检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2009年第11期25卷 991-993,997页

作者：李彬王晓静刘拥军韩忠朝庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白,构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段,并克隆至表达载体pET22b(+)中,利用基... 详细信息

目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白,构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段,并克隆至表达载体pET22b(+)中,利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达,产物利用Ni2+-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化。采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响。结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段,成功构建重组质粒pET22b(+)-HA-PO,其表达的融合蛋白以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的10%,经分离纯化融合蛋白的纯度可达80%。活性测定结果表明HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总黏附性。结论:可溶性表达了HAPO蛋白,并用体外实验证实HAPO对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用。

关键词：促血液血管细胞生长素可溶性表达分离纯化人脐静脉内皮细胞

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203例慢性淋巴细胞白血病患者预后相关因素分析

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中华血液学杂志 2009年第7期30卷 435-439页

作者：吴瞳李增军王亚非赵耀中齐军元钱林生邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者预后的主要影响因素。方法回顾性分析2000年至2007年就诊于中国医学科学院血液病医院并获得有效随访的203例CLL患者临床资料，收集可能影响预后的因素，以Kaplan—Meier法绘制生存曲线，用Log—r... 详细信息

目的探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者预后的主要影响因素。方法回顾性分析2000年至2007年就诊于中国医学科学院血液病医院并获得有效随访的203例CLL患者临床资料，收集可能影响预后的因素，以Kaplan—Meier法绘制生存曲线，用Log—rank检验进行单因素分析，运用COX回归模型评估独立预后因素。结果全组CLL患者中位随访时间为48．0（3．0～156．0）个月，5年总体生存（OS）率为（87．3±2．4）％，10年OS率为（77．4±3．3）％，死亡48例（23．6％）。单因素分析显示临床分期为晚期、有B症状、结外器官受累、受累淋巴区≥3个、肝脏肿大、Hb〈100g／L、BPC〈100×10^9／L、外周血淋巴细胞计数（ALC）〉50×10^9／L、形态学表现为混合细胞型、病程中出现分期进展、对治疗无反应、并发感染、并发第二肿瘤或类型转化为不良预后因素。多因素分析显示受累淋巴区≥3个和形态学表现为混合细胞型为独立的不良预后因素，根据这两项结果重新分组，低危、中危、高危组患者5年OS率分别为（89．8±3．5）％、（66．4±7．2）％、（15．0±13．8）％，各组间差异均具有统计学意义（P值均〈0．05）。结论初诊时受累淋巴区数和CLL细胞形态学特征有助于评估CLL患者的预后。

关键词：白血病淋巴细胞患者临床分析

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骨髓原始细胞比例不增高的骨髓增生异常综合征患者的诊断分型再评价

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中华血液学杂志 2009年第1期30卷 3-7页

作者：于明华徐泽锋李磷聂玲刘亮张悦秦铁军郝玉书肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的评价骨髓增生异常综合征（MDS）WHO标准和MDS最低诊断标准对骨髓原始细胞比例不增高（〈0．050）的MDS患者的诊断分型。方法回顾性收集1988年至2005年诊断的骨髓原始细胞比例不增高的210例MDS患者[FAB分型为难治性贫血（RA）或RA伴... 详细信息

目的评价骨髓增生异常综合征（MDS）WHO标准和MDS最低诊断标准对骨髓原始细胞比例不增高（〈0．050）的MDS患者的诊断分型。方法回顾性收集1988年至2005年诊断的骨髓原始细胞比例不增高的210例MDS患者[FAB分型为难治性贫血（RA）或RA伴有环状铁粒幼红细胞（RARS）]，重新分析细胞形态并采集相关实验室检查资料，用WHO标准和MDS最低诊断标准对这些患者进行诊断分型。结果按WHO分型标准进行诊断分型，其中RA5例，RARS7例，难治性血细胞减少伴有多系发育异常（RCMD）76例，RCMD和环状铁粒幼红细胞（RCMD—RS）9例，MDS不能分类（MDS—U）35例，5q-综合征3例，无法分型75例。WHO标准不能分型的患者中，16例骨髓二系或三系发育异常，而血细胞仅-系减少的患者随访半年后9例出现二系以上血细胞减少，可归为RCMD；对44例骨髓仅红系发育异常，血细胞二系减少或全血细胞减少无法进行分型患者，重新进行形态学分析，将那些尚未述及的细胞发育异常形态改变纳入判定该系细胞发育异常细胞计数范围后，27例患者粒系形态异常细胞≥0．100，可归入RCMD或RCMD—RS；15例三系均无细胞发育异常患者，采用MDS最低诊断标准诊断为MDS5例，高度疑似MDS（HS－MDS）5例，意义未定的特发性血细胞减少（ICUS）5例。结论MDS中只有很少一部分患者是真正意义上的RA；关于MDS的细胞发育异常形态学异常的范畴和量的界定值仍值得进一步探讨；MDS最低诊断标准是对WHO标准的很好的细化和补充。

