14次全国血液学学术会议

作者：李羿崔蕊秦铁军徐泽锋张悦蔡文宇崔雯刘晋琴李冰肖志坚中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市第一中心医院血液科中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

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TBLR1-RARα融合基因对K562细胞向红系分化的影响

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中国实验血液学杂志 2015年第6期23卷 1702-1708页

作者：陈晶李欢安娜李寿芸卢文婷邢海燕饶青王敏王建祥中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验学血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨融合基因TBLR1-RARα的表达对于白血病细胞系K562细胞向红系分化的作用及其可能的机制。方法:应用Tet-Off系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控TBLR1-RARα的条件性表达。将TBLR1-RARα融合基因与慢病毒目的载体p LVX-Tight... 详细信息

目的:探讨融合基因TBLR1-RARα的表达对于白血病细胞系K562细胞向红系分化的作用及其可能的机制。方法:应用Tet-Off系统,通过强力霉素(doxycycline,Dox)调控TBLR1-RARα的条件性表达。将TBLR1-RARα融合基因与慢病毒目的载体p LVX-Tight-Puro连接,感染K562细胞并获得稳定克隆,Western blot证实TBLR1-RARα融合蛋白的表达情况。应用实时定量荧光PCR检测全反式维甲酸(all-trans retinoid acid,ATRA)处理的K562细胞红系分化的表面标志CD71以及α,ε,γ-珠蛋白的基因表达水平;流式细胞术(flow cytometry)分析细胞表面CD71和CD235a的表达情况,联苯胺染色观察血红蛋白的生成情况。结果:实时定量PCR显示,ATRA能够使这些细胞的红系分化相关的CD71及α,ε,γ-珠蛋白的基因表达水平上调;流式分析结果同样表明,ATRA促使红系分化早期标志CD71细胞所占比例增加。ATRA处理后,联苯胺染色证实这些细胞的胞浆出现蓝染,表明ATRA能够诱导表达TBLR1-RARα的K562细胞产生血红蛋白。结论:TBLR1-RARα融合基因表达,有利于ATRA诱导K562细胞向红系分化。

关键词： TBLR1-RARα融合基因 K562 全反式维甲酸红系分化

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免疫缺陷小鼠和人源化小鼠模型的发展及其在血液学研究中的应用

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中华血液学杂志 2015年第11期36卷 966-971页

作者：郑亚伟郝莎胡林萍程涛中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院天津300020 中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

随着生命科学的发展，动物模型在科学研究中发挥着越来越重要的作用。由于缺乏理想的实验动物，一些模拟人类生理及病理状态的体内实验研究始终受到一定程度的限制。造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）的研究在再生医学研究中... 详细信息

随着生命科学的发展，动物模型在科学研究中发挥着越来越重要的作用。由于缺乏理想的实验动物，一些模拟人类生理及病理状态的体内实验研究始终受到一定程度的限制。造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）的研究在再生医学研究中占据重要地位，造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation，HSCT）是目前应用最广泛的再生医学治疗手段。对HSC的研究需要进行体内移植实验检测其生物学行为。相对于体外实验，免疫缺陷小鼠移植模型能够更准确地反映原始造血细胞在体内造血微环境中的再生能力。人源化小鼠是移植了人类组织细胞或通过转基因的方法使其表达人源基因的免疫缺陷小鼠，也被称作小鼠一人嵌合体，是目前用来研究人类细胞或组织的一个独特的动物模型，在血液学领域的研究中发挥了重要作用。本文主要对免疫缺陷鼠和人源化小鼠模型的发展、建立及其在血液学研究中的应用进行综述。

关键词：免疫缺陷小鼠人源化小鼠小鼠模型血液学应用造血干细胞移植体内移植原始造血细胞

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PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂在白血病治疗中的研究进展

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中华血液学杂志 2015年第10期36卷 888-893页

作者：王乐初雅婧程涛袁卫平中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院天津300020 中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）信号通路参与多种细胞功能，包括转录、翻译、细胞周期、细胞分化和细胞凋亡等［1］。目前针对PI3K/AKT/mTOR信号通路的小分子抑制剂主要包括Pan-PI3K... 详细信息

磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）信号通路参与多种细胞功能，包括转录、翻译、细胞周期、细胞分化和细胞凋亡等［1］。目前针对PI3K/AKT/mTOR信号通路的小分子抑制剂主要包括Pan-PI3K抑制剂、选择性PI3K抑制剂、AKT抑制剂、雷帕霉素及其类似物、mTOR活性位点抑制剂以及双靶点抑制剂。针对mTOR靶点抑制剂的研究是最早、最多的，并取得了可喜的成效。随后，针对该通路上的AKT、PI3K及PDK1等靶点抑制剂相继出现，包括靶向特定蛋白激酶或多个激酶的抑制剂［2］。本文我们主要就PI3K/AKT/mTOR通路及其在白血病中常见的主要抑制剂的功能和研发进展进行综述。

关键词：小分子抑制剂信号通路白血病苏氨酸蛋白激酶雷帕霉素靶蛋白磷脂酰肌醇-3激酶治疗 PI3K

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血友病A基因治疗的研究进展

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中华血液学杂志 2015年第7期36卷 620-625页

