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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：靳亚西孙彩显高虹张连峰张丽中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的基于实时细胞分析技术评估胰腺癌细胞的药物敏感性,为胰腺癌个体化诊疗提供参考。方法选取SW1900、Capan-2、PANC-1三株人胰腺癌细胞系,选用盐酸吉西他宾和替吉奥胶囊两种胰腺癌治疗药物,接种24小时后分别梯度浓度给药,实时细胞分... 详细信息

目的基于实时细胞分析技术评估胰腺癌细胞的药物敏感性,为胰腺癌个体化诊疗提供参考。方法选取SW1900、Capan-2、PANC-1三株人胰腺癌细胞系,选用盐酸吉西他宾和替吉奥胶囊两种胰腺癌治疗药物,接种24小时后分别梯度浓度给药,实时细胞分析技术监测给药前后细胞生长曲线,计算药物对胰腺癌细胞的生长抑制率(IC50)。同时,细胞培养板内给药,行AO/EB染色和激光共聚焦观察。结果药物作用72小时,同一药物对不同细胞抑制率不同。盐酸吉西他宾对SW1900、Capan-2、PANC-1的IC50分别为1.69μmol/L、10.05μmol/L、12.74μmol/L。替吉奥胶囊对SW1900、Capan-2、PANC-1的IC50分别为180.29μmol/L、765.70μmol/L、95.57μmol/L。AO/EB染色验证ICS0真实可靠。结论 SW1900及Capan-2可作为盐酸吉西他宾及替吉奥的对照,建立细胞模型,对药物进行体外筛选,为临床推广提供参考。

关键词：胰腺癌化疗药物实时细胞分析药物敏感性

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建立博来霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7衰老细胞模型

建立博来霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7衰老细胞模型

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：管博文杨银孟爱民中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的细胞衰老在老年性疾病发生发展过程中起重要作用,也成为治疗衰老相关疾病的重要靶点。本项实验通过博来霉素(BLM)诱导巨噬细胞衰老,建立细胞衰老模型并应用该模型观察衰老清除剂ABT263对衰老细胞的杀伤作用。方法首先用建立BLM诱导R... 详细信息

目的细胞衰老在老年性疾病发生发展过程中起重要作用,也成为治疗衰老相关疾病的重要靶点。本项实验通过博来霉素(BLM)诱导巨噬细胞衰老,建立细胞衰老模型并应用该模型观察衰老清除剂ABT263对衰老细胞的杀伤作用。方法首先用建立BLM诱导RAW264.7细胞衰老模型。在24孔板中,每孔接种2×10～4细胞,置于37℃培养箱培养24h,分别向每孔加入BLM调至0,12.50,25.00,50.00,100.00,200.00μg/mL,继续培养72h,用β-gal试剂盒进行染色,显微镜下观察统计衰老百分比。之后测定ABT263对RAW264.7增殖能力的影响,将细胞分为veh组和ABT263组,接种在96孔板,每孔接种4000个,置于37℃培养箱培养48h。veh组吸除上清加入0.2%DMSO的DMEM,继续培养24h。ABT263组吸除上清分别加入ABT263浓度为0,3.125,6.25,12.5,25,50μM的DMEM。继续置于37℃培养箱中培养24h。随后采用MTT法测细胞生存率。最后测定ABT263对衰老RAW264.7细胞的细胞毒作用。将细胞分为BLM+veh组和BLM+ABT263组。接种在24孔板上,每孔接种4×104个细胞,置于37℃培养箱培养24h。之后每孔加入BLM,调成50μg/mL培养72h。之后吸除上清,BLM+veh组加入0.2%DMSO的DMEM,培养24h。BLM+ABT263组分别加入ABT263浓度为3.1256.25,12.5,25,50μM的DMEM溶液,培养24h。随后采用MTT法测细胞生存率。结果 BLM诱导RAW264.7细胞出现衰老,分别为0.24%,18.79%,28.83%,46.01%,56.78%,57.21%,呈剂量依赖。测定ABT263对RAW264.7增殖能力影响的试验中将veh组的生存率设为100%,ABT263不同浓度组的生存率分别为109.22%、91.92%、88.64%、88.69%和10.74%。IC50=32.31μM。在测定ABT263对衰老RAW264.7细胞的细胞毒作用试验中将BLM+veh组的生存率设为100%,BLM+ABT263组的生存率按浓度由低到高分别为66.03%、54.42%、46.06%、32.78%和21.88%。IC50=8.580μM。结论 (1)BLM可以诱导RAW264.7细胞衰老,其中50μg/mL的BLM可最有效诱导出衰老,构建衰老细胞模型。可用于筛选清除衰老细胞的药物。(2)在给予低剂量Bcl-2抑制剂ABT263时,RAW264.7的生存率没有明显下降。当50μM的浓度时,细胞生存率明显降低,与veh组相比具有显著性差异。提示该模型能筛选清除衰老的药物。