关键词：骨髓增生异常综合征诊断标准评价研究意义未定的特发性血细胞减少

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43例淋巴母细胞淋巴瘤患者临床特点及疗效分析

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中华血液学杂志 2009年第7期30卷 446-449页

作者：鲁云李倩邹德慧赵耀中齐军元徐燕邱录贵中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的了解我国淋巴母细胞淋巴瘤（LBL）患者的临床特点及不同治疗方案的近、远期疗效。方法对43例LBL患者进行回顾性分析：结果①LBL患者中多数发病年龄较轻（中位年龄21岁），以男性为主，其中T—LBL患者的纵隔巨大肿块的发生率为63．0... 详细信息

目的了解我国淋巴母细胞淋巴瘤（LBL）患者的临床特点及不同治疗方案的近、远期疗效。方法对43例LBL患者进行回顾性分析：结果①LBL患者中多数发病年龄较轻（中位年龄21岁），以男性为主，其中T—LBL患者的纵隔巨大肿块的发生率为63．0％；②37例可评价疗效的患者治疗总有效率为81．1％，其中完全缓解（CR）率为67．6％。急性淋巴细胞白血病（ALL）样治疗方案组和非霍奇金淋巴瘤（NHL）样治疗方案组的治疗有效率分圳为94．4％和68．4％，CR率分别为83．3％和52．6％；③11例患者进行造血干细胞移植（HSCT），其总生存（OS）和无进展生存（PFS）时间明显长于ALL样治疗方案组（P值分别为0．018和0．025）和NHL样治疗方案组（P值分别为0．016和0．011）。NHL样治疗方案组、ALL样治疗方案组、HSCT组的预期3年OS率分别为（14．4±9．4）％、（20．2±12．7）％和（79．5±13．1）％。结论①LBL常发生于年轻患者，男性多于女性，初诊时外周血较少受累；与B-LBL相比，T—LBL常有纵隔肿块发生及胸腔积液、心包积液等浆膜腔积液。②对于高度侵袭性的LBL．应当给予强烈的ALL样治疗方案治疗，在CR1期行HSCT可明显提高生存率。

关键词：淋巴瘤,淋巴母细胞疾病特征治疗结果

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伊马替尼治疗伴有嗜酸粒细胞增多的髓系肿瘤疗效观察

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中华血液学杂志 2009年第6期30卷 381-384页

作者：张悦秦铁军周春林刘亮肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的评价伊马替尼治疗伴有嗜酸粒细胞增多的髓系肿瘤的疗效。方法对8例有PDGFRα基因异常的伴嗜酸粒细胞增多的髓系肿瘤及1例慢性嗜酸粒细胞白血病，不另做分类（CEL，NOS）患者口服伊马替尼100mg／d或400mg／d进行疗效观察。结果中位随... 详细信息

目的评价伊马替尼治疗伴有嗜酸粒细胞增多的髓系肿瘤的疗效。方法对8例有PDGFRα基因异常的伴嗜酸粒细胞增多的髓系肿瘤及1例慢性嗜酸粒细胞白血病，不另做分类（CEL，NOS）患者口服伊马替尼100mg／d或400mg／d进行疗效观察。结果中位随访16（6～26）个月，血液学缓解率100％，其中完全血液学缓解（CHR）率87．5％，部分血液学缓解率12．5％。完全分子生物学缓解（CMR）率85．7％，FIP1LI-PDGFRα融合基因转阴中位时间4（1．5～8）个月。3例获得CMR后停药，停药后中位随访时间12（9～22）个月，均未复发。伊马替尼不良反应轻微，轻度骨髓抑制发生率37．5％，中位发生时间6（4～9）d。结论伊马替尼治疗有PDGFRα基因异常的伴嗜酸粒细胞增多的髓系肿瘤有较高的CHR和CMR，起效迅速，不良反应轻微，患者易于耐受。

关键词：髓系肿瘤嗜酸细胞增多融合基因 FIP1L1-PDGFRα 伊马替尼疗效

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小剂量马法兰治疗中、高危骨髓增生异常综合征临床疗效观察

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中华血液学杂志 2009年第7期30卷 443-445页

