检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

野生动物源性传染性人兽共患病作为新发传染病已经成为威胁人类健康的重要因素。对人类健康造成了巨大的全球负担，其确切程度尚难统计。作者介绍了新发对传染病的种类，并对流行病学和新发传染病与野生动物的关系进行了详细的分析，同... 详细信息

野生动物源性传染性人兽共患病作为新发传染病已经成为威胁人类健康的重要因素。对人类健康造成了巨大的全球负担，其确切程度尚难统计。作者介绍了新发对传染病的种类，并对流行病学和新发传染病与野生动物的关系进行了详细的分析，同时，还对新发传染病的防治作了展望。

关键词：新发传染病流行病学野生动物

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Dkk3转基因模型

Dkk3转基因模型

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：吕丹冯娟赵海平张丽张伟董伟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的为在体内研究Dkk3对心脏功能的影响而建立心脏特异的Dkk3转基因小鼠。背景WNT家族WNT1、WNT3a、WNT8等成员对心脏发育具有重要的作用,Dkk3作为Wnt通路拮抗剂Dickkopf(Dkk)家族成员之一,目前发现其与肿瘤发生发展,细胞保护、凋亡等... 详细信息

目的为在体内研究Dkk3对心脏功能的影响而建立心脏特异的Dkk3转基因小鼠。背景WNT家族WNT1、WNT3a、WNT8等成员对心脏发育具有重要的作用,Dkk3作为Wnt通路拮抗剂Dickkopf(Dkk)家族成员之一,目前发现其与肿瘤发生发展,细胞保护、凋亡等病理进程关系密切,但对于Dkk3对心脏及心血管系统的生物学功能所知甚少,本研究特建立心脏特异的Dkk3转基因小鼠,为研究Dkk3对心脏功能的影响提供病理模型工具。方法利用基因克隆技术,构建α-MHC-m-Dkk3表达载体,经酶切及序列测序鉴定后,通过显微注射将制备好的片段注入受精卵,将注射后存活的受精卵移入ICR假孕母鼠,产下的仔鼠经聚合酶链反应(PCR)筛选出整合有外源目的基因的阳性转基因鼠;对转基因小鼠心脏组织RNA行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及RNA印迹(Northern blot)分析,检测Dkk3在转基因小鼠心脏中的表达水平;对转基因小鼠心脏进行超声波分析,观察转基因小鼠心脏结构形态及功能的变化情况;利用光镜观察转基因小鼠心脏整体结构形态及心肌细胞、胶原纤维等显微结构的改变;利用光镜观察转基因小鼠左心房及左心室等部位心肌纤维、肌质网及线粒体等超微结构的改变。结果重组质粒α-MHC-m-Dkk3中α-MHC启动子及Dkk3 cDNA序列正确,假孕鼠所产仔鼠经PCR检测,检出15只首建鼠;依RT-PCR和Northern blot分析结果筛出高、中、低不同表达水平的3个首建鼠用于其他实验研究;超声波检查发现Dkk3于心脏中过表达可引起转基因小鼠左心室心壁变厚,左心室心腔缩小,心重指数增加,射血分数增加,心肌收缩力增强等改变;光镜观察转基因小鼠整体心脏HE、Masson染色,可见左心室心腔及心肌细胞间间隙变小,心肌细胞增大等改变;电镜观察转基因小鼠心脏超微结构发现其心肌纤维排列轻度紊乱,肌质网轻度扩张,线粒体有增生等改变。结论 Dkk3对心脏的正常生理功能具有重要的影响,α-MHC-m-Dkk3转基因小鼠系的建立为深入研究Dkk3对心脏功能的影响提供了病理模型。

关键词： Dkk3转基因心脏模型

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19种抗禽类IgY多克隆抗体的制备和标记

19种抗禽类IgY多克隆抗体的制备和标记

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：杨帆林树柱刘先菊秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的本课题的主要目标是纯化与人类关系密切的禽类一级抗体作为抗原,制备HRP-标记的抗多种二级抗体,建立多种动物血清学检测体系。以解决动物病原血清学检测体系不完备的问题。方法采集了19种与人类关系密切的禽类蛋或血清,用水稀释法,H... 详细信息