关键词： ABT263 RAW264.7细胞衰老博来霉素

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细胞衰老与Ⅱ型糖尿病

细胞衰老与Ⅱ型糖尿病

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：党女孟爱民中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）是目前全球最常见的代谢综合征,流行病学资料显示全球约有8%的成年人患有T2DM。二型糖尿病人与同龄人相比,预期寿命平均缩短6年。有观点认为糖尿病人可能经历了一个提前衰老的过程。衰老是... 详细信息

Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）是目前全球最常见的代谢综合征,流行病学资料显示全球约有8%的成年人患有T2DM。二型糖尿病人与同龄人相比,预期寿命平均缩短6年。有观点认为糖尿病人可能经历了一个提前衰老的过程。衰老是器官或组织逐渐丧失功能的过程,而细胞衰老（cell senescence）是衰老的细胞学基础。细胞衰老是指细胞应激致细胞产生不可逆的永久性细胞周期停滞的状态,这些内外刺激包括端粒侵蚀、DNA损伤、氧化应激以及癌基因活化等等。研究发现,细胞衰老与糖尿病的关系是相当复杂而微妙,糖尿病造成的高糖、炎症微环境及脂毒性等促使细胞衰老并进一步累积,反之,细胞衰老由于永久性周期停滞直接引起胰岛β细胞功能障碍、脂质代谢障碍等细胞功能障碍、通过间接分泌衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype,SASP）介导慢性低水平炎症状态等,引起糖尿病及其并发症。Aguayo等人证明表达p16等衰老标志的β细胞,其胰岛素分泌功能有障碍,能导致类糖尿病样改变。此外,利用胰岛素受体拮抗剂S961饲喂C57BL/6J小鼠构建胰岛素抵抗模型,以及使用慢性内质网应激Ins2（Akita）小鼠模型,发现该两种模型在发生胰岛素抵抗等类糖尿病样病变的同时,p16、Igf1r、Bambi等β细胞衰老标志物的mRNA表达明显上调,证明胰岛素抵抗也可以导致β细胞衰老。也就是说,细胞衰老可能是糖尿病发生发展的关键环节,既是糖尿病代谢改变和组织损伤的后果,又是造成糖尿病及其并发症的原因之一。因此,针对细胞衰老与糖尿病之间联系环节的治疗,有可能为糖尿病提供新的治疗策略。

关键词：细胞衰老 Ⅱ型糖尿病衰老相关分泌表型SASP 动物模型

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重症甲型H1N1流感病毒感染诱导小鼠胸腺凋亡萎缩

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中国免疫学杂志 2020年第14期36卷 1676-1679页

作者：王阳张须龙李枫棣安云庆刘波(指导) 曹彬(指导) 中日友好医院北京100000 首都医科大学北京100000 中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100000 山东省淄博市临淄区人民医院临床微生物科呼吸与危重症医学科淄博市呼吸感染与临床微生物重点实验室淄博255400

目的:探讨重症流感病毒感染介导的胸腺萎缩及其作用机制。方法:4~6周龄SPF级BALB/c小鼠滴鼻给予50μl TCID50甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(1×10^6个/ml),构建重症流感病毒感染小鼠模型;检测各感染时间小鼠体质量、胸腺大... 详细信息

