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中国病理生理杂志 2015年第10期 1914-1914页

作者：许华陈龙李元叶王齐李庆华庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的:研究急性粒细胞白血病(AML)患者的间充质干细胞(MSC)对骨髓单个核细胞增殖及耐药性的影响。方法:分离AML患者及对照MSC与骨髓单个核细胞共培养,阿糖胞苷药物处理,检测骨髓单个核细胞的增殖活性;流式细胞术检测骨髓单个核细胞凋亡;... 详细信息

目的:研究急性粒细胞白血病(AML)患者的间充质干细胞(MSC)对骨髓单个核细胞增殖及耐药性的影响。方法:分离AML患者及对照MSC与骨髓单个核细胞共培养,阿糖胞苷药物处理,检测骨髓单个核细胞的增殖活性;流式细胞术检测骨髓单个核细胞凋亡;超速离心提取MSC的外泌体(exosome),电镜及Western blot检测外泌体;还将外泌体与患者骨髓单个核细胞共培养,检测其对骨髓单个核细的增殖和凋亡的影响。结果:与AML患者的MSC及其外泌体共培养的骨髓单个核细胞,被

关键词：药物耐受性外泌体骨髓造血系统粒细胞白血病粒细胞性白血病单个核细胞 MSC

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NHE1对急性粒细胞白血病MSC生物学功能的影响及机制探究

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中国病理生理杂志 2015年第10期 1914-1914页

作者：许华陈龙李元叶王齐李庆华庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的:探究急性粒细胞白血病(AML)患者的间充质干细胞(MSC)病理生理变化和钠氢交换蛋白(NHE1)的影响及机制。方法:检测AML来源MSC中NHE1的表达量;检测在有无NHE1抑制剂情况下AML来源MSC的成脂成骨分化能力,MTT检测体外增殖能力,流式细胞... 详细信息

目的:探究急性粒细胞白血病(AML)患者的间充质干细胞(MSC)病理生理变化和钠氢交换蛋白(NHE1)的影响及机制。方法:检测AML来源MSC中NHE1的表达量;检测在有无NHE1抑制剂情况下AML来源MSC的成脂成骨分化能力,MTT检测体外增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell检测其迁移能力;Western blot检测NHE1、JAK、AKT等相关蛋白的表

关键词：粒细胞白血病 AML 粒细胞性白血病 NHE1 MSC

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真性红细胞增多症患者骨髓间充质干细胞体外造血支持功能研究

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中国医药导报 2015年第36期12卷 9-12,F0003页

作者：孙仪段永娟李芳吕军强白洁刘汉芝胡晓中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 山东大学附属济南市中心医院医学实验诊断中心山东济南250013

目的研究真性红细胞增多症(PV)患者骨髓间充质干细胞(BMSC)的造血支持功能。方法从PV初诊患者和健康志愿者骨髓单个核细胞中分离培养BMSC;光学显微镜观察细胞形态;流式细胞术鉴定细胞免疫表型;诱导成骨及成脂分化鉴定细胞多向分化能力;... 详细信息

目的研究真性红细胞增多症(PV)患者骨髓间充质干细胞(BMSC)的造血支持功能。方法从PV初诊患者和健康志愿者骨髓单个核细胞中分离培养BMSC;光学显微镜观察细胞形态;流式细胞术鉴定细胞免疫表型;诱导成骨及成脂分化鉴定细胞多向分化能力;与人脐带血CD34+造血干祖细胞(HSPC)共培养检测真性红细胞增多症患者来源的骨髓间充质干细胞(PV-BMSC)的体外造血支持功能。结果 PV-BMSC的细胞形态、免疫表型与正常人来源的骨髓间充质干细胞(NM-BMSC)相比无明显差异;油红O及Von Kossa染色表明PV-BMSC具有成脂和成骨分化能力;实验共分离得9株PV-BMSC,其中55%的PV-BMSC既能支持总细胞增殖,又能支持CD34+HSPC扩增(≥1.5倍,n=5),22%的仅支持总细胞增殖(≥1.5倍,n=2),其余的既不支持总细胞增殖也不支持CD34+HSPC扩增(≤1.0倍,n=2)。结论 PV-BMSC支持CD34+HSPC增殖存在明显的个体差异。

关键词：真性红细胞增多症骨髓间充质干细胞造血支持功能造血干祖细胞

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造血系统常用Cre转基因小鼠及其应用

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中国实验血液学杂志 2014年第5期22卷 1442-1447页

作者：彭路芸程涛袁卫平中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

Cre-lox重组系统包括Cre重组酶和lox位点两个要素。Cre酶能够特异地识别并催化lox位点间的片段进行重组,lox位点的方向和位置则决定Cre酶的功能效应。小鼠造血系统由多系各个发育阶段的造血细胞组成。它们是由骨髓内的造血干细胞(Hemato... 详细信息