目的本课题的主要目标是纯化与人类关系密切的禽类一级抗体作为抗原,制备HRP-标记的抗多种二级抗体,建立多种动物血清学检测体系。以解决动物病原血清学检测体系不完备的问题。方法采集了19种与人类关系密切的禽类蛋或血清,用水稀释法,HiTrap IgY Purification HP免疫亲和层析法,PEG沉淀,阴离子交换层析,硫酸铵分级沉淀法等纯化了不同鸟类的IgY,并用纯化的IgY作为抗原制备抗血清。Protein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG。使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果应用改良的硫酸铵沉淀法纯化获得鹅、鸬鹚、鸵鸟、富贵鸟、鸽子、大雁IgY。应用嗜硫性亲和层析和无机盐沉淀法纯化获得孔雀、鹌鹑、贵妃鸡、夜鹭、草鹭IgY。应用切胶法获得赤嘴潜鸭、燕鸥、长脚鹬、虎皮鹦鹉、翘鼻麻鸭、麻雀IgY。共19种鸟类的IgY。本研究制备了17种辣跟过氧化物酶标记的兔抗禽IgY抗体。用纯化的鸬鹚IgY、鸽子IgY、鹌鹑IgY、鹅IgY、草鹭IgY作抗原,制备的抗血清与未纯化卵黄样品的western blotting分析,形成特异的重链和轻链条阳性条带,具有很高的特异性。用过碘酸钠法标记兔抗禽IgY抗体,获得了HRP标记的抗体,用直接ELISA方法检测抗体的最适工作浓度。兔抗草鹭IgY-HRP、兔抗鹌鹑IgY-HRP、兔抗麻雀IgY-HRP、兔抗鸽子IgY-HRP、兔抗大雁IgY-HRP的最适ELISA工作浓度为1:1000。兔抗鸵鸟IgY-HRP、兔抗夜鹭IgY-HRP、兔抗鸬鹚IgY-HRP的ELISA最适工作浓度可以达到1:10000。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY-IgG酶标抗体。为鸟类的血清学检测体系建立了初步资源。

关键词：新发传染病禽类 IgY 抗IgY HRP

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FKBP52对小鼠前列腺发育的影响

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中国比较医学杂志 2013年第6期23卷 63-66,I0010,F0003页

作者：邵思源邓然杨志伟雍伟东中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的通过FKBP52基因敲除小鼠模型探索FKBP52在小鼠前列腺发育过程中的作用。方法分别对胚胎第17.5天、新生的和出生后3周的野生型和FKBP52基因敲除小鼠的前列腺进行切片HE染色,观察不同发育时期里野生型和FKBP52基因敲除小鼠前列腺发育... 详细信息

目的通过FKBP52基因敲除小鼠模型探索FKBP52在小鼠前列腺发育过程中的作用。方法分别对胚胎第17.5天、新生的和出生后3周的野生型和FKBP52基因敲除小鼠的前列腺进行切片HE染色,观察不同发育时期里野生型和FKBP52基因敲除小鼠前列腺发育的异同。结果 (1)小鼠前列腺发育的起始不依赖于FKBP52基因的参与;(2)随着胚胎的发育,FKBP52在雄鼠前列腺发育中的作用逐渐显现出来,即FKBP52的缺失会导致前列腺叶发育受阻,最终不能形成成熟的前列腺。结论 FKBP52在小鼠前列腺的发育过程中具有重要作用,它不参与前列腺的发育起始过程,但其缺失会导致前列腺发育受阻,即不能形成成熟的前列腺。

关键词： FKBP52 前列腺发育

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SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较

SW1990和Capan-2红色荧光标记胰腺癌移植肿瘤模型的建立和比较

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：李小颖苏卫张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立稳定表达红色荧光蛋白基因的人胰腺癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种新的肿瘤动物模型。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-RFP-NEO转染人胰腺癌细胞SW1990和Capan-2,经梯度浓度G41... 详细信息

