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干扰素α-2b治疗真性红细胞增多症及其继发骨髓纤维化患者分子生物学反应的研究

中国实验血液学杂志 2011年第2期19卷 444-449页

作者：白洁薛艳萍张磊李庆华范冬梅李彬徐世才李大鹏孙秀娟江波杨仁池中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院国家实验血液学重点实验室天津300020

本研究探讨干扰素-alpha-2b(IFN-α-2b)治疗真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)及PV后骨髓纤维化(post-PV MF)患者的有效性和安全性。对30例伴有JAK2V617F突变阳性的PV患者应用IFN-α-2b治疗,通过实时定量PCR的方法检测IFN-α-2b... 详细信息

本研究探讨干扰素-alpha-2b(IFN-α-2b)治疗真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)及PV后骨髓纤维化(post-PV MF)患者的有效性和安全性。对30例伴有JAK2V617F突变阳性的PV患者应用IFN-α-2b治疗,通过实时定量PCR的方法检测IFN-α-2b治疗前后JAK2V617F突变负荷的变化,并研究其与临床指标的相关性。结果表明,29例可评价的患者中位随访时间为24(12-42)个月。在IFN-α-2b治疗后6、12、24及36个月分别有10%、48%、72%及78%患者发生血液学完全缓解。监测JAK2V617F突变负荷的变化显示,IFNα2b治疗后6、12、24及36个月发生分子水平缓解率分别为41%、76%、89%及89%。4例患者经IFN-α-2b治疗后JAK2V617F突变基因转阴,停药6-12个月未复发。7例post-PV MF患者应用IFN-α-2b治疗后12月JAK2V617F突变负荷减低程度[(53±18)%]较非骨髓纤维化PV患者[(32±22)%]有显著性差异(p=0.031)。结论:IFN-α-2b可选择作用于PV恶性克隆,降低JAK2V617F突变负荷,使PV患者发生分子水平缓解,尤其对post-PV MF的作用较明显。

关键词：真性红细胞增多症骨髓纤维化 JAK2V617F突变干扰素-α-2b

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抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化

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中国实验血液学杂志 2011年第3期19卷 661-665页

作者：金薇娜王建常国强蔺亚妮王立洪李华文高伟李庆华庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用。利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,... 详细信息

本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用。利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,pHi),瑞氏染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR检测基因表达,Western blot技术检测MAPK磷酸化水平的改变。结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)的mRNA水平上调;特异性NHE1抑制剂Cariporide预处理能够促进低氧诱导的K562细胞分化,Cariporide处理后K562细胞的P38和ERK5蛋白激酶磷酸化水平显著增强。结论 :低氧及低氧模拟物能够诱导K562细胞系分化,抑制NHE1活性协同促进低氧诱导的K562细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK蛋白激酶磷酸化水平促进分化。

关键词：钠氢交换蛋白1 低氧诱导分化 K562细胞 CoCl2

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细胞内酸化逆转HL-60、MSC和脐血CD34＋细胞耐药的研究

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中国实验血液学杂志 2011年第3期19卷 666-670页

作者：王若君常国强李庆华王立洪金薇娜蔺亚妮李华文庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究主要探讨细胞酸化对罗丹明123(rhodamine Rh123)在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中累积的影响,为抗白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)寻找胞内酸化逆转的新方法。采用实时定量PCR技术检测MDR1基因在mRNA水... 详细信息

本研究主要探讨细胞酸化对罗丹明123(rhodamine Rh123)在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中累积的影响,为抗白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)寻找胞内酸化逆转的新方法。采用实时定量PCR技术检测MDR1基因在mRNA水平的表达;利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定HL-60、MSC及CD34+脐血细胞pHi值;采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞内Rh123累积的影响。结果表明:细胞酸化3小时对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞的活力无明显影响,细胞酸化能明显改变细胞对Rh123的累积;此外,细胞分化程度越低,其细胞内Rh123的累积越少。结论 :细胞酸化能逆转HL-60、MSC和脐血CD34+细胞的耐药。

关键词：细胞酸化多药耐药 HL-60细胞 MSC细胞 CD34+

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AML1a在小鼠造血细胞增殖分化异常中的作用

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中国实验血液学杂志 2011年第6期19卷 1477-1481页

作者：许发美邢海燕田征唐克晶饶青王敏王建祥中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究旨在探讨AML1a在小鼠造血细胞增殖分化异常中的作用及其作用机制。将构建的pMSCV-FLAG-AML1a-IRES-YFP和pMSCV-IRES-YFP分别与辅助质粒pV Pack-Eco(含Env)、pV Pack-GP(含gal-pol)组合,通过磷酸钙沉淀法转染293T细胞,制备逆转录... 详细信息