Cre-lox重组系统包括Cre重组酶和lox位点两个要素。Cre酶能够特异地识别并催化lox位点间的片段进行重组,lox位点的方向和位置则决定Cre酶的功能效应。小鼠造血系统由多系各个发育阶段的造血细胞组成。它们是由骨髓内的造血干细胞(Hematopoietic stem cell,HSC)分化发育而来,而造血细胞的增殖发育是在骨髓微环境中进行的。目前有利用Cre-lox重组系统建立的多种转基因小鼠运用于造血系统的研究中,本文将讨论常用于造血系统的Cre转基因小鼠以及它们在造血系统研究中的应用。

关键词：转基因小鼠 Cre-lox 造血系统

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604例低危原发性血小板增多症患者的临床特征及血栓危险因素分析

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中华血液学杂志 2014年第9期35卷 785-790页

作者：付荣凤宣旻张丽艳李慧媛孙甜甜张冬雷张岘吕翠翠薛峰刘晓帆张磊杨仁池中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的分析低危原发性血小板增多症（ET）患者的临床特征和血栓危险因素,探讨其治疗策略.方法对1982年3月至2012年5月诊断的604例低危ET患者的临床资料进行回顾性分析.结果全部604例患者中,男214例,女390例,中位发病年龄44（18～59）岁... 详细信息

目的分析低危原发性血小板增多症（ET）患者的临床特征和血栓危险因素,探讨其治疗策略.方法对1982年3月至2012年5月诊断的604例低危ET患者的临床资料进行回顾性分析.结果全部604例患者中,男214例,女390例,中位发病年龄44（18～59）岁.中位随访时间49（0～338）个月.43例（7.1％）患者发生严重血栓事件.COX风险模型表明总体缸栓事件的危险因素为JAK2V617F突变（HR=2.279,P=0.035）及心血管危险因素（CVF）（HR=2.541,P=0.006）,动脉血栓事件的危险因素为CVF（HR=2.633,P=0.008）.同时存在JAK2 V617F突变及CVF两种危险因素患者的无血栓生存率低于仅有JAK2 V617F突变（P=0.002）或CVF的患者（P=0.040）.抗血小板治疗降低了仅存在1种危险因素患者的血栓发生率（P=0.016）,而降低血小板治疗可减少JAK2 V617F突变和CVF两种危险因素并存患者的血栓事件发生（P=0.018）.结论 JAK2V617F突变和CVF是低危ET患者血栓事件的两大危险因素.低危ET患者应按照不同的危险因素选择合适的治疗措施.

关键词：血小板增多,原发性血栓形成危险因素治疗

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IL-18基因启动子区单核苷酸多态性在恶性血液病患者HLA匹配同胞供者异基因造血干细胞移植中的临床意义

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中华血液学杂志 2014年第3期35卷 215-220页

作者：蔡小矜宋阿霞王华张平张桂新杨帆魏嘉璘马巧玲阎嶂松姜尔烈黄勇杨栋林王玫何祎韩明哲冯四洲中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究IL-18基因启动子区单核苷酸多态性（SNP）对恶性血液病患者HLA匹配同胞供者异基因造血干细胞移植（***）造血重建、并发症及生存的影响。方法93例恶性血液病患者纳人研究。采用序列特异性引物聚合酶链反应（***）法检测供受者IL... 详细信息

目的研究IL-18基因启动子区单核苷酸多态性（SNP）对恶性血液病患者HLA匹配同胞供者异基因造血干细胞移植（***）造血重建、并发症及生存的影响。方法93例恶性血液病患者纳人研究。采用序列特异性引物聚合酶链反应（***）法检测供受者IL．18基因SNP．607C／A和．137G／C，分析供受者IL．18不同基因型对患者造血重建速度、移植物抗宿主病（GVHD）发生率、感染发生率、移植相关死亡（TRM）和无病生存（DFS）率的影响。结果供者．137G／G与G／C＋C／C组比较，allo-HSCT后患者中位粒细胞重建时间较短[15（11～23）d对17（11-24）d，P=0．010]，中位血小板重建时间差异无统计学意义[20（11-46）d对20（7～38）d，P=0．844]，广泛型慢性GvHD（cGvHD）发生率较高（20．6％对3．3％，P=0．029）；供者．607C／C组广泛型cGVHD发生率高于-607C／A＋A／A组（31．6％对10．8％，P=0．024）；受者．607C／C组广泛型cGVHD发生率高于．607C／A＋A／A组（33．3％对10．7％，P=0.016）。不同供受者IL-18基因型组间复发率、TRM、DFS率差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论选择IL-18．137G／G基因型供者有助于恶性血液病患者HLA匹配同胞供者allo—HSCT后粒细胞造血重建，但广泛型cGVHD发生率较高。

