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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：赵海平冯娟董伟吕丹李万波秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的观察YCZX02对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模... 详细信息

目的观察YCZX02对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模型组及YCZX02给药组（n=12）。将YCZX02（40mg/kg/d）放入动物饮水中,连续给药7个月。cTnT转基因小鼠在实验过程中有猝死,从给药开始记录各组的动物死亡数,七个月后用spss10.0统计软件进行生存率分析。每个月进行一次心脏超声检测,对左心室长轴M超结果进行分析,比较各组动物的心脏构型及心功能。给药7个月后,采用HE染色和Masson染色,光镜观察心脏的显微结构。RT-PCR法检测心脏缝隙连接蛋白Cx40、Cx43,心肌收缩蛋白MYL4、MYL7、MYH6、MYH7,钾离子通道kcnj3、kcnal以及钙调蛋白PLN、SLN表达水平的变化。结果连续7个月的超声检测显示,cTnT转基因小鼠出现进行性的左心室扩张及收缩功能障碍,并有猝死发生;drag2减轻了扩心病小鼠的左心室扩张,改善了心功能,并降低了死亡率。心脏HE及Masson染色显示,cTnT转基因小鼠有心肌细胞的不均匀肥大及间质胶原的增生,YCZX02改善了心脏的结构。RT-PCR结果显示cTnT转基因小鼠心脏缝隙连接蛋白Cx40的表达降低,心肌收缩蛋白MYL4、MYL7表达增加,钾离子通道kcnj3、kcnal表达升高,钙调蛋白SLN表达升高,Cx43、MYH6、MYH7、PLN的表达没有显著的变化。YCZX02提高了Cx40的表达,降低了MYLA、MYL7的表达,降低了kcnj3、kcnal、SLN的表达。结论 YCZX02对cTnT转基因扩张型心肌病小鼠有治疗作用,可能部分通过调节钙钾离子转运发生作用。

关键词： YCZX02 cTnTR141W转基因扩张型心肌病治疗

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肠道嗜性和神经嗜性SIV毒株Gp120序列变异特点的比对分析

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中国比较医学杂志 2014年第10期24卷 1-6,17页

作者：徐珮丛喆陈霆王卫薛婧骆杨吴小闲魏强北京协和医学院比较医学中心、中国医学科学院医学实验动物研究所、卫生部人类疾病比较医学重点实验室、国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的研究SIVmac239在不同中国恒河猴体内由于免疫压力出现的病毒Env区的变异进化情况。比对分析可形成AIDS相关肠病和脑病的SIV病毒其Gp120序列的差异及特点。方法四株SIVmac239感染晚期发病恒河猴PBMC中分离的病毒及两株神经嗜性SIVmac... 详细信息

目的研究SIVmac239在不同中国恒河猴体内由于免疫压力出现的病毒Env区的变异进化情况。比对分析可形成AIDS相关肠病和脑病的SIV病毒其Gp120序列的差异及特点。方法四株SIVmac239感染晚期发病恒河猴PBMC中分离的病毒及两株神经嗜性SIVmac251病毒,通过有限稀释分离培养病毒单克隆,提取病毒RNA后反转录,PCR扩增病毒gp120序列进行系统进化树分析。同时分析两组不同嗜性毒株Gp120氨基酸序列及糖基化位点的变化情况。结果 SIVmac239在四只恒河猴体内发生不同的变异进化。肠道嗜性毒株与神经嗜性毒株氨基酸序列的差异集中在V1和V4区,肠道嗜性毒株在V4区与一个糖基化位点的增加,而神经嗜性毒株的糖基化位点的变化都发生在保守区C1、C2和C3。结论 SIV肠道嗜性和神经嗜性的增强分别与包膜蛋白Gp120上V4区糖基化位点的增加和C1区的糖基化位点缺失相关,两种嗜性的差异并不表现在与嗜性形成有紧密联系的V3区上。

关键词： SIV Gp120 变异肠道嗜性神经嗜性糖基化位点

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24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

24-脱氢胆固醇还原酶基因转基因小鼠血生化指标分析

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实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会