作者：李晓兰张健萍张磊程涛张孝兵中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室天津300020

血友病（hemophilia）是凝血因子缺乏导致的一类遗传性出血性疾病,包括血友病A（HA）和血友病B（HB）.HA表现为凝血因子Ⅷ（FⅧ）缺乏,约占全部血友病的80％,是由位于Ⅹ染色体上的FⅧ（F8）基因突变导致FⅧ缺乏或功能缺陷而引起[1].HB... 详细信息

血友病（hemophilia）是凝血因子缺乏导致的一类遗传性出血性疾病,包括血友病A（HA）和血友病B（HB）.HA表现为凝血因子Ⅷ（FⅧ）缺乏,约占全部血友病的80％,是由位于Ⅹ染色体上的FⅧ（F8）基因突变导致FⅧ缺乏或功能缺陷而引起[1].HB表现为凝血因子Ⅸ（FⅨ）缺乏,约占全部血友病患者的20％,由位于Ⅹ染色体上的FⅨ（F9）基因突变引起.

关键词：血友病A 基因治疗遗传性出血性疾病凝血因子缺乏基因突变凝血因子Ⅷ 凝血因子Ⅸ 血友病患者

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多发性骨髓瘤伴单纯骨旁髓外病变临床分析——单中心连续性834例患者资料研究

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中华血液学杂志 2015年第6期36卷 501-506页

作者：邓书会徐燕安刚隋伟薇李增军邹德慧赵耀中齐军元邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者中单纯骨旁髓外病变（bEMD）的发生率、临床特征、预后意义,以及与严格的髓外病变（sEMD）的相关性.方法对1993年1月至2013年3月收治的834例连续性初诊MM患者的临床资料进行回顾性分析.结果 ①834患者... 详细信息

目的探讨多发性骨髓瘤（MM）患者中单纯骨旁髓外病变（bEMD）的发生率、临床特征、预后意义,以及与严格的髓外病变（sEMD）的相关性.方法对1993年1月至2013年3月收治的834例连续性初诊MM患者的临床资料进行回顾性分析.结果 ①834患者中初诊伴bEMD者32例（3.8％）,伴sEMD者40例（4.8％）.与伴sEMD者比较,伴bEMD者乳酸脱氢酶（LDH）水平显著降低（180.9 U/L对299.2 U/L,P=0.034）,治疗后的总体反应率（ORR）明显增高（95.7％对66.7％,P=0.009）;与无EMD者比较,其LDH水平和ORR差异均无统计学意义（P值均＞0.05）.②未接受自体造血干细胞移植（ASCT）的患者中,初诊时伴sEMD（39例）、bEMD（24例）及无EMD（671例）者的中位总体生存（OS）时间分别为14.0、37.5和38.0个月,中位疾病进展（TTP）时间分别为11.5、27.0和22.0个月,与伴sEMD者比较,后两组患者的OS、TTP时间均明显延长（P值均＜0.05）,但后两组间比较,差异均无统计学意义（P值均＞0.05）.③随访过程中,bEMD的发生率为0.5％,发生sEMD、bEMD和无EMD者的中位OS时间分别为26.0、17.0和40.0个月,中位TTP时间分别为13.0、11.0和25.0个月,发生bEMD与其他两组患者间差异均无统计学意义（P值均＞0.05）.结论伴bEMD的MM患者具有不同于伴sEMD者的临床特征,其预后明显好于后者,与无EMD者比较预后相近,提示单纯伴bEMD对MM患者预后无明显不良影响.

关键词：多发性骨髓瘤预后髓外病变

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造血干细胞与免疫系统的相互作用

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中华血液学杂志 2015年第12期36卷 1043-1048页

作者：郝莎王娅婕董芳程涛中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）是一群数量极少、具有自我更新能力和可生成各种血细胞及免疫细胞的起始细胞，多数以静息状态存在于骨髓中。当机体受到外界刺激时，HSC可被迅速激活进而增殖分化成下游成熟细胞来维持机体... 详细信息

造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）是一群数量极少、具有自我更新能力和可生成各种血细胞及免疫细胞的起始细胞，多数以静息状态存在于骨髓中。当机体受到外界刺激时，HSC可被迅速激活进而增殖分化成下游成熟细胞来维持机体的造血稳态，HSC的调节失控或病变将会引发多种血液性疾病。目前，造血干细胞移植（HSCT）被认为是根治某些恶性血液病及遗传性疾病的最佳选择。

关键词：造血干细胞移植相互作用免疫系统自我更新能力血液性疾病遗传性疾病恶性血液病 cell

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白血病染色体MLL基因断裂(易位)FISH探针的研究

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中国医药生物技术 2016年第6期11卷 497-501页

作者：孙江漫胡林萍李承文陆宏卿薛卫霞程涛缪为民中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液病理中心天津300020 南京福隆特医疗科技有限公司 211100

目的自主研制可以检测白血病染色体MLL基因断裂的双色FISH检测试剂盒。方法根据染色体基因图谱,选定合适的BAC克隆重叠群分别作为MLL基因断裂点5'端探针和3'端探针。采用缺口平移法,制作出5'端标记绿色荧光素,3'端标记... 详细信息

