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生物技术通讯 2015年第4期26卷 449-453页

作者：俞珺瑶李晓兰张健萍程涛张孝兵中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:为进一步提高CRISPR/Cas9系统的打靶效率,比较共质粒或双质粒表达Cas9内切酶和小向导RNA(sg RNA)的不同载体设计对其打靶效率的影响。方法:将针对AAVS1位点的2个sg RNA序列分别插入表达Cas9的质粒p Sp Cas9上,再将其构建为Cas9-sg ... 详细信息

目的:为进一步提高CRISPR/Cas9系统的打靶效率,比较共质粒或双质粒表达Cas9内切酶和小向导RNA(sg RNA)的不同载体设计对其打靶效率的影响。方法:将针对AAVS1位点的2个sg RNA序列分别插入表达Cas9的质粒p Sp Cas9上,再将其构建为Cas9-sg RNA二合一的共质粒以及独立表达sg RNA和Cas9的双质粒系统;质粒转染293T细胞后,用T7E1酶切方法检测打靶效率。结果:不经过变性退火的PCR片段也能直接进行T7E1酶切;Cas9-sg RNA共质粒系统的打靶效率显著高于双质粒系统。结论:T7E1酶切方法可去除变性退火步骤,简化了传统的检测方法。采用Cas9-sg RNA共表达的载体设计可显著提高打靶效率。

关键词： CRISPR/Cas9 AAVS1位点 T7E1酶切方法打靶效率

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双特异性抗体在血液肿瘤治疗中的研究进展

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国际输血及血液学杂志 2015年第1期38卷 81-84页

作者：万玉玲王建祥中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

免疫治疗作为一种新的肿瘤治疗方法,其基础和临床研究已有大量文献报道.双特异性抗体（BsAb）作为含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,可诱导效应细胞靶向杀伤肿瘤细胞,具有良好的临床应用前景,如抗CD3/抗CD19 BsAb和抗CD33/抗CD3 BsA... 详细信息

免疫治疗作为一种新的肿瘤治疗方法,其基础和临床研究已有大量文献报道.双特异性抗体（BsAb）作为含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,可诱导效应细胞靶向杀伤肿瘤细胞,具有良好的临床应用前景,如抗CD3/抗CD19 BsAb和抗CD33/抗CD3 BsAb等,目前已成为免疫治疗血液肿瘤的研究热点之一.笔者拟就基础及临床试验2个方面介绍BsAb在血液肿瘤治疗中的研究进展,旨在进一步探讨BsAb在血液肿瘤的应用潜能.

关键词：抗体,双特异性血液肿瘤免疫疗法

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靶向肿瘤坏死因子β小分子抑制剂的筛选及其功能鉴定

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天津医药 2015年第9期43卷 961-964,I0001页

作者：孙亚薇公海艳曹善楠刘鹏朱海燕耿广锋许元富中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室300020

目的通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选,获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法根据TNFβ与肿瘤坏死因子Ⅰ型受体（TNFR1）结合的复合晶体结构,采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个... 详细信息

目的通过计算机虚拟筛选和细胞活性筛选,获得能靶向抑制肿瘤坏死因子β（TNFβ）的细胞毒活性的小分子抑制剂。方法根据TNFβ与肿瘤坏死因子Ⅰ型受体（TNFR1）结合的复合晶体结构,采用计算机虚拟筛选方法初步选择对接结果较好的105个小分子化合物（C1~C105）,并对其进行细胞活性筛选;MTT法检测小分子化合物抑制TNFβ对L929细胞的细胞毒性;流式细胞术测定小分子化合物对TNFβ引起的细胞凋亡的抑制作用;采用碘化丙啶（PI）单染和流式分析技术检测小分子化合物对L929细胞周期的影响;采用Western blot和双转盘激光共聚焦显微镜分析小分子化合物对TNFβ引起的下游Caspase 3活化的抑制作用。结果 C35能有效抑制TNFβ引起的细胞毒作用,且这种抑制作用呈现剂量依赖性（半数抑制浓度=8.19μmol/L）;C35具有较低的细胞毒性,且对L929细胞周期无影响;C35能阻断TNFβ与其受体结合后引起的细胞凋亡通路,显著抑制TNFβ引起的L929细胞凋亡。结论成功筛选到一个TNFβ小分子抑制剂C35,其能阻断TNFβ引起的细胞凋亡通路,高效抑制TNFβ的细胞毒活性。

关键词：淋巴毒素α 受体,肿瘤坏死因子,Ⅰ型细胞凋亡细胞周期肿瘤坏死因子β 小分子抑制剂信号通路

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骨髓增殖性肿瘤:从JAK2V617F突变到JAK抑制剂

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临床血液学杂志 2015年第6期28卷 923-925页