目的:探讨重症流感病毒感染介导的胸腺萎缩及其作用机制。方法:4~6周龄SPF级BALB/c小鼠滴鼻给予50μl TCID50甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(1×10^6个/ml),构建重症流感病毒感染小鼠模型;检测各感染时间小鼠体质量、胸腺大小及重量;HE染色检测胸腺组织病理变化;流式细胞术检测胸腺内不同发育阶段T细胞数量及凋亡;原位TUNEL法检测胸腺细胞凋亡;细胞凋亡相关基因芯片和荧光定量PCR检测验证促凋亡和抗凋亡相关基因变化。结果:成功建立小鼠重症甲型H1N1流感病毒感染模型。感染2~3 d后小鼠胸腺萎缩变小,以胸腺皮质区萎缩为主,感染5~7 d皮质区完全消失。主要存在于皮质区的双阳性T细胞(CD4^+CD8^+),随感染过程进展逐渐减少直至消失。细胞凋亡,尤其是皮质区细胞凋亡增多是胸腺萎缩的重要原因。促凋亡相关基因表达增加,尤其Fas介导的细胞凋亡可能是胸腺皮质区细胞凋亡的重要机制。结论:重症流感病毒感染可诱导胸腺(尤其是皮质区)萎缩,FasL-Fas介导的细胞凋亡是胸腺萎缩的重要原因。

关键词：流感病毒胸腺萎缩细胞凋亡 Fas

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两种HSV-1及猴B病毒相关抗体测定方法的比较

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中国比较医学杂志 2010年第3期20卷 57-60,87页

作者：乔红伟佟巍蒋虹丛喆王卫魏强中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的以人单纯疱疹病毒（HSV-1）做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释,取1 mL接种于已经长成... 详细信息

目的以人单纯疱疹病毒（HSV-1）做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释,取1 mL接种于已经长成单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数,算出病毒悬液中每毫升所含蚀斑单位,即滴定出HSV-1的TC ID50。同时,用免疫荧光方法（IFA）对猴和人疱疹阳性血清进行滴定,得到其血清的效价。其次,用滴定出的病毒液分别与两种阳性血清体外中和后,接种到单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数。最后,计算出其蚀斑减少率。结果用1%甲基纤维素作覆盖层的蚀斑数量平均为10-5PFU,能形成115-116个/mL蚀斑,形状呈黍米大小的规则圆形,其蚀斑边缘清晰。IFA滴定的人HSV-1阳性血清与猴BV阳性血清的中和抗体均为1∶80。人HSV-1和猴BV两种阳性血清的空斑减少率均为100%。结论确定了利用1%甲基纤维素做为覆盖层可得到清晰可靠的蚀斑,由此方法检测到用人HSV-1可以代替猴B病毒,筛查猴B病毒抗体。且为将来进行药物筛选和中和实验中利用病毒空斑法建立方便、可靠的方法。

关键词：猕猴疱疹病毒1型人单纯疱疹病毒Ⅰ型空斑减少免疫荧光

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动物行为实验方法学研究的回顾与展望

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中国比较医学杂志 2018年第3期28卷 1-7页

作者：孙秀萍王琼石哲陈善广刘新民北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类动物模型三级实验室北京100021 中国医学科学院/北京协和医学院药用植物研究所北京100193 西南医科大学附属中医医院/中葡中医药国际合作中心/药学院四川泸州646000 湖南中医药大学长沙410208 中国航天员中心人因工程重点实验室北京100094

本文首次系统对动物行为实验方法学发展历史、主要行为实验方法学的国内外研究现状进行了综述,给出了相关定义和术语,并对动物行为实验方法学在神经精神领域、军事领域等的应用进行了展望,为基于动物行为实验的科学研究提供参考。

关键词：动物行为学方法学大小鼠非人灵长类

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实验动物准备对裸鼠移植瘤模型microPET 显像的影响

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中国比较医学杂志 2014年第2期24卷 57-62,69,F0003页

作者：周丽娜高凯李小颖梁颖张连峰吴宁中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院影像诊断科北京100021 中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院PET-CT 中心100021

