检索结果-内蒙古大学图书馆

实用医学杂志 2010年第4期26卷 555-557页

作者：郑丽坤张磊卢士红赵辉吴寿岭陈乃耀华北煤炭医学院附属开滦医院血液科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院骨科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院心内科唐山市063000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所华北煤炭医学院附属医院天津市300020 中国医学科学院中国协和医科大学血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 天津大学化工学院生物制药实验室 300000

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中... 详细信息

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中性粒细胞的比例分别为1∶1、1∶10、1∶50、1∶100,UC-MSCs单独培养为对照组(1∶0)。在分别培养18h和40h后,用MTT法检测各组增殖,评价不同组间的增殖情况,用ELISA方法检测不同组间培养上清IL-6水平。结果:1∶50和1∶100组UC-MSCs生长受到抑制(P<0.05),18h和40h差异无显著性(P>0.05)。1∶50实验组中,IL-6的分泌水平低于1∶0和1∶1实验组(P<0.05)。结论:高浓度的脐血中性粒细胞上清液抑制UC-MSCs的增殖。高浓度的脐血中性粒细胞的上清液抑制人UC-MSCs分泌IL-6。

关键词：间质干细胞脐带细胞增殖白细胞介素-6 中性粒细胞

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二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

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生物工程学报 2009年第7期25卷 1042-1048页

作者：苏晔刘娟妮高瀛岱秦立杨铭王金宏许元富邵晓枫纪庆熊冬生杨纯正中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

向抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody)中引入二硫键,使diabody两条链以共价键交联,增强其稳定性。用重叠PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗Pgp diabody中抗CD3或抗Pgp轻重链可变区的适当部位定点突变成半胱氨酸,... 详细信息

向抗CD3/抗Pgp(P-glycoprotein)微型双功能抗体(Diabody)中引入二硫键,使diabody两条链以共价键交联,增强其稳定性。用重叠PCR(Overlap PCR)和PCR方法,将抗CD3/抗Pgp diabody中抗CD3或抗Pgp轻重链可变区的适当部位定点突变成半胱氨酸,进行原核表达。表达产物经阳离子层析柱和抗Etag亲和层析柱分离纯化,还原性和非还原性SDS-PAGE电泳鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FCM)检测生物学活性。将改造前后的两种抗体分别置37oC含0.2%人血清白蛋白(Human serum albumin,HAS)的PBS中孵育,取多个时间点比较两者与两种把抗原的结合能力。基因重组质粒经测序证实序列正确。向抗Pgp轻重链引入突变的diabody(dsPgp-diabody)在原核表达系统中,SDS-PAGE显示纯化后的蛋白二硫键不能配对。而向抗CD3轻重链引入突变的diabody(dsCD3-diabody)能够在原核表达系统中进行可溶性表达,二硫键能够正确配对。并且与改造前的diabody相比,dsCD3-diabody的抗原结合特异性没有改变,抗原结合和竞争活性均无下降。改造前的diabody在37oCPBS(0.2%HAS)中孵育1h后活性即开始下降,24h后活性完全丧失;而dsCD3-diabody孵育72h后活性并无明显下降。本实验成功构建了dsCD3-diabody,并且能够进行可溶性表达。向diabody抗CD3轻重链区引入的二硫键在宿主菌中可以正确配对,抗原结合活性没有明显下降,而稳定性大大增强。向diabody轻重链区引入二硫键,以增强其稳定性的方法是可行的。

关键词：基因工程抗体 diabody 二硫键药物稳定性

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中国健康正常人、骨髓增生异常综合征及再生障碍性贫血患者HFE基因突变的研究

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中华血液学杂志 2009年第4期30卷 223-228页

作者：聂玲艾晓非郑以州李庆华杨琳肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的分析健康正常人、骨髓增生异常综合征（MDS）和再生障碍性贫血（AA）患者HFE基因突变的频率并探讨其与铁代谢和铁过载脏器功能受损相关指标的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）联合测序分析的方法检测... 详细信息