作者：肖志坚中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

2005年在BCR—ABL（-）骨髓增殖性肿瘤（MPN）中发现JAK2V617F突变，使其从过去的近半个世纪几乎是一个被血液学界遗忘的角落重新回归研究视野。2011年11月FDA批准第1个JAK抑制剂芦可替尼（ruxolitinib）用于IPSS中危-2和高危组原发性... 详细信息

2005年在BCR—ABL（-）骨髓增殖性肿瘤（MPN）中发现JAK2V617F突变，使其从过去的近半个世纪几乎是一个被血液学界遗忘的角落重新回归研究视野。2011年11月FDA批准第1个JAK抑制剂芦可替尼（ruxolitinib）用于IPSS中危-2和高危组原发性骨髓纤维化（PMF）患者的治疗。

关键词：骨髓增殖性肿瘤 JAK2V617F突变 JAK抑制剂

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流式细胞术操作软件在小鼠造血干细胞检测中的应用比较

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医疗卫生装备 2015年第3期36卷 5-8页

作者：梁昊岳杨晚竹程雪莲王金宏中国医学科学院北京协和医学院血液病医院(血液学研究所) 实验血液学国家重点实验室天津300020

目的 :探讨流式细胞术中不同分析软件在小鼠造血干细胞分析中的特点和差异。方法 :使用小鼠骨髓细胞悬液作为实验材料,在BD Aria III和BD Influx流式细胞仪上检测小鼠造血干细胞,分别应用FACSDiva、FACSSortware软件对检测数据进行分析... 详细信息

目的 :探讨流式细胞术中不同分析软件在小鼠造血干细胞分析中的特点和差异。方法 :使用小鼠骨髓细胞悬液作为实验材料,在BD Aria III和BD Influx流式细胞仪上检测小鼠造血干细胞,分别应用FACSDiva、FACSSortware软件对检测数据进行分析,并比较分析结果。结果:FACSDiva和FACSSortware软件在参数调节、补偿调节、圈门、数据保存和分选设置方面存在细微差异,均可以实现多色流式分析和高速流式分选。结论:FACSDiva和FACSSortware软件分析同一样本所得结果有较高的一致性,均是使用流式细胞仪不可或缺的工具。

关键词：流式细胞术造血干细胞 FACSDiva软件 FACSSortware软件

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MPL在白血病干细胞中的表达及在维持白血病干细胞干性中的作用研究

MPL在白血病干细胞中的表达及在维持白血病干细胞干性中的作用研究

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第十五届全国实验血液学学术会议

作者：李欢于沛邢海燕田征唐克晶王敏王建祥饶青中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的成骨细胞作为微环境中的重要成员，其分泌的THPO与造血干细胞上的MPL相互作用调节造血干细胞静息及自我更新，在白血病微环境中，二者的表达及作用尚未阐明。本研究通过证明MPL在白血病干细胞的表达以及MPL+/-的不同亚群白血病细... 详细信息

目的成骨细胞作为微环境中的重要成员，其分泌的THPO与造血干细胞上的MPL相互作用调节造血干细胞静息及自我更新，在白血病微环境中，二者的表达及作用尚未阐明。本研究通过证明MPL在白血病干细胞的表达以及MPL+/-的不同亚群白血病细胞的干性特征，最终阐明THPO-MPL介导的成骨细胞龛在维持白血病干细胞静息、自我更新、抵抗化疗等干性中的作用。

关键词：白血病干细胞微环境静息 MPL

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抗人CD19嵌合抗原受体r细胞的构建及其抗白血病功能研究

抗人CD19嵌合抗原受体r细胞的构建及其抗白血病功能研究

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第十五届全国实验血液学学术会议

作者：安娜陶中飞邢海燕饶青王敏王建祥中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的利用本实验室的抗人CD19单链抗体构建一种新的抗人CD19嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)慢病毒表达载体,并对该CD19-CAR修饰的T细胞进行体内外功能研究.方法利用分子克隆技术,将CD19-CAR克隆到慢病毒表达载体中,构...

目的利用本实验室的抗人CD19单链抗体构建一种新的抗人CD19嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor, CAR)慢病毒表达载体,并对该CD19-CAR修饰的T细胞进行体内外功能研究.方法利用分子克隆技术,将CD19-CAR克隆到慢病毒表达载体中,构成抗人CD19-CAR表达质粒.包装病毒,感染人CD3阳性的T细胞,利用流式细胞术鉴定T细胞表面CAR蛋白的表达.在体外将CAR-T细胞与CD19阳性的白血病细胞系Nalm-6靶细胞共培养,通过流式细胞术检测靶细胞残留、ELISA检测共培养上清中细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α以及CytoTox 96(R)非放射性细胞毒性法检测杀伤活性.并应用Nalm-6细胞系构建NOD/SCID小鼠的急性淋巴细胞白血病模型,尾静脉输注CAR-T细胞进行治疗,观察疗效.