目的探讨实验动物准备条件对18 F-FDG microPET 裸鼠移植瘤模型显像的影响,以选择最佳的实验动物准备条件.方法 36 只人表皮样癌细胞A431 裸鼠皮下移植瘤模型.随机分为6 组（6 只/组）;A 组：无禁食、室温（20 ～22）℃、无麻醉（注射1... 详细信息

目的探讨实验动物准备条件对18 F-FDG microPET 裸鼠移植瘤模型显像的影响,以选择最佳的实验动物准备条件.方法 36 只人表皮样癌细胞A431 裸鼠皮下移植瘤模型.随机分为6 组（6 只/组）;A 组：无禁食、室温（20 ～22）℃、无麻醉（注射18 F-FDG 后60 min 清醒状态）、尾静脉注射18 F-FDG;B 组：禁食（6 ～8）h、加温（30 ～32）℃、麻醉（吸入2%异氟烷麻醉）、尾静脉注射18 F-FDG;C 组：无禁食、加温、麻醉、尾静脉注射18 F-FDG;D组：禁食、室温、麻醉、尾静脉注射18 F-FDG;E 组：禁食、加温、无麻醉、尾静脉注射18 F-FDG;F 组：禁食、加温、麻醉、腹腔注射18 F-FDG.注射18 F-FDG 约1 h 后,行microPET 显像,测量皮下移植瘤、颈部肌肉、棕色脂肪、脑、肝脏、肾脏、心脏、哈氏腺最大每克组织摄取率（%ID/gmax ）.扫描前裸鼠均测血糖.结果（1）B 组、C 组、F 组裸鼠的血糖水平与肿瘤摄取之间均呈直线负相关.（2）棕色脂肪：A 组摄取最高（8.03 ±1.29）,B 组摄取降低71.98%（P ＝0.000）.颈部肌肉：A 组摄取最高（16.07 ±5.20）,B 组摄取降低最多达81.84%（P ＝0.000）.各组脑、心脏、肝脏、肾脏、哈氏腺摄取差异无统计学意义.（3）A 组皮下移植瘤/组织或器官的摄取率最低.B 组移植瘤/颈部肌肉,移植瘤/肝脏,移植瘤/棕色脂肪的摄取率较A 组分别升高6.50 倍、1.29 倍、4.76 倍（P 均＜0.05）,肿瘤与组织或器官的图像对比度明显改善.（4）第1 次microPET 显像,尾静脉注射与腹腔注射皮下移植瘤摄取值差别无统计学意义（P ＝0.364）.第2 次microPET 显像,腹腔注射腹腔可见不同程度显像剂浓聚,其他正常组织、器官及皮下移植瘤的摄取均减低.腹腔注射方式,两次皮下移植瘤的摄取值差异有统计学意义（P ＝0.025）.结论实验动物准备明显影响18 F-FDG 在裸鼠正常组织的分布及皮下移植瘤的摄取.禁食、加温、麻醉及尾静脉注射方式,可以改善肿瘤对18 F-FDG 的摄取,保证图像有较好的稳定性及可重复性.

关键词：异种移植,裸鼠氟脱氧葡萄糖正电子发射型断层摄影术,小动物实验动物准备

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三聚氰胺及三聚氰酸导致大鼠肾损伤的实验研究

三聚氰胺及三聚氰酸导致大鼠肾损伤的实验研究

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中国毒理学会第五次全国学术大会

作者：高虹马耀文何君代小伟董伟中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类比较医学重点实验室

目的观察不同剂量的三聚氰胺和三聚氰酸的混合物,连续28天给予幼年Wistar大鼠后,肾脏损伤及修复的情况。方法20日龄的清洁级Wistar大鼠48只,分为6组,分别给予不同剂量的三聚氰胺:三聚氰酸的混合物,300mg/kg:75 mg/kg,300mg/kg:150 mg/kg... 详细信息

目的观察不同剂量的三聚氰胺和三聚氰酸的混合物,连续28天给予幼年Wistar大鼠后,肾脏损伤及修复的情况。方法20日龄的清洁级Wistar大鼠48只,分为6组,分别给予不同剂量的三聚氰胺:三聚氰酸的混合物,300mg/kg:75 mg/kg,300mg/kg:150 mg/kg,,300mg/kg:300 mg/kg,, 400mg/kg:400 mg/kg,,500mg/kg:500 mg/kg及溶剂对照组,