作者：全雄志董伟曹兴水张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴... 详细信息

目的建立全身表达24-脱氢胆固醇还原酶基因(Dhcr24)转基因小鼠动物模型,研究该基因过表达对小鼠代谢的影响。方法RT-PCR法克隆小鼠Dhcr24基因,把该基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立Dhcr24转基因小鼠。PCR鉴定Dhcr24转基因小鼠的基因型,RT-PCR和Western Blot检测基因表达水平,血生化检测仪检测转基因小鼠血生化指标的改变。结果建立了2个不同表达水平的Dhcr24转基因小鼠品系,转入的Dhcr24基因在肝和脾组织中的表达高于内源的Dhcr24。血生化检测证实:乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)和血肌酐(SCr)较野生型小鼠明显降低,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和碱性磷酸酶(ALP)较野生型小鼠明显增加,并且Dhcr24转基因雌鼠的体重比野生型小鼠明显降低,均有显著差异。但Dhcr24转基因雄鼠各项指标与野生型小鼠相比没有显著差异。结论成功建立了全身表达Dhcr24转基因小鼠,并证实Dhcr24基因对雌性小鼠的体重和血生化指标,包括LDH,TP,Alb,SCr,HDL-c and ALP具有明显的影响。

关键词： 24-脱氢胆固醇还原酶转基因小鼠血生化指标

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阿尔茨海默病中miR-29c对APP表达调控的初步研究

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中国比较医学杂志 2011年第9期21卷 27-32页

作者：宗园媛朱华王海林徐艳峰马春梅代小伟黄澜李晓颖董伟张连峰秦川卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出... 详细信息

目的探讨microRNA29c(miR-29c)在阿尔茨海默病中的作用。方法采用了microarray芯片检测3月龄、6月龄APPswe/PSΔE9双转基因阿尔茨海默病小鼠大脑中microRNA表达情况并利用实时定量PCR验证结果可靠性,通过microRNA靶基因数据库预测选出与阿尔茨海默病相关的靶基因,构建miR-29c表达载体,将其转染SH-SY5Y及HEK-293T细胞,在高表达miR-29c的SH-SY5Y及HEK-293T细胞系中验证miR-29c对靶基因的调控作用。将靶基因APP mRNA的野生及突变3’UTR序列克隆到双荧光素酶报告基因载体,用双荧光素酶报告检测系统检测miR-29c与靶基因的结合位点。结果根据microRNA芯片结果筛选出在3、6月龄APPSWE/PS1ΔE9双转基因小鼠大脑表达均有差异的miR-29c,通过实时定量PCR证实miR-29c在3月、6月、9月龄小鼠中表达明显升高。通过microRNA靶基因数据库预测miR-29c可以调控阿尔茨海默病的靶基因APP,利用Western blot检测到高表达miR-29c的SH-SY5Y细胞及HEK-293T细胞中APP蛋白表达减少。将miR-29c表达载体与带有野生及突变APPmRNA的3’UTR的双荧光素酶报告载体共转染HEK-293T细胞,通过双荧光素酶检测系统检测未找到miR-29c与APP mRNA 3’UTR的结合位点。结论 miR-29c对APP表达的具有负向调控作用,但其调控位点可能不位于其3’UTR区域。

关键词： microRNA29c/miR-29c APP 阿尔茨海默病 APPswe/PSΔE9转基因小鼠

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过敏性哮喘动物模型在致敏、哮喘发作和气道高反应性等方面的应用研究

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中国比较医学杂志 2012年第9期22卷 1-7页

作者：张星东卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

过敏性哮喘的发病率呈上升趋势。使用了几十年的主要治疗药物肾上腺糖皮质激素副作用较大,因此发现好的预防和治疗方法成为迫切要解决的问题。动物模型是研究人类疾病的重要手段,但不少疑难病的发病机理不明确,因而制备的动物模型和人... 详细信息

过敏性哮喘的发病率呈上升趋势。使用了几十年的主要治疗药物肾上腺糖皮质激素副作用较大,因此发现好的预防和治疗方法成为迫切要解决的问题。动物模型是研究人类疾病的重要手段,但不少疑难病的发病机理不明确,因而制备的动物模型和人类疾病的相似度有差异。但Ⅰ型变态反应作为过敏性哮喘的发病机理是比较明确的,据此制备的动物模型和人类的哮喘就有很高的相近度,结果的可信度就较高。本文回顾了哮喘动物模型制备的基本方法和某些重要的细节。着重讨论了当今最常用的气道高反应性模型的优劣。如果综合运用不同特点的模型尤其是能观察记录哮喘发作全过程包括速发和迟发反应的模型,将可以更直接地探索哮喘发病过程和治疗药物。对气道重塑及基因敲除和转基因技术在动物模型中的研究和使用也做了一般性论述。动物模型将是一个有力的工具为最后有效地预防和治疗过敏性哮喘找到突破口。