关键词：

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急性粒细胞白血病MSC体外诱导骨髓单个核细胞药物耐受性

急性粒细胞白血病MSC体外诱导骨髓单个核细胞药物耐受性

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中国病理生理学会第十届全国代表大会

作者：许华陈龙李元叶王齐李庆华庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室北京100032

目的:研究急性粒细胞白血病(AML)患者的间充质干细胞(MSC)对骨髓单个核细胞增殖及耐药性的影响.方法:分离AML 患者及对照MSC 与骨髓单个核细胞共培养,阿糖胞苷药物处理,检测骨髓单个核细胞的增殖活性;流式细胞术检测骨髓单个核细胞凋亡...

目的:研究急性粒细胞白血病(AML)患者的间充质干细胞(MSC)对骨髓单个核细胞增殖及耐药性的影响.方法:分离AML 患者及对照MSC 与骨髓单个核细胞共培养,阿糖胞苷药物处理,检测骨髓单个核细胞的增殖活性;流式细胞术检测骨髓单个核细胞凋亡;超速离心提取MSC 的外泌体(exosome),电镜及Western blot 检测外泌体;还将外泌体与患者骨髓单个核细胞共培养,检测其对骨髓单个核细的增殖和凋亡的影响.结果:与AML 患者的MSC 及其外泌体共培养的骨髓单个核细胞,被药物诱导凋亡细胞的数量减少,细胞存活率增高.结论:AML 来源MSC 对正常骨髓单个核细胞和病人的骨髓单个核细胞有一定的药物耐受性诱导作用,外泌体可能作为载体在此过程中运输某些信号传递分子.

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沉默SIRT2基因抑制AML耐药HL60A细胞株的增殖

沉默SIRT2基因抑制AML耐药HL60A细胞株的增殖

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中国病理生理学会第十届全国代表大会

作者：许华王齐李元叶李庆华庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室北京100032

目的:探讨靶向干扰SIRT2 基因表达对急性粒细胞白血病(AML)多药耐药细胞株HL60A 细胞增殖的影响.方法:针对SIRT2 基因构建shRNA 真核表达载体,制备慢病毒并感染HL60A 细胞.沉默SIRT2 基因之后,改良MTT 法检测对HL60A 细胞活力的影响;甲...

目的:探讨靶向干扰SIRT2 基因表达对急性粒细胞白血病(AML)多药耐药细胞株HL60A 细胞增殖的影响.方法:针对SIRT2 基因构建shRNA 真核表达载体,制备慢病毒并感染HL60A 细胞.沉默SIRT2 基因之后,改良MTT 法检测对HL60A 细胞活力的影响;甲基纤维素集落形成实验观察对HL60A 细胞集落形成能力的影响;采用流式细胞术检测分析对HL60A 细胞的细胞周期的影响.结果:干扰组SIRT2 基因的表达量被有效抑制;干扰SIRT2 基因表达量后,HL60A 细胞的细胞活力明显下降,集落形成数量减少及集落的形状减小,细胞被明显阻滞于G1/S 期.结论:shRNA 靶向干扰SIRT2 基因的表达可有效抑制急性粒细胞白血病耐药细胞系HL60A 细胞的增殖.

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沉默Sam68基因抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖

沉默Sam68基因抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖

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中国病理生理学会第十届全国代表大会

作者：王齐王迟鹃李元叶许华李庆华庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室北京100032

目的:探讨Sam68 对急性淋巴细胞白血病Jurkat 细胞增殖的影响.方法:针对Sam68 mRNA 的第531～552 靶位点,构建pLKO-Tet-On 载体,制备慢病毒并感染、筛选Jurkat 细胞,诱导干扰载体表达;采用real-time PCR 和Western blot 技术验证干扰效...

目的:探讨Sam68 对急性淋巴细胞白血病Jurkat 细胞增殖的影响.方法:针对Sam68 mRNA 的第531～552 靶位点,构建pLKO-Tet-On 载体,制备慢病毒并感染、筛选Jurkat 细胞,诱导干扰载体表达;采用real-time PCR 和Western blot 技术验证干扰效率;用体外细胞集落形成实验观察干扰Sam68 基因表达后对细胞集落形成能力的影响;用流式细胞术检测分析Jurkat 细胞细胞周期的变化.结果:Sam68 基因表达下调能抑制了细胞的增殖和集落形成能力,导致S 期细胞比例显著增加,G2 期细胞比例显著降低,G1 期细胞比例无明显差异.结论:shRNA 靶向干扰Sam68 基因的表达能有效抑制急性淋巴细胞白血病细胞系Jurkat 细胞的增殖.

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