关键词：白细胞介素18 多态性单核苷酸造血干细胞移植移植物抗宿主病

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非基因整合建立人诱导多能性干细胞方法的优化研究

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中国实验血液学杂志 2014年第3期22卷 580-587页

作者：刘淑平李彦欣许静顾海慧张鸿雁梁昊岳刘汉芝张孝兵程涛袁卫平中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

诱导多能性干细胞(iPSC)技术具有临床应用前景,但iPSC的遗传稳定性和成瘤性阻碍了其可能的临床应用。非整合质粒(Episomal)方法无外源基因整合到宿主基因组上并且方法简单,适宜推广,是目前保证iPSC遗传安全性的最佳方案之一,但其诱导效... 详细信息

诱导多能性干细胞(iPSC)技术具有临床应用前景,但iPSC的遗传稳定性和成瘤性阻碍了其可能的临床应用。非整合质粒(Episomal)方法无外源基因整合到宿主基因组上并且方法简单,适宜推广,是目前保证iPSC遗传安全性的最佳方案之一,但其诱导效率偏低,严重阻碍了其应用。本研究旨在优化Episomal方法,将脐血单个核细胞(CB MNC)重编程为诱导多能性干细胞(iPSC),建立无基因整合的iPSC的高效生成技术体系,为以后建立疾病iPSC奠定基础。利用CB MNC,通过比较不同氧含量,诱导质粒,MNC培养方法和预刺激时间等条件对Episomal方法进行优化。结果表明:CB MNC采用红系培养液,培养8 d,使用启动子为SFFV(spleen focus forming virus)的Episomal载体,在低氧(3%)条件下诱导,CB MNC重编程效率最高,可达到0.12%。通过分析最佳条件下供体细胞成分发现,表型为CD36+CD71+CD235alow的有核红细胞是重编程最主要的供体细胞来源。结论:本研究成功建立并优化出一种可推广的高效安全的,可以用于临床应用研究的iPSC诱导技术。

关键词：诱导多能性干细胞脐血单个核细胞 Episomal载体非整合

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骨髓、脐带及脂肪来源间充质干细胞的成脂能力存在差异(英文)

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中国实验血液学杂志 2014年第3期22卷 588-594页

作者：池颖韩之波徐方运王有为冯晓明陈芳马凤霞杜文静韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的来源非常广泛。由于不同组织来源的影响,MSC之间都会存在一定的差异。本研究分析比较脐带、脂肪及骨髓组织来源的MSC的基本生物学特性。从脐带、脂肪和骨髓分离培养MSC,在显微镜下观察这3种... 详细信息

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的来源非常广泛。由于不同组织来源的影响,MSC之间都会存在一定的差异。本研究分析比较脐带、脂肪及骨髓组织来源的MSC的基本生物学特性。从脐带、脂肪和骨髓分离培养MSC,在显微镜下观察这3种来源的MSC的形态(UC-MSC,AD-MSC和BM-MSC),用流式细胞术诱导分化试验及定量荧光PCR分别检测UC-MSC,AD-MSC和BM-MSC的免疫表型、分化能力和过氧化物酶增殖激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)mRNA的表达水平。结果表明,UC-MSC、AD-MSC和BM-MSC的形态都是成纤维细胞样;经罗丹明和DAPI染色后,用共聚焦显微镜观察发现它们的细胞形态类似;这三种来源MSC的免疫表型符合MSC的鉴定标准,而且表达水平一致;这三种来源MSC的成骨分化潜能相似,而成脂分化潜能存在较明显的差异,其中AD-MSC成脂能力最强,BM-MSC次之,UC-MSC最差。检测脂肪形成早期起重要作用的过氧化物酶增殖激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA表达水平在三种来源MSC中的基础表达水平,发现PPAR-γmRNA在AD-MSC中最高,在BM-MSC次之,而在UC-MSC中最低,与成脂能力的表现相一致。这表明三种来源MSC成脂能力存在差异可能与它们PPAR-γ的基础表达水平有关。结论:UC-MSC,AD-MSC和BM-MSC的形态类似;免疫表型符合MSC鉴定标准,表达水平一致;成骨分化能力相似,而成脂分化能力不同;PPAR-γmRNA表达水平不一。关于差异的相关机制有待进一步研究。

关键词：骨髓间充质干细胞脐带间充质干细胞脂肪间充质干细胞成脂潜能 PPAR-γ

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CD48表达可作为区分造血干细胞分裂方式的活性标志

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中国实验血液学杂志 2014年第3期22卷 573-579页

作者：杨鑫张宇彭路芸庞雅坤董芳纪庆许静程涛袁卫平高瀛岱中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