作者：刘亮秦铁军徐泽锋周春林张悦肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的观察小剂量马法兰治疗中、高危骨髓增生异常综合征（MDS）的疗效和药物不良反应。方法共有按MDS国际预后积分系统（IPSS）判断为中、高危组的30例初治患者入组。治疗方案为：马法兰2mg，口服，每日1次，直至病程进展所致全血细胞减... 详细信息

目的观察小剂量马法兰治疗中、高危骨髓增生异常综合征（MDS）的疗效和药物不良反应。方法共有按MDS国际预后积分系统（IPSS）判断为中、高危组的30例初治患者入组。治疗方案为：马法兰2mg，口服，每日1次，直至病程进展所致全血细胞减少加剧或骨髓原始细胞比例增高停药，达完全缓解（CR）或部分缓解（PR）者继续用药直至病情复发停药。结果按2006年MDS国际工作组（IWG）疗效修订标准判定，CR9例（30．0％），PR3例（10．0％），骨髓缓解（MCR）加血液学进步（HI）3例（10．0％），MCR1例（3．3％），病情稳定4例（13．3％），治疗失败10例（33．3％），总有效率66．7％。骨髓增生活跃及以下组患者的CR＋PR率（60．0％）和总有效率（80．0％）明显高于骨髓增生明显活跃及以上组（分别为0％和40％）（P值分别为0．002和0．045）。中位随访时间为15．5（1～52）个月，中位生存时间为18个月，中位无复发生存时间为11个月。治疗过程中3例患者出现轻度骨髓抑制，1例因血小板输注无效导致脑出血而死亡，未见其他明显药物不良反应。结论小剂量马法兰是治疗中、高危MDS患者的一种安全、有效的方法，并且可能更适用于骨髓增生低下的患者。

关键词：骨髓增生异常综合征治疗结果马法兰

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小鼠肿瘤坏死因子α增强造血干／祖细胞归巢效率的机制研究

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中华血液学杂志 2009年第2期30卷 97-102页

作者：代红胜高静韬张彤雯杨舟车永哲郑以州中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 南开大学医学院

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）α在调节造血干／祖细胞（HS／PC）归巢中的增效作用及其机制。方法将荧光染料CFSE标记的脐血CD34^＋细胞移植入接受照射（对照组）或联合TNFα预处理（实验组）的BALB／c受鼠。移植后20h，采用流式细胞术（... 详细信息

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）α在调节造血干／祖细胞（HS／PC）归巢中的增效作用及其机制。方法将荧光染料CFSE标记的脐血CD34^＋细胞移植入接受照射（对照组）或联合TNFα预处理（实验组）的BALB／c受鼠。移植后20h，采用流式细胞术（FACS）检测脐血CD34^＋细胞在BALB／c受鼠中的分布（外周血、肝脏、肺脏）与归巢（骨髓、脾脏）特征，计算其相应的归巢效率；酶联免疫吸附实验（ELISA）检测BALB／c受鼠血清基质衍生因子（SDF）-1α水平；FACS检测TNFα预处理前、后脐血CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平的变化；免疫组化法检测BALB／c受鼠骨髓及脾脏组织切片中SDF-1α的表达水平。结果脐血CD34^＋细胞主要归巢于BALB／c受鼠骨髓和脾脏；经TNFα预处理的实验组BALB／c受鼠骨髓归巢率[（0．65±0．13）％]显著高于对照组[（0．30±0．09）％，P〈0．01]；但TNFα预处理同时显著抑制脐血CD34^＋细胞归巢于BALB／c受鼠脾脏（P〈0．01）；不同剂量的TNFα预处理不影响受鼠血清SDF-1α水平；新鲜分离的脐血CD34^＋细胞与不同浓度TNFα共孵育18h后，其表面CXCR4表达水平并无明显变化；但TNFα预处理受鼠骨髓龛组成细胞SDF—1α表达增高，且脾脏红髓区小梁动脉和小梁静脉内皮细胞SDF-1d表达增高。结论TNFα通过提升骨髓龛SDF-1α浓度梯度促进HS／PC归巢于骨髓，这一发现将有助于为临床提供可行性HS／PC归巢增效剂。

关键词：造血干细胞受体 CXCR4 归巢肿瘤坏死因子

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膜结合型干细胞因子促进白血病细胞K562的增殖和集落形成

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第1期16卷 6-11页

作者：王大刚郑国光种靖慧马翠花林永敏吴克复中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-SCF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-SCF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进... 详细信息