目的分析健康正常人、骨髓增生异常综合征（MDS）和再生障碍性贫血（AA）患者HFE基因突变的频率并探讨其与铁代谢和铁过载脏器功能受损相关指标的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）联合测序分析的方法检测271例MDS患者、402例AA患者和1615名健康正常对照的HFE基因H63D和C282Y突变，并比较未输注红细胞的MDS和AA患者HFE基因突变组与未突变组的铁代谢指标和铁过载脏器功能受损相关指标。结果271例MDS患者、402例AA患者及1615名正常对照中均未发现HFE基因C282Y突变及C282Y和H63D复合突变。MDS患者H63D突变率为4．1％（271例中11例），且均为杂合型。AA患者H63D杂合型突变率为9．7％（402例中39例），纯合型突变率0．25％（402例中1例）。正常对照H63D杂合型突变率为10．2％（164例），纯合型突变率0．24％（4例）。MDS患者H63D突变率明显低于正常对照（P=0．002），而AA患者与正常对照比较差异无统计学意义（P=0．988）。未输注红细胞的MDS及AA患者的血清铁蛋白（SF）值、血清铁（SI）值、铁饱和度（TS）值均接近或高于正常高限，血清未饱和铁（UIBC）值明显低于正常。未输注红细胞的MDS患者H63D突变组与未突变组的SF、SI、UIBC、总铁结合力（TIBC）、TS值差异无统计学意义（P值均〉0．05）；未输注红细胞的AA患者H63D突变组的SI值明显高于未突变组[42．6（24．6～60．4）μmol／L和32．0（8．4—63．3）μmol／L（P=0．011）]，而两组的其他铁代谢参数差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。MDS及AA患者或就诊前未输注红细胞的MDS及AA患者H63D突变组与未突变组的肝酶值、空腹血糖（FBS）值、心电图（ECG）异常率、外周血指标差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论HFE基因H63D和C282Y突变在人群的分布有种族和遗传的差异，中国人HFE基因的突变率明显低于白种人。MDS与AA患者本身均可致铁过载，HFE基因H63D和C282Y突变并不是导致其铁过载的主要原因。

关键词：基因,HFE 突变骨髓增生异常综合征贫血,再生障碍铁代谢障碍

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原发性骨髓增生异常综合征染色体核型异常特征及其预后意义的研究

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中华血液学杂志 2009年第4期30卷 217-222页

作者：李磷刘旭平聂玲于明华张悦秦铁军肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的研究原发性骨髓增生异常综合征（MDS）患者染色体核型特征及其预后意义。方法对染色体核型可供分析的351例成人原发MDS患者进行回顾性分析。结果染色体核型异常者237例（67．5％）。其中仅有染色体数目异常者99例（41．7％），仅有... 详细信息

目的研究原发性骨髓增生异常综合征（MDS）患者染色体核型特征及其预后意义。方法对染色体核型可供分析的351例成人原发MDS患者进行回顾性分析。结果染色体核型异常者237例（67．5％）。其中仅有染色体数目异常者99例（41．7％），仅有染色体结构异常者70例（29．5％），同时有数目与结构异常者68例（28．8％）；单一异常130例（54．8％），2种异常54例（22．8％），复杂异常（≥3种）53例（22．4％）。整倍体数目改变有多倍体4例（1．7％）；非整倍体及染色体臂的异常可见于所有染色体，常见的依次有＋8、-20／20q-、-7／7q-、-5／5q-、-18、-11／11q-、＋21、-Y、-21、-10、-16、-22、＋9、del（12）（p12）。-5／5q-（5．1％）的发生率低于西方国家（8．7％～23．4％），5q-综合征的发生率极低（0．3％），＋8（19．1％）和-20／20q-（9．4％）的发生率高于西方国家（分别为1．2％～7．0％和2．0％-3．5％）。237例染色体核型异常的患者中染色体易位有31例（13．1％），其中12种染色体易位在MDS中迄今尚无文献报道。i（17）（q10）有9例（3．8％），其中6例（66．7％）为单一异常。染色体重复有7例（3．0％），主要累及1号染色体（4例）。按IPSS染色体核型分组，预后差的染色体核型检出率在RA、RARS、5q-综合征组，RCMD、RCMD—RS组，RAEB-Ⅰ组，RAEB-Ⅱ组依次升高，差异有统计学意义（χ^2=2．854，P〈0．01）。351例MDS患者中，177例获得随访资料，中位随访时间14．5（1～131）个月，81例死亡，中位生存期（MS）12（1～90）个月。按IPSS染色体核型分组，染色体核型为预后好、中、差的患者MS分别为51[95％可信区间（CI5～77]、35（95％CI—65）和13（95％CI～17）个月，Log—rank检验三组总体生存（OS）率差异有统计学意义（P=0．004）。染色体核型按正常核型（NN）、嵌合核型（AN）、异常核型（AA）分组，NN、AN、AA患者MS分别为51（95％CI24～78）、36（95％CI0．3～71）和23（95％CI10～35）个月，Log—rank检验三组OS率差异有统计学意义（P=0．039）。结论我国MDS患者具有有别于西方国家MDS患者的染色体核型异常特征。染色体核型分析是MDS患者预后分层实现个体化治疗的重要依据。