造血干细胞在细胞分裂时具有维持自我更新和产生定向分化的能力,其依赖于三种细胞分裂方式,一个干细胞产生两个新的干细胞(对称的更新分裂)、两个分化细胞(对称的分化分裂)或者一个干细胞和一个分化细胞(不对称分裂)。本研究旨在探索一... 详细信息

造血干细胞在细胞分裂时具有维持自我更新和产生定向分化的能力,其依赖于三种细胞分裂方式,一个干细胞产生两个新的干细胞(对称的更新分裂)、两个分化细胞(对称的分化分裂)或者一个干细胞和一个分化细胞(不对称分裂)。本研究旨在探索一种高效、稳定的区分造血干细胞分裂方式的方法。前期研究表明,Numb蛋白的分布情况可以作为许多细胞辨别分裂方式的标志,本研究利用免疫荧光技术检测Numb蛋白在小鼠分裂期CD48-CD150+LSK细胞中的分布情况,探索Numb蛋白与中心体的关系。由于CD48表达阳性标志着细胞失去了骨髓重建能力,因此本研究把CD48的表达作为区分造血干细胞自我更新或定向分化的一个活性标志。从小鼠全骨髓细胞中分选出CD48-CD150+LSK细胞,培养体系中加入自行制备的AF 488-conjugated anti-CD48抗体,培养3 d后共聚焦荧光显微镜观察及流式细胞分析是否存在AF488+细胞及其所占比例,然后二次分选AF488+和AF488-细胞进行细胞集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)与细胞增殖能力比较。结果表明:Numb蛋白在处于分裂期的CD48-CD150+LSK细胞中对称或不对称分布在细胞分裂平面两侧,这提示Numb蛋白染色可以作为一种区分造血干细胞分裂方式的方法。此外,CD48-CD150+LSK细胞在含有自行制备的AF488-conjugated anti-CD48抗体的培养体系中培养3 d后产生约40%AF488+细胞,共聚焦荧光显微镜统计的阳性细胞比例与流式细胞分析检测结果一致。二次分选AF488+和AF488-细胞,AF488+细胞群的集落形成能力显著高于AF488-细胞群(P<0.05),AF488-细胞群的增殖能力显著高于AF488+细胞群(P<0.05)。结论:CD48表达作为细胞干性丢失的活性标志,可区分造血干细胞的分裂方式。该方法与Numb蛋白染色方法相比,具有用于活细胞的优势,它为后续的细胞培养与细胞移植等研究工作提供了更大的便利。

关键词：造血干细胞 CD48 细胞分裂

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重组人EPO治疗较低危骨髓增生异常综合征的临床疗效分析

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中华血液学杂志 2014年第1期35卷 18-23页

作者：张宏丽秦铁军徐泽锋方力维潘丽娟胡耐博曲士强张悦肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的初步探讨重组人EPO（rhEPO）±***治疗较低危（国际预后积分系统的低危和中危一1）骨髓增生异常综合征（MDS）患者的疗效及其影响因素。方法52例较低危原发MDS患者接受至少8周以上的rhEPO单独或联合rhG—CSF每日或隔日单次皮下... 详细信息

目的初步探讨重组人EPO（rhEPO）±***治疗较低危（国际预后积分系统的低危和中危一1）骨髓增生异常综合征（MDS）患者的疗效及其影响因素。方法52例较低危原发MDS患者接受至少8周以上的rhEPO单独或联合rhG—CSF每日或隔日单次皮下注射治疗，待红系达到最佳疗效且维持4周后rhEPO±***逐渐减量至停用或维持最佳疗效的最小剂量。回顾性分析患者的临床特征、疗效、生存情况及其影响因素。结果52例患者接受rhEPO±rhG—CSF治疗，中位治疗时间为8（2～45）个月。其中27例（51．9％）治疗有效（9例达完全缓解，18例出现红系反应），中位疗效持续时间为37（6-94）个月。10例患者复发，其中4例为疾病进展。中位随访时间为37（6～114）个月，中位生存时间为47（6～114）个月。多因素分析结果显示初诊时血清EPO（sEPO）水平〈500u／L（P=0．030）、红细胞爆式集落形成单位（BFU．E）计数≥25／10^5骨髓单个核细胞（BMMNc）（P=0．040）及接受中高剂量rhEPO±***治疗（P=-0．020）的患者治疗8周后MDS相关贫血容易获得改善；HGB水平（P=0．040）及染色体核型（P〈0．01）对疗效持续时间有显著影响；年龄〈60岁（P=-0．050）、染色体核型为预后良好或中等（P=0．03）和治疗有效（P=0．020）对患者生存时间有显著影响。结论中高剂量rhEPO±rhG—CSF能够有效改善较低危原发性MDS患者相关贫血症状，延长患者生存期。

关键词：骨髓增生异常综合征贫血治疗红细胞生成素

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