目的建立稳定表达红色荧光蛋白基因的人胰腺癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长及抗肿瘤药物的药效评价建立一种新的肿瘤动物模型。方法以Lipofectamine 2000介导chickenβ-actin-RFP-NEO转染人胰腺癌细胞SW1990和Capan-2,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达红色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养。BALB/CA-nu裸鼠皮下接种1×10～6个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像系统观察肿瘤的生长情况。结果获得了稳定表达RFP的两种不同的人胰腺癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长动态过程,并且SW1990肿瘤细胞的生长速度较Capan-2细胞快。结论用红色荧光蛋白标记的人胰腺癌细胞建立的裸鼠肿瘤模型为胰腺癌的研究和相关药物筛选提供了可进行荧光影像活体、动态分析的动物模型。

关键词：人胰腺癌细胞红色荧光蛋白活体荧光成像系统

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绿色荧光蛋白转基因小鼠的生理生化指标的研究

绿色荧光蛋白转基因小鼠的生理生化指标的研究

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第九届中国实验动物科学年会（2010新疆）

作者：贺晓玉何君徐艳峰秦超高虹中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的测定绿色荧光蛋白转基因小鼠不同年龄段的生理生化、组织病理学等方面的指标,为该品种转基因小鼠应用于毒理学等领域研究提供理论依据。方法定期测定不同年龄段(4-6周龄,6-8周龄,9-12周龄,13-14周龄)241只绿色荧光蛋白转基因(GFP)... 详细信息

目的测定绿色荧光蛋白转基因小鼠不同年龄段的生理生化、组织病理学等方面的指标,为该品种转基因小鼠应用于毒理学等领域研究提供理论依据。方法定期测定不同年龄段(4-6周龄,6-8周龄,9-12周龄,13-14周龄)241只绿色荧光蛋白转基因(GFP)小鼠和对照组C57BL/6J小鼠的体重和摄食量,对上述两种动物定期取血,测定血生化及血液学指标,对动物进行大体解剖,计算主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺,性腺)的脏器系数并进行组织病理学检测。结果 1.体重和摄食量:4-5周龄的GFP小鼠,其体重和摄食量明显低于对照组,具有极显著性差异(P<0.01);6-11周龄的GFP小鼠与对照组相比,没有统计学差异。2.血常规测定:6-8周龄,9-12周龄的GFP小鼠,其红细胞计数(RBC)明显低于对照组,6-8周龄的GFP小鼠,其血红蛋白(HGB)明显低于对照组,具有极显著性差异(P<0.01)。9-12周龄,13-14周龄的GFP小鼠,其白细胞计数(WBC)明显高于对照组,具有极显著性差异(P<0.01)。3.血生化测定:6-8周龄,9-12周龄,13-14周龄的GFP小鼠,其尿酸(UA)值明显高于对照组,具有极显著性差异(P<0.01)。6-8周龄,9-12周龄的GFP小鼠,其总蛋白(TP),白蛋白(ALB)明显低于对照组,具有极显著性差异(P<0.01)。其它检测指标如肌酸激酶(CK),天冬氨酸转氨酶(AST),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等,GFP小鼠与对照组比较没有统计学差异。4.脏器系数:6-8周龄,9-12周龄的GFP小鼠,其胸腺的脏器系数明显低于对照组,差异具有极显著性(P<0.01);9-12周龄,13-14周龄的GFP小鼠,其肝脏脏器系数明显高于对照组,差异具有极显著性,(P<0.01)。5.病理检测:6-8周龄有部分GFP小鼠胸腺发育不良,其它受检脏器和其它年龄段动物未见明显病理改变。结论 1.绿色荧光蛋白转基因小鼠与对照组C57BL/6J小鼠在体重(4周龄)、摄食量(4-5周龄)、血常规(红细胞计数RBC、白细胞计数WBC、血红蛋白HGB)、血生化(尿酸UA、总蛋白TP、白蛋白ALB)、脏器系数(胸腺,肝脏)等指标上存在明显差异,但是其值均在在正常范围内。2.绿色荧光蛋白转基因小鼠在6-8周龄有部分小鼠胸腺发育不良。