关键词：模型动物过敏变态反应哮喘致敏气道激发气道高反应性

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猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)多次直肠暴露对机体细胞免疫的影响

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中国比较医学杂志 2014年第8期24卷 1-6页

作者：王卫刘克剑吴芳新丛喆陈霆魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的研究猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)多次直肠粘膜暴露对机体细胞免疫的影响。方法建立小剂量多次直肠粘膜暴露模型,测定实验猴的血浆病毒载量了解病毒复制水平,测定外周CD4+T细胞绝对数了解疾病进展情况,测定T细胞亚群和外周单个核细胞I... 详细信息

目的研究猴免疫缺陷病毒(SIVmac239)多次直肠粘膜暴露对机体细胞免疫的影响。方法建立小剂量多次直肠粘膜暴露模型,测定实验猴的血浆病毒载量了解病毒复制水平,测定外周CD4+T细胞绝对数了解疾病进展情况,测定T细胞亚群和外周单个核细胞IFN-γ分泌情况了解机体细胞免疫状况。结果小剂量SIVmac239病毒多次暴露能导致病毒通过直肠粘膜进入动物体内,诱导机体免疫系统出现变化,但未见SIVmac239典型感染。病毒多次直肠暴露诱导出特异性细胞免疫,但与普通病毒感染相比,水平较低。结论本研究明确了猴免疫缺陷病毒小剂量暴露对机体细胞免疫的作用,为HIV疫苗研究提供了基础信息。

关键词： SIVmac239 直肠粘膜暴露细胞免疫

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三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较

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中国比较医学杂志 2013年第4期23卷 1-4,I0001-I0002页

作者：李小颖马元武张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 国家中医药局人类疾病动物模型3级实验室北京100021

目的采用活体成像技术比较三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移情况,为研究肿瘤转移提供理想的动物模型以及活体分析方法。方法以荧光素酶(luciferase,Luc)作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1、66c14和4TO7中,经G418... 详细信息

目的采用活体成像技术比较三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移情况,为研究肿瘤转移提供理想的动物模型以及活体分析方法。方法以荧光素酶(luciferase,Luc)作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1、66c14和4TO7中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆并扩大培养。标记细胞稀释成1×107cells/mL,取0.1 mL进行乳腺原位及尾静脉接种BALB/c小鼠,制作小鼠乳腺原位和尾静脉移植瘤模型,比较三株细胞在小鼠体内生长及转移情况。结果获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆,将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠乳腺原位接种后7 d,均有肿瘤生长,接种后28 d,4T1细胞乳腺原位移植瘤最大,66c14细胞瘤体次之,4TO7细胞瘤体最小;接种后35 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小较一致,但4T1和66c14原位移植瘤均发生转移,其中4T1细胞较66c14细胞转移严重,而4TO7细胞未见转移;接种后42 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小无明显差别,而4T1和66c14细胞随天数的增加,移植瘤转移程度逐渐严重,4T1较66c14细胞转移更严重,呈广泛性转移,4TO7细胞仍未见转移。将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠尾静脉接种后7 d,小动物活体成像发现小鼠肺部均能检测到荧光,其中4T1细胞接种的小鼠肺部荧光信号最强,且小鼠陆续死亡;4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号次之;66c14细胞接种小鼠肺部荧光信号最弱。尾静脉接种后14 d,4TO7和66c14细胞随着观察天数的增加,转移程度逐渐严重,4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号较66c14细胞强且小鼠陆续死亡。结论乳腺原位自发转移模型较尾静脉转移模型更真实反应了肿瘤细胞在体的转移特性,且能完整地呈现肿瘤转移的全过程,可作为研究肿瘤转移的最理想模型。

关键词： 4T1小鼠乳腺癌细胞株 4TO7小鼠乳腺癌细胞株 66c14小鼠乳腺癌细胞株荧光素酶乳腺癌肿瘤模型

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布氏田鼠与BALB/c小鼠雄性间配偶选择偏好的差异比较

布氏田鼠与BALB/c小鼠雄性间配偶选择偏好的差异比较

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北京细胞生物学会2015年学术大会

作者：张曼张楠孙秀萍宋铭晶中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京l00021

目的：比较布氏田鼠与BALB/c小鼠配偶选择偏好的行为差异.方法：利用社会交互箱，将刺激鼠和配偶鼠分别放在两侧箱体的笼子内，实验鼠放入中间箱体，测试过程中记录布氏田鼠与BALB/c小鼠在配偶选择实验(总路程、接触配偶鼠和刺激鼠的时...