本研究旨在探讨AML1a在小鼠造血细胞增殖分化异常中的作用及其作用机制。将构建的pMSCV-FLAG-AML1a-IRES-YFP和pMSCV-IRES-YFP分别与辅助质粒pV Pack-Eco(含Env)、pV Pack-GP(含gal-pol)组合,通过磷酸钙沉淀法转染293T细胞,制备逆转录病毒。通过逆转录病毒将AML1a及YFP转导至C57 BL/6J雄性小鼠的骨髓单个核细胞(BMMNC),接种于M3434甲基纤维素完全培养液进行集落形成实验,并置于含mSCF、mIL-3、mIL-6的M5300液体培养液中进行长期培养,观察BMMNC形态变化。结果显示,转导了AML1a的BMMNC集落形成能力增强,集落数量和体积均明显大于对照组,集落以CFU-E和CFU-GEMM为主。长期培养实验中,转导AML1a组细胞形态显示分化阻滞,而对照组细胞则处于更成熟的阶段。结论:AML1a增加了造血干/祖细胞的增殖能力,并将小鼠造血干/祖细胞阻滞于较早的发育阶段。

关键词： AML1a 骨髓单个核细胞造血细胞增殖造血细胞分化

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N-cadherin阳性白血病KG1a细胞系在G_0期抵抗VP16杀伤的作用

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中国实验血液学杂志 2011年第5期19卷 1102-1106页

作者：何侃于沛邢海燕李艳田征王敏唐克晶饶青中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

抗药性是白血病干细胞的重要特征,为探索N-cadherin阳性的白血病细胞耐受化疗药物VP16杀伤作用的机制,本研究以白血病细胞系KG1a为研究模型,利用流式细胞术测定N-cadherin阳性和N-cadherin阴性细胞在G0期比例的差异,利用G-CSF诱导KG1a... 详细信息

抗药性是白血病干细胞的重要特征,为探索N-cadherin阳性的白血病细胞耐受化疗药物VP16杀伤作用的机制,本研究以白血病细胞系KG1a为研究模型,利用流式细胞术测定N-cadherin阳性和N-cadherin阴性细胞在G0期比例的差异,利用G-CSF诱导KG1a细胞进入细胞周期,观察G0期细胞比例的变化,并测定诱导后KG1a细胞对VP16的敏感性;再利用EGTA抑制N-cadherin介导的细胞间黏附后,观察KG1a细胞耐药性的变化。结果显示,N-cadherin阳性的KG1a细胞G0期比例高于N-cadherin阴性的细胞;诱导KG1a细胞进入细胞周期后G0期细胞比例明显下降,KG1a细胞对VP16的敏感性显著升高;利用EGTA处理KG1a细胞24小时抑制N-cadherin的作用后,KG1a细胞在G0期比例降低,KG1a细胞对VP16的药物敏感性显著升高。结论:N-cadherin通过介导白血病细胞之间的黏附作用,使白血病细胞处于G0期的静息状态,从而耐受VP16的杀伤作用。

关键词： N-cadherin 白血病细胞 KG1a细胞 VP16 G0期细胞比率

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染色体13q14缺失在多发性骨髓瘤发生发展中的意义及对其临床预后的影响

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中华血液学杂志 2011年第4期32卷 217-220页

作者：李倩安刚李承文徐燕邓书会刘旭平齐军元王亚非邹德慧赵耀中邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学附属肿瘤医院

目的研究染色体13q14缺失在多发性骨髓瘤（MM）患者中的发生率及其临床意义.方法对我院淋巴瘤中心132例初治MM患者骨髓标本行CD138免疫磁珠富集骨髓瘤细胞后,采用13q14（RB1）探针进行荧光原位杂交（FISH）检测,结合不同治疗方案分析... 详细信息

目的研究染色体13q14缺失在多发性骨髓瘤（MM）患者中的发生率及其临床意义.方法对我院淋巴瘤中心132例初治MM患者骨髓标本行CD138免疫磁珠富集骨髓瘤细胞后,采用13q14（RB1）探针进行荧光原位杂交（FISH）检测,结合不同治疗方案分析其临床意义.结果 ①检出率：FISH检测13q14缺失率为51.5%,而常规染色体核型分析△l3（-13/13q-）检出率仅为5.0%.②单因素分析显示,13q14缺失比例＞25%、ISS分期为Ⅱ或Ⅲ期、血β2-MG≥5.5 mg/L、起病时骨髓涂片浆细胞比例＞0.500是不良预后因素.多因素分析显示,只有13q14缺失比例＞25%是独立的不良预后因素.硼替佐米与传统化疗相比可明显提高13q14缺失患者的近期疗效.应用硼替佐米后13q14缺失比例＞25%患者与缺失比例≤25%患者的总生存时间差异无统计学意义,提示硼替佐米能克服13q14缺失对预后的不良影响.结论 CD138磁珠分选后行FISH检测可以显著提高MM患者中13q14缺失的检出率;FISH检测MM患者13q14缺失比例＞25%是独立的预后不良因素,且与患者自身的肿瘤负荷、其他遗传学指标密切相关;硼替佐米可以克服13q14缺失对近期疗效的不良影响.