目的自主研制可以检测白血病染色体MLL基因断裂的双色FISH检测试剂盒。方法根据染色体基因图谱,选定合适的BAC克隆重叠群分别作为MLL基因断裂点5'端探针和3'端探针。采用缺口平移法,制作出5'端标记绿色荧光素,3'端标记红色荧光素的探针。用双盲法检测白血病临床样本40例,对自制探针和同类进口探针在各项技术参数上进行对比研究。结果自制探针检测MLL基因断裂(易位)的阴、阳性率与同类进口产品完全相符;在Spectrum Green和Cy3?v1通道中,自制探针的平均荧光信号强度比进口探针明显提高(自制探针分别为:2930.5±38.00,2766±59.54;进口探针分别为:2239±45.13,1986±59.56;P<0.01),自制探针信噪比分别为进口探针的2.4倍和1.9倍。结论自制的MLL基因FISH检测探针设计合理、质量可靠,与进口探针相比,荧光信号更强,信噪比更高,将来可能替代价格昂贵的进口产品。

关键词：白血病髓淋巴细胞性白血病蛋白质易位,遗传原位杂交,荧光 FISH探针

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木香烃内酯对K562/A02细胞阿霉素耐药的逆转作用研究

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现代药物与临床 2016年第6期31卷 742-746页

作者：辛玥丁亚辉纪庆杨铭李迎辉高瀛岱天津医科大学总医院儿科天津300052 中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探索木香烃内酯对白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素耐药的逆转作用。方法将木香烃内酯与K562/A02细胞共培养72 h后,采用MTT法检测木香烃内酯对细胞生长的抑制作用。不同浓度木香烃内酯处理K562/A02细胞24 h后,采用Annexin V和PI双染... 详细信息

目的探索木香烃内酯对白血病耐药细胞系K562/A02阿霉素耐药的逆转作用。方法将木香烃内酯与K562/A02细胞共培养72 h后,采用MTT法检测木香烃内酯对细胞生长的抑制作用。不同浓度木香烃内酯处理K562/A02细胞24 h后,采用Annexin V和PI双染法检测木香烃内酯对细胞的凋亡。不同浓度木香烃内酯与阿霉素共培养72 h后采用MTT法检测木香烃内酯对K562/A02细胞的耐药逆转情况。采用流式细胞仪检测木香烃内酯处理24 h之后K562/A02细胞阿霉素蓄积以及细胞膜表面P-糖蛋白（P-gp）的表达。结果木香烃内酯对K562/A02细胞的生长具有明显抑制作用,呈显著的剂量相关性。与对照组比较,2.5～50μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞存活率显著降低（P〈0.05、0.01、0.001）。随着木香烃内酯浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加。与对照组比较,不同浓度木香烃内酯组细胞凋亡比例显著升高（P〈0.05、0.01、0.001）。加入5μmol/L木香烃内酯后,使K562/A02细胞对阿霉素的敏感性提高12倍。木香烃内酯处理后K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积明显增加,呈浓度相关性。与对照组比较,5、10μmol/L木香烃内酯组K562/A02细胞内部阿霉素的蓄积增加显著升高（P〈0.05）。细胞表面的P-gp的表达并无显著影响。结论木香烃内酯能够抑制K562/A02细胞增殖,诱导K562/A02细胞凋亡,增强阿霉素的化疗敏感性,逆转阿霉素耐药。

关键词：木香烃内酯 K562/A02细胞阿霉素耐药细胞凋亡 P-糖蛋白

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建立非基因整合原发性骨髓纤维化诱导性多能干细胞株

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中国实验血液学杂志 2015年第5期23卷 1415-1421页

作者：许静盛梦瑶周圆邢文白洁温伟纪光臻张鸿雁金晖吕翠翠袁卫平张孝兵程涛中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:利用诱导多能性干细胞(iPSC)技术建立原发性骨髓纤维化(PMF)诱导多能性干细胞系,为研究血液病的发生发展提供一个实验模型。方法:采用非基因整合型质粒重编程携带JAK2V617F突变的PMF患者骨髓来源的单个核细胞,诱导生成该患者特异的... 详细信息

目的:利用诱导多能性干细胞(iPSC)技术建立原发性骨髓纤维化(PMF)诱导多能性干细胞系,为研究血液病的发生发展提供一个实验模型。方法:采用非基因整合型质粒重编程携带JAK2V617F突变的PMF患者骨髓来源的单个核细胞,诱导生成该患者特异的iPS细胞株。结果:采用此方法建立的iPS细胞株,在体外能够稳定传代,无外源性基因整合,多能性基因表达水平与人胚胎干细胞类似,在体内具有形成三胚层结构的能力。测序结果显示,所建立的患者的iPS细胞株携带不同负荷的JAK2V617F突变。结论:成功地建立非基因整合的PMF患者特异的iPS细胞株,这为研究PMF的发病机制、化疗药物筛选及实现精准化治疗提供了一个重要的疾病模型。

关键词：诱导多能性干细胞原发性骨髓纤维化非整合 Episomal载体

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