关键词：绿色荧光蛋白转基因小鼠血液学血生化组织病理

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实验动物病原菌的一体化蛋白芯片检测方法

实验动物病原菌的一体化蛋白芯片检测方法

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：林树柱张丽芳刘星马春梅高凯刘先菊李万波张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的制备实验动物小鼠需检测病原菌的多组特异性抗原,并制作成蛋白芯片,为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供基础。方法通过western blot方法选择病原菌的特异性抗原,并利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶回收的方法制备选定的抗原,利用... 详细信息

目的制备实验动物小鼠需检测病原菌的多组特异性抗原,并制作成蛋白芯片,为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供基础。方法通过western blot方法选择病原菌的特异性抗原,并利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶回收的方法制备选定的抗原,利用芯片点样仪将回收的抗原按照预先设定的矩阵点在氨基化处理过的玻片上,制备蛋白芯片,芯片先与小鼠阳性血清杂交,再与辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG杂交,DAB显色,通过扫描及软件分析,获得检测结果。结果通过对比western blot结果,伤寒沙门氏菌、嗜肺巴氏杆菌、假结核耶尔森菌和念珠状链杆菌每种病原菌选定了五组特异性较好的抗原,凝胶回收制备了选定的所有抗原,制作了蛋白芯片,分别与免疫伤寒沙门氏菌、嗜肺巴氏杆菌、假结核耶尔森菌和念珠状链杆的小鼠阳性血清杂交后,扫描结果显示,芯片上对应抗原均显示了很强的阳性信号,并具有良好的特异性。结论制备了可以同时检测几种细菌的蛋白芯片,为建立一体化的实验动物病原微生物检测方法提供了基础。

关键词：实验动物病原菌抗原蛋白芯片一体化检测

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cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠模型的比较分析

cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠模型的比较分析

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：冯娟董伟张丽吕丹赵海平全雄志张伟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的比较cTnT和cTnT转基因小鼠,筛选肥厚型心肌病和扩张型心肌病的重要修饰基因。方法 M型超声心动图检测cTnT和cTnT转基因小鼠心脏的结构和功能。病理检测心脏组织学。透射电镜检测心脏的超微结构。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的... 详细信息

目的比较cTnT和cTnT转基因小鼠,筛选肥厚型心肌病和扩张型心肌病的重要修饰基因。方法 M型超声心动图检测cTnT和cTnT转基因小鼠心脏的结构和功能。病理检测心脏组织学。透射电镜检测心脏的超微结构。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的定位。基因表达芯片分析cTnT和cTnT转基因小鼠心脏的基因表达差异,RT-PCR验证基因芯片分析结果。结果 cTnT转基因小鼠显示室壁增厚,心腔缩小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化,心肌纤维变粗;射血分数和短轴缩短率增加,左室容积显著下降。cTnT转基因小鼠显示室壁变薄,心室扩张,间质纤维化发,心肌纤维变细,部分溶解;射血分数和短轴缩短率下降,左室容积显著增加。突变的cTnT蛋白在cTnT和cTnT转基因小鼠心肌细胞的肌小节中分布不同。基因表达芯片分析显示1200个基因表现出不同的调控。RT-PCR验证表达改变的基因,包括肌小节蛋白基因,细胞骨架蛋白基因,钙调节相关蛋白基因,离子通道蛋白基因,细胞外基质基因,信号传导相关基因和未知基因等。结论 cTnT和cTnT突变蛋白的表达导致小鼠HCM和DCM两种相反的病理表型。在相同的遗传背景下,通过全基因表达芯片发现多种基因在HCM和DCM心脏中有相反的表达调控。其中有Gas5、Riok1、Ask1、Meox1、Ryk、Dkk3和Wif-1等细胞外因子或表面受体有可能是控制心肌细胞向相反方向分化的重要修饰基因,为进一步认识心脏生长发育和心肌病的发病机制提供线索。