关键词：多发性骨髓瘤原位杂交,荧光硼替佐米

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1236例儿童急性白血病住院病例分析

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中国实验血液学杂志 2011年第3期19卷 692-695页

作者：曾慧敏郭晔衣晓丽周剑峰安文彬竺晓凡中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所儿童血液病诊疗中心实验血液学国家重点实验室天津300020

为了研究儿童急性白血病的流行病学,对2004年4月至2010年4月在中国医学科学院血液病医院住院的1236例儿童急性白血病患儿发病情况进行回顾性调查,分析住院患者中儿童急性白血病的发病年龄、发病时间、危险因素、各亚型分布以及分子流行... 详细信息

为了研究儿童急性白血病的流行病学,对2004年4月至2010年4月在中国医学科学院血液病医院住院的1236例儿童急性白血病患儿发病情况进行回顾性调查,分析住院患者中儿童急性白血病的发病年龄、发病时间、危险因素、各亚型分布以及分子流行病学等特征。结果表明:ALL、AML患儿男女比例为分别为1.80∶1及1.73∶1。发病年龄高峰为2岁至6岁,中位年龄6岁,其中ALL发病年龄高峰为2-5岁,AML没有明显的发病年龄高峰。冬季为患儿发病及出生季节高峰,1月份为患儿发病及出生月份高峰。免疫学分型显示,631例ALL患者中B-ALL占89%,T-ALL占9%。在361例AML中M0-M7各亚型白血病所占比例分别为0.3%、2.2%、29.8%、20.9%、8.1%、25.2%、4.1%、4.6%。进行分子生物学检测表明,631例ALL儿童中TEL/AML1阳性占23%,BCR/ABL阳性占7.4%,MLL阳性占4.1%,E2A/PBX1阳性占2.1%。在361例AML儿童中,19%患儿AML1/ETO融合基因阳性,18%PML/RARα融合基因阳性,4.2%CBFβ/MYH11融合基因阳性。结论 :不同性别、年龄、季节、环境及遗传背景对儿童急性白血病发病有影响,白血病各亚型发病率不一。

关键词：儿童急性白血病流行病学 ALL AML

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慢性淋巴细胞白血病患者典型模式B细胞受体的表达及临床预后意义

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中华医学杂志 2011年第46期91卷 3267-3270页

作者：于珍李增军易树华周可树郝牧李长虹齐军元邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 郑州大学附属肿瘤医院河南省肿瘤医院

目的探讨我国慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者典型模式B细胞受体（stereotyped BCR）的表达情况及其预后价值.方法应用多重PCR方法检测1992年4月至2010年4月中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所116例CLL患者免疫球蛋白重链可变区... 详细信息

目的探讨我国慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者典型模式B细胞受体（stereotyped BCR）的表达情况及其预后价值.方法应用多重PCR方法检测1992年4月至2010年4月中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所116例CLL患者免疫球蛋白重链可变区（IGHV）片段使用情况及突变状态,应用多序列比对软件ClustalW2明确我国典型模式BCR的表达情况,并与CLL患者IGHV突变状态、细胞遗传学异常、生存和预后进行相关性分析.结果共检测初诊CLL患者116例,102例成功测序,检出率87.9％.测序反应共得到73例患者的IGHV互补决定区3（CDR3）序列,19.2％（14例）CLL患者BCR为典型模式.与IGHV突变组相比,未突变组患者中典型模式BCR的发生率更高（40.9％比11.8％,P=0.005）.BCR为典型模式的CLL患者中17q-的发生率更高（33.3％比10.7％,P=0.045）.BCR为典型模式的CLL患者的中位无进展生存时间（PFS）较其他组为短（39个月比84个月,p =0.002）.结论 BCR为典型模式的CLL患者预后较差.典型模式BCR的存在表明肿瘤细胞曾面临同样的抗原选择过程,提示抗原选择与CLL的发生密切相关.