关键词：骨髓增生异常综合征细胞遗传学分析染色体核型分析预后

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钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺对人白血病细胞K562和K562/A02生长的抑制作用

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中国药理学通报 2009年第10期25卷 1313-1317页

作者：邹凌琳周圆杨铭代晓华齐静熊冬生范冬梅杨纯正朱惠芳中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺(EBB)体外抗白血病作用及机制。方法四唑盐(MTT)比色法评价EBB的细胞毒作用;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞ROS水平;激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i含量。结果EBB明显抑制敏... 详细信息

目的研究钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺(EBB)体外抗白血病作用及机制。方法四唑盐(MTT)比色法评价EBB的细胞毒作用;流式细胞术检测细胞凋亡;荧光分光光度计检测细胞ROS水平;激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i含量。结果EBB明显抑制敏感K562和耐药K562/A02细胞增殖,IC50分别为(8.22±1.67)mol.L-1和(8.97±1.48)mol.L-1。EBB作用早期诱导凋亡,晚期引起坏死。K562/A02细胞的ROS静息值是K562细胞的2倍,EBB诱导两种细胞ROS生成呈浓度和时间依赖性,加入SOD明显降低坏死率。K562/A02细胞的[Ca2+]i低于K562细胞。EBB能明显增加两种细胞的[Ca2+]i。结论EBB明显抑制K562和K562/A02细胞增殖。信号分子Ca2+、ROS参与了EBB的细胞毒作用。

关键词：钙调素拮抗剂 O-(4-乙氧基-丁基)-小檗胺人白血病细胞活性氧钙离子凋亡坏死

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成人Ph染色体和（或）bcr—abl阳性急性淋巴细胞白血病患者细胞遗传学及预后分析

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中华血液学杂志 2009年第5期30卷 298-302页

作者：李业楠邹德慧顾敏赵耀中齐军元秘营昌王建祥邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的分析成人Ph染色体和（或）bcr—abl阳性（Ph^＋／bcr—abl^＋）急性淋巴细胞白血病（ALL）患者细胞遗传学改变的特点，探讨其对预后的影响。方法回顾性分析1996年1月至2007年12月就诊并行染色体检查的100例成人Ph^＋／bcr—abl^＋AL... 详细信息

目的分析成人Ph染色体和（或）bcr—abl阳性（Ph^＋／bcr—abl^＋）急性淋巴细胞白血病（ALL）患者细胞遗传学改变的特点，探讨其对预后的影响。方法回顾性分析1996年1月至2007年12月就诊并行染色体检查的100例成人Ph^＋／bcr—abl^＋ALL患者的临床资料，总结其染色体畸变的类型、分布和频率特点，并进行分组研究，探讨不同组之间的临床特点及预后差异。结果①72例检出染色体异常，22例为单纯Ph染色体阳性或其变异型，44例Ph阳性伴附加染色体异常，常见的异常有＋Ph、-7、＋21、-20、＋8、9p-、del（22）等。②染色体数目分组比较：假二倍体组和高二倍体组初诊时白细胞计数明显高于正常核型组，而正常核型组总生存（OS）率较亚二倍体和假二倍体组高，无复发生存（RFS）期较亚二倍体和假二倍体组长。③染色体畸变类型分组比较：Ph阳性组初诊时白细胞计数明显高于Ph阴性组，而OS率较Ph阴性组低，RFS期较Ph阴性组短；单纯Ph阳性组与Ph阳性伴附加染色体异常组在临床特征、OS率和RFS期间的差异均无统计学意义，同时Ph阳性伴附加染色体异常组的OS期和RFS期也明显短于Ph阴性组。④核型分组比较：全部核型正常组（NN）患者较正常与异常核型共存组（AN）年龄轻，初诊时白细胞计数低，融合基因表达以P190为主，髓系抗原表达率高，RFS率和OS率高；NN组较全部核型异常组（AA）初诊时白细胞计数低，髓外浸润重，RFS率和OS率高，而AA与AN组之间各项差异均无统计学意义。⑤双Ph染色体组融合基因P190比例低于非双Ph染色体组，OS期短于非双Ph染色体组。结论成人Ph^＋／bcr—abl^＋ALL患者染色体改变复杂，假二倍体和高二倍体提示预后不良，双Ph染色体可能提示预后不良。