关键词：心肌肌钙蛋白T 基因芯片转基因模型修饰基因

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cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：冯娟董伟全雄志张晓娟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立cTnT扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,Reahime PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting... 详细信息

目的建立cTnT扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,Reahime PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,组织学和电镜检测cTnT转基因小鼠心脏的病理改变。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的定位。超声心动图检测cTnT转基因小鼠心脏的结构和功能。记录cTnT转基因小鼠的生存状况。逆转录PCR检测cTnT转基因小鼠的心脏肥大分子标志物。结果建立了3个系的cTnT转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnT的表达水平是内源性cTnT的1.5～2.0倍。cTnT转基因小鼠心脏组织学检测显示,室壁变薄,心室扩张,间质纤维化。电镜检测显示肌纤维变细,部分溶解。免疫组织化学检测显示,突变的cTnT蛋白聚集在cTnT转基因小鼠心脏的肌小节中。M型超声心动图检测显示,左室收缩末期内径和左室舒张末期内径明显增加58.3%和27.8%,左室收缩期容积和左室舒张期容积显著增加191.2%和75.9%,射血分数和短轴缩短率分别降低39.9%和45.4%。从2月龄到8月龄,转基因小鼠左室收缩末期容积和左室舒张末期容积增加2倍左右,EF%降低36.7%,FS%降低39.7%。4月龄后转基因小鼠出现早期死亡,至8月龄早期死亡率达11.1%。心脏肥大的分子标记物检测显示Nppb表达增加29%,Actal增加4倍,而Atp2a2降低58%。结论 cTnT转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnT转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 基因突变扩张型心肌病转基因模型

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PDGF-CCK转基因小鼠的建立及对代谢影响的初步研究

PDGF-CCK转基因小鼠的建立及对代谢影响的初步研究

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：刘学丽杜静董伟全雄志秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

前言胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)是一种广泛存在于胃肠道和中枢神经系统的脑肠肽,具有多种生理学功能。作为在脑内含量最丰富的脑肠肽之一,CCK在神经系统内参与了多种生理过程并发挥着重要的功能,如抑制进食、抗焦虑、镇痛、调节... 详细信息

前言胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)是一种广泛存在于胃肠道和中枢神经系统的脑肠肽,具有多种生理学功能。作为在脑内含量最丰富的脑肠肽之一,CCK在神经系统内参与了多种生理过程并发挥着重要的功能,如抑制进食、抗焦虑、镇痛、调节血压和增强记忆等。但是,迄今为止人们对CCK在脑中发挥作用的具体机制还不清楚;对CCK在脑中的许多功能还存在着很大的争论。目的为了更好的研究CCK在中枢神经系统的功能,本实验采用神经特异性启动子PDGF,建立了在神经系统特异性表达CCK的转基因小鼠并对CCK对小鼠摄食行为和体重的影响进行了初步探讨。结果我们通过扩增CCK cDNA编码区,克隆到含有神经特异性启动子PDGF的载体,构建了CCK转基因表达载体;酶切含有PDGF启动子、CCK目的片段、PolyA的片断进行显微注射,建立携带有CCK的转基因小鼠,通过鼠尾PCR的方法鉴定转基因首建鼠;采用WestemBlot方法鉴定CCK在脑内的表达;测量阳性鼠和同窝阴性鼠体重、血糖、血脂并进行统计学分析。结论我们得到了3只CCK阳性首建鼠,其中2首建鼠品系的鼠脑内CCK表达量比野生鼠明显增加。对各组小鼠进食进水量监测显示:给与正常饮食时,CCK降低了雄鼠摄食量,增加雌鼠摄食量;高脂饮食时,CCK增加了小鼠摄食量;对摄水量无显著影响。转基因小鼠体重低于阴性鼠,餐后血糖高于阴性鼠,血脂未发现显著差异。脑内CCK高表达可使小鼠消瘦,且血糖升高。实验结果初步显示,CCK对小鼠摄食行为有影响,是调节小鼠摄食和体重的一个重要神经肽。

关键词：胆囊收缩素中枢神经系统模型

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