关键词：白血病淋巴细胞慢性预后典型模式B细胞受体

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微小RNA223在B淋巴增殖性疾病中的表达及其临床意义

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中华医学杂志 2011年第34期91卷 2384-2387页

作者：周可树于珍易树华李增军安刚王燕婴邹德慧齐军元赵耀中宋永平邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 郑州大学附属肿瘤医院河南省肿瘤医院

目的检测微小RNA（microRNA）223在我国常见B淋巴增殖性疾病中的表达并分析其临床意义。方法2003至2010年中国医学科学院血液病医院慢性淋巴细胞白血病（CLL）53例，套细胞淋巴瘤（MCL）13例，脾边缘区淋巴瘤（SMZL）9例，健康对照12名... 详细信息

目的检测微小RNA（microRNA）223在我国常见B淋巴增殖性疾病中的表达并分析其临床意义。方法2003至2010年中国医学科学院血液病医院慢性淋巴细胞白血病（CLL）53例，套细胞淋巴瘤（MCL）13例，脾边缘区淋巴瘤（SMZL）9例，健康对照12名。取外周血（78例）或骨髓（9例），常规分离单个核细胞并行CD19磁珠分选。提取CD19^＋B淋巴细胞的总RNA，应用TaqMan探针法检测microRNA-223的表达。收集患者临床资料，应用SPSS16．0软件进行统计学分析。结果（1）microRNA-223的表达在CLL、MCL及SMZL分别为：4．58±0．62、4．03±0．54、4．63±0．57，显著低于健康对照（5．69±0．60，P〈0．01）；microRNA-223在MCL的表达显著低于CLL及SMZL（P〈0．05），而其在CLL与SMZL之间表达差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）CLL患者microRNA-223的表达随疾病进展下调；CLL中IgVH未突变患者microRNA-223的表达水平显著低于IgVH突变患者（4．05±0．69比4．67±0．51，P=0．003）；microRNA-223在13q-阳性患者的表达显著高于13q-阴性患者（4．76±0．45比4．254-0．67，P=0．044）；（3）根据IgVH突变状态采用受试者工作特征（ROC）曲线方法，将microRNA-223的表达分为阳性组及阴性组。microRNA-223阳性组患者的中位疾病无进展生存（PFS）时间为48个月，高于microRNA-223阴性组的9个月（P=0．001），microRNA-223阳性组患者截至随访结束，无一例死亡。结论microRNA-223可能在B淋巴增殖性疾病的发病中起重要作用；其与患者预后相关，可能是CLL新的较为可靠的预后指标。

关键词：淋巴组织增殖性疾病微RNAs 预后

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microRNA-155及microRNA-146a在慢性淋巴增殖性疾病中的表达及临床意义

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中华血液学杂志 2011年第10期32卷 656-659页

作者：周可树于珍易树华李增军李玉富安刚邹德慧齐军元赵耀中邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 郑州大学附属肿瘤医院、河南省肿瘤医院

目的观察microRNA-155及microRNA-146a在慢性淋巴细胞白血病（CLL）、套区细胞淋巴瘤（MCL）及脾脏边缘区淋巴瘤（SMZL）患者CD19^＋B淋巴细胞中的表达，并分析其临床意义。方法以53例CLL、13例MCL、9例SMZL患者和12名正常人为研究对象... 详细信息

目的观察microRNA-155及microRNA-146a在慢性淋巴细胞白血病（CLL）、套区细胞淋巴瘤（MCL）及脾脏边缘区淋巴瘤（SMZL）患者CD19^＋B淋巴细胞中的表达，并分析其临床意义。方法以53例CLL、13例MCL、9例SMZL患者和12名正常人为研究对象。取外周血（78份）或骨髓（9份），常规分离单个核细胞，并行CD19磁珠分选。提取CD19^＋细胞总RNA，应用TaqMan探针法检测microRNA-155及microRNA-146a的表达，结合患者临床资料进行统计学分析。结果①microRNA-155在CLL患者中的表达（4．49±0．83）显著高于MCL（3．83±0．45）及SMZL（3．80±0．61）（P〈0．05）；②SMZL患者中microRNA-146a的表达（3．81±0．59）显著高于CLL（2．58±0．90）及MCL（2．21±0．88）（P〈0．01）；③CLL Ig VH未突变组患者microRNA-155的表达显著高于突变组患者（P=0．012）；④CLL患者不同细胞遗传学分组间microRNA-155及microRNA-146a的表达差异元统计学意义（P〉0．05）。结论①不同慢性淋巴增殖性疾病（LPD）之间microRNA-155及microRNA．146a的表达存在差异；②提示microRNA可能与慢性LPD的发病甚至预后相关。

关键词：微脱氧核糖核酸淋巴组织增殖性疾病

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