关键词：费城染色体白血病淋巴细胞急性细胞遗传学分析预后

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急性淋巴细胞白血病FLT3基因突变的发现及临床意义

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中国医学科学院学报 2009年第5期31卷 522-526页

作者：赵欣唐克晶田征陈礼平秘营昌王建祥中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变情况。方法采用PCR方法检测61例ALL患者的FLT3基因内部串联重复突变(FLT3-ITD)与ASP835突变(FLT3-TKD),并以7名健康志愿者为对照,对检测结果进行分析并探讨其临床意... 详细信息

目的研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者fms样酪氨酸激酶3(FLT3)基因突变情况。方法采用PCR方法检测61例ALL患者的FLT3基因内部串联重复突变(FLT3-ITD)与ASP835突变(FLT3-TKD),并以7名健康志愿者为对照,对检测结果进行分析并探讨其临床意义。结果61例ALL患者中,2例出现FLT3-ITD,1例出现FLT3-TKD。结论少数ALL患者体内存在FLT3突变。

关键词： FLT3基因内部串联重复 ASP835突变急性淋巴细胞白血病

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阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响

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中华血液学杂志 2009年第12期30卷 812-815页

作者：杨铭范冬梅高瀛岱周圆纪庆邵晓枫王金宏许元富熊冬生杨纯正中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响。方法采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗CD3／抗P—gp微型双功能抗体，用阿糖胞苷刺激K562和K562／A02细胞，并用流式细胞术检测K562和K562... 详细信息

目的探讨阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤多药耐药白血病细胞的影响。方法采用抗E-tag亲和层析柱分离纯化抗CD3／抗P—gp微型双功能抗体，用阿糖胞苷刺激K562和K562／A02细胞，并用流式细胞术检测K562和K562／A02细胞B7—1、B7—2分子的表达，用CytoTox 96非放射性细胞毒试剂盒检测阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞免疫杀伤K562／A02细胞的影响。结果经阿糖胞苷刺激的K562和K562／A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较未刺激的对照组明显升高。阿糖胞苷对抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的T淋巴细胞在效靶比0．39：1～25：1范围内，激活T细胞对耐药白血病细胞的杀伤率为（16．44±1．20）％～（60．49±2．90）％，其杀伤率与效靶比和抗体浓度呈依赖关系（P〈0．05）。结论阿糖胞苷可明显提高抗CD3／抗P—gp双功能抗体介导的人T淋巴细胞对高表达P—gp抗原的耐药白血病细胞的杀伤效府。

关键词：阿糖胞苷双功能抗体,抗CD3/抗Pgp T淋巴细胞 B7分子

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细胞酸化对P糖蛋白高表达耐药白血病细胞的影响

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中华血液学杂志 2009年第9期30卷 605-609页

作者：李庆华芦颖金薇娜蔺亚妮胡蓉华竺晓凡王建祥庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨细胞酸化对患者原代白血病细胞P糖蛋白（P—glycoprotein，P—gp）和mdrl表达的影响，为逆转白血病多药耐药（MDR）提供新方法。方法采用实时定量RT—PCR技术检测mdrl mRNA表达水平的变化，筛选出P—gp高表达的患者白血病细胞... 详细信息