目的：比较布氏田鼠与BALB/c小鼠配偶选择偏好的行为差异.方法：利用社会交互箱，将刺激鼠和配偶鼠分别放在两侧箱体的笼子内，实验鼠放入中间箱体，测试过程中记录布氏田鼠与BALB/c小鼠在配偶选择实验(总路程、接触配偶鼠和刺激鼠的时间及次数、两侧箱子停留的时间及次数)的行为数据.结果：布氏田鼠接触配偶鼠和刺激鼠的时间均极显著高于BALB/c小鼠(P＜0.001)，并且接触配偶鼠的次数极显著高于BALB/c小鼠(P＜0.001)，接触配偶鼠的潜伏期极显著低于BALB/c小鼠(P＜0.001)，而接触刺激鼠的次数显著低于BALB/c小鼠(P＜0.05).结论：布氏田鼠对配偶表现出较高的倾向性，具有较强的配偶识别能力.

关键词：

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α-突触核蛋白A53T突变损伤小鼠认知功能

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中国比较医学杂志 2020年第5期30卷 7-13页

作者：王嫚诗张玲秦川丛斌国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021 河北省法医学重点实验室河北医科大学法医学院河北省法医分子鉴定协同创新中心石家庄050017

目的探索α-突触核蛋白A53T转基因小鼠认知功能,运动功能与焦虑样行为学的改变以及病理学变化特点。方法选用背景为C57BL/6的α-突触核蛋白A53T转基因小鼠作为实验组,同窝阴性小鼠为对照组。采用旷场及圆筒实验检测小鼠的焦虑状态;转棒... 详细信息

目的探索α-突触核蛋白A53T转基因小鼠认知功能,运动功能与焦虑样行为学的改变以及病理学变化特点。方法选用背景为C57BL/6的α-突触核蛋白A53T转基因小鼠作为实验组,同窝阴性小鼠为对照组。采用旷场及圆筒实验检测小鼠的焦虑状态;转棒及抓力实验评价小鼠的运动协调能力以及前肢张力;水迷宫及条件恐惧实验评价小鼠的认知能力。通过免疫组织化学染色法研究模型小鼠脑内病理特征;通过电镜观察模型小鼠脑内线粒体变化。结果与对照组比较,α-突触核蛋白A53T转基因小鼠运动距离增加,呈现过度活跃状态;对条件恐惧记忆的时间缩短,出现认知障碍;圆筒、转棒与抓力实验及水迷宫实验未见统计学差异。模型组小鼠黑质、纹状体、梨状皮层及海马的α-synuclein磷酸化水平增加,前额叶路易小体沉积,黑质纹状体α-synuclein沉积增多,黑质TH阳性细胞数量显著减少;与对照组比较,电镜观察模型组小鼠脑内线粒体嵴及其内容物不清,线粒体形态改变。结论突触核蛋白A53T转基因小鼠出现认知功能受损,并且早于运动障碍发生;病理特征表现为α-synuclein/LBs沉积于前额叶、皮层,黑质多巴胺能神经元缺失以及线粒体形态改变,可作为一种突触核蛋白相关认知障碍性疾病如路易氏体痴呆和帕金森病痴呆的动物模型。

关键词： A53T转基因小鼠动物模型行为学认知线粒体

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转基因表达心肌营养素(Cardiotrophin-1,CT-1)对痴呆小鼠认知行为的作用研究

转基因表达心肌营养素(Cardiotrophin-1,CT-1)对痴呆小鼠认知行为...

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2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师（学术）论坛

作者：王冬梅高凯吕丹张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的心肌营养素(Cardiotrophin-1,CT-1)作为一种多效细胞因子,在多种组织中表达。CT-1抗凋亡、抗氧化,对多种细胞具有保护作用或延缓疾病进程。在脑组织中CT-1具有一定的表达水平,但CT-1对神经退行性疾病的作用及机制研究甚少。本实验... 详细信息

目的心肌营养素(Cardiotrophin-1,CT-1)作为一种多效细胞因子,在多种组织中表达。CT-1抗凋亡、抗氧化,对多种细胞具有保护作用或延缓疾病进程。在脑组织中CT-1具有一定的表达水平,但CT-1对神经退行性疾病的作用及机制研究甚少。本实验构建脑组织特异的CT-1转基因小鼠,研究该基因是否可以改善APPswe/PS△E9阿尔茨海默症转基因小鼠的认知能力及其作用机制。

关键词：心肌营养素 Cardiotrophin-1,CT-1 基因表达

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