目的:探讨膜结合型干细胞因子(membrane-bound stem cell factor,m-SCF)在白血病细胞中的作用。方法:克隆并构建携可溶型干细胞因子(soluble stem cell factor,s-SCF)前体的真核表达质粒pTARGET-s,采用Overlap PCR法去除外显子6序列,进一步构建m-SCF的表达质粒pTARGET-m,DNA测序鉴定。通过脂质体介导分别将上述载体和空载体pTARGET转染白血病K562细胞,用G418筛选稳定表达细胞株,并用RT-PCR、Western blotting法鉴定。通过CCK-8细胞增殖实验以及集落形成实验观察不同细胞株体外增殖特点。结果:成功构建了s-SCF和m-SCF的真核表达载体,获得了稳定转染细胞株K562-V、K562-S、K562-M。U底培养条件下,K562-M增殖能力明显高于K562-V和K562-S(均P<0.01)。K562-M集落形成率显著高于K562-V和K562-S(均P<0.01),且集落形态大于其他两种细胞。结论:m-SCF与C-kit之间的并置性作用显著促进白血病细胞的增殖。

关键词：膜结合型干细胞因子 C-kit 白血病并置性作用

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阿糖胞苷增强白血病细胞B7分子表达及促进双功能抗体对靶细胞的杀伤

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第5期16卷 447-451页

作者：杨铭范冬梅高瀛岱赵英新周圆许元富纪庆王金宏熊冬生杨纯正中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用。方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经... 详细信息

目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用。方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经Ara-C刺激不同时间后B7-1、B7-2分子的表达,RT-PCR方法检测B7-1mRNA、B7-2mRNA的表达,MTT法检测经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞对T淋巴细胞增殖的影响。CytoTox96非放射性细胞毒性分析检测Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体对人外周血淋巴细胞杀伤K562和K562/A02靶细胞的影响。结果:经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较对照组明显升高;MTT结果显示,经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞能促进T淋巴细胞增殖;Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体在0.39:1～25:1效靶比范围内,随着效靶比的升高,介导T淋巴细胞对K562和K562/A02细胞的杀伤率随之提高,对高表达Pgp的耐药K562/A02细胞尤为明显。结论:Ara-C可上调白血病细胞B7分子的表达,从而增强anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用。

关键词：阿糖胞苷白血病细胞 anti-CD3/anti-Pgp B7-1 B7-2 T淋巴细胞

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Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的可溶性表达、纯化及活性测定

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生物工程学报 2009年第4期25卷 580-586页

作者：谢印良谷岳黄蕊李雪霞杜雪王金宏熊冬生杨纯正许元富中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学总医院天津300020

本研究旨在克隆和表达人血管内皮生长因子受体-1胞外Ⅲ区蛋白,并测定其生物学活性。应用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞中克隆Flt-1胞外Ⅲ区基因片段,经测序鉴定后再克隆到原核表达载体pAYZ中,构建出的表达载体pAYZflt-1Ⅲ转化大肠杆菌16C9... 详细信息

本研究旨在克隆和表达人血管内皮生长因子受体-1胞外Ⅲ区蛋白,并测定其生物学活性。应用RT-PCR法从人脐静脉内皮细胞中克隆Flt-1胞外Ⅲ区基因片段,经测序鉴定后再克隆到原核表达载体pAYZ中,构建出的表达载体pAYZflt-1Ⅲ转化大肠杆菌16C9后,用低磷培养基诱导表达目的蛋白;采用E-tag亲和层析柱纯化目的蛋白;用SDS-PAGE、Western blotting和BCA法对其进行定性、定量检测鉴定;用ELISA、损伤愈合试验和Transwell法检测靶蛋白生物学活性。克隆的Flt-1胞外Ⅲ区基因经测序鉴定正确。所构建的pAflt-1Ⅲ表达载体经低磷培养基诱导后高表达出可溶性Flt-1胞外Ⅲ区蛋白,产量约为1.1mg/L;ELISA结果显示该蛋白可以结合VEGF165,并表现为剂量依赖性,其与配体结合的解离常数Kd为1.180pmol/L。损伤愈合试验和Transwell结果显示该蛋白可以抑制VEGF165(50ng/ml)和bFGF(100ng/mL)诱导的脐静脉内皮细胞的迁移,并呈剂量依赖性。这将为今后开展人flt-1基因Ⅲ区的功能研究及其单抗研制奠定了实验基础。

关键词：血管内皮生长因子受体-1 血管新生血管内皮生长因子165 克隆单抗

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