目的探讨细胞酸化对患者原代白血病细胞P糖蛋白（P—glycoprotein，P—gp）和mdrl表达的影响，为逆转白血病多药耐药（MDR）提供新方法。方法采用实时定量RT—PCR技术检测mdrl mRNA表达水平的变化，筛选出P—gp高表达的患者白血病细胞。应用钠氢离子交换蛋白1特异性抑制剂Cariporide和高钾缓冲液对细胞进行酸化，采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响。应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值（Intracellular pH，pHi）及细胞酸化对细胞内阿霉素累积的影响，应用流式细胞术检测细胞酸化对细胞中P—gp功能的影响，采用Western blot检测细胞酸化对细胞P—gp表达水平的影响。结果患者细胞pHi降低到7．0，酸化1h后mdrl mRNA表达量分别降至对照组的0．532±0．110，酸化3h后降至对照组的0．166±0．070；酸化3h后P—gp的蛋白水平降至对照组的0．560±0．090；细胞pHi 7．01h后细胞内罗丹明123（Rhodaminel 123，Rh123）累积由对照组的20．07±0．39明显增加至71．03±0．47，激光共聚焦显微镜观察结果也证实酸化增加细胞内阿霉素累积。结论细胞内酸化能够抑制患者细胞P—gp表达和功能。

关键词： Cafipofide 细胞酸化 P糖蛋白抗药性,多药

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基于常规实验室检查指标的改良WPSS预后积分系统对骨髓增生异常综合征预后判断意义的初步研究

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中华血液学杂志 2009年第5期30卷 313-317页

作者：李璘聂玲于明华于阳刘亮秦铁军徐泽锋张悦肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的评价WPSS预后积分系统在我国骨髓增生异常综合征（MDS）患者预后判断中的作用，并对常规实验室检查指标用于MDS患者预后判断进行初步研究。方法对染色体核型结果可供分析的164例成人原发MDS患者进行回顾性分析。结果164例患者中位... 详细信息

目的评价WPSS预后积分系统在我国骨髓增生异常综合征（MDS）患者预后判断中的作用，并对常规实验室检查指标用于MDS患者预后判断进行初步研究。方法对染色体核型结果可供分析的164例成人原发MDS患者进行回顾性分析。结果164例患者中位随访时间19（1—138）个月，中位生存（MS）期36个月，2年预期生存（PS）率60％，5年PS率42％。按WPSS评分，极低危组、低危组、中危组、高危组和极高危组的2年PS率分别为100％、96％、81％、38％和14％，5年PS率分别为100％、83％、54％、20％和0，Log—rank检验各组总体生存（OS）率差异有统计学意义（P〈0．01）。常规实验室检查中，Hb≥80g/L、平均红细胞体积（MCV）升高（〉95fl）、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）升高（〉32pg）、BPC≥100×10^9／L的患者预后较好；骨髓原始细胞比例（Blast）≥0．05的患者较〈0．05的患者预后差，骨髓细胞发育异常≥2系的患者预后较差；细胞组化检查中性粒细胞碱性磷酸酶（N-ALP）阳性指数升高（〉173．21）、有核红细胞糖原染色（E—PAS）阴性的患者预后较好，小巨核酶标染色可见淋巴样小巨核细胞（MEGly）的患者预后较差。另外，血清乳酸脱氢酶水平升高（≥300U／L）的患者预后较差。将上述单因素分析有预后意义的参数纳入COX多因素模型筛选，MCV、MEGly、Blast具有独立预后意义（P值分别为0．011、0．013、0．016）。选取MCV、MEGly及WHO分型提出改良的WPSS积分系统，低危组、中危组、高危组患者的2年PS率分别为94％、68％和49％，5年PS率分别为86％、53％和14％，经Log—rank检验各组OS率差异有统计学意义（P〈0．01）。结论与WHO分型相适应的WPSS适合用于判断我国MDS患者的预后。采用常规实验室检查指标中的MCV、MEGly及WHO分型提出的改良WPSS积分系统可望提供适于我国现阶段基层单位的MDS预后判断标准。

关键词：骨髓增生异常综合征预后 WHO分型预后积分系统(WPSS)

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