关键词：三聚氰胺三聚氰酸大鼠结晶体

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IL-10在人骨髓间充质干细胞移植治疗食蟹猴脑缺血中的作用

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中国比较医学杂志 2009年第12期19卷 1-4,I0001,I0002页

作者：李加美朱华刘颖李秦徐艳峰黄澜马春梅冯铭卢姗安沂华赵春华王任直秦川卫生部人类疾病比较医学重点实验室中国医学科学院北京协和医学院比较医学中心北京100021 中国医学科学院实验动物研究所Motac合作实验室北京100021 中国医学科学院北京协和医院北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京100005 北京武警总医院北京100039

目的探讨食蟹猴脑缺血模型在人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stemcells,hBMSCs)移植后IL-10的表达及其对脑缺血损伤的保护作用。方法食蟹猴8只,在脑定位仪定位下,应用光化学法构建食蟹猴脑缺血模型,并将其... 详细信息

目的探讨食蟹猴脑缺血模型在人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived mesenchymal stemcells,hBMSCs)移植后IL-10的表达及其对脑缺血损伤的保护作用。方法食蟹猴8只,在脑定位仪定位下,应用光化学法构建食蟹猴脑缺血模型,并将其随机分为高剂量治疗组、低剂量治疗组和模型组,分别在脑缺血部位附近注射高、低密度的hBMSCs和生理盐水。手术后,通过影像学、神经功能评分及组织病理学观察对hBMSC的治疗效果进行评价。并应用原位细胞凋亡检测的方法观察脑缺血周围神经细胞的凋亡情况。应用免疫组织化学、RT-PCR以及real-time PCR法检测检测脑损伤周围IL-10的表达水平。结果与模型组相比,hBMSC治疗组损伤部位周围细胞凋亡明显减少,免疫组织化学显示IL-10阳性细胞的数量及染色强度均较模型组明显升高,IL-10在mRNA水平表达也明显升高。结论hBMSCs对食蟹猴脑缺血模型具有修复作用,其治疗机制可能与促进炎症抑制因子IL-10的表达有关。

关键词：人骨髓间充质干细胞脑缺血食蟹猴 IL-10

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利用实时细胞分析技术检测胰腺癌细胞药物敏感性

利用实时细胞分析技术检测胰腺癌细胞药物敏感性

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：靳亚西孙彩显高虹张连峰张丽中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的基于实时细胞分析技术评估胰腺癌细胞的药物敏感性，为胰腺癌个体化诊疗提供参考.方法选取SW1900、Capan-2、PANC-1三株人胰腺癌细胞系，选用盐酸吉西他宾和替吉奥胶囊两种胰腺癌治疗药物，接种24小时后分别梯度浓度给药，实时细... 详细信息

目的基于实时细胞分析技术评估胰腺癌细胞的药物敏感性，为胰腺癌个体化诊疗提供参考.方法选取SW1900、Capan-2、PANC-1三株人胰腺癌细胞系，选用盐酸吉西他宾和替吉奥胶囊两种胰腺癌治疗药物，接种24小时后分别梯度浓度给药，实时细胞分析技术监测给药前后细胞生长曲线，计算药物对胰腺癌细胞的生长抑制率(IC50).同时，细胞培养板内给药，行AO/EB染色和激光共聚焦观察.结果药物作用72小时，同一药物对不同细胞抑制率不同.盐酸吉西他宾对SW1900、Capan-2、PANC-1的IC50分别为1.69μmol/L、10.05μmol/L、12.74μmol/L.替吉奥胶囊对SW 1900、Capan-2、PANC-1的IC50分别为180.29μmol/L、765.70μmol/L、95.57μmol/***/EB染色验证IC50真实可靠.结论 SW1900及Capan-2可作为盐酸吉西他宾及替吉奥的对照，建立细胞模型，对药物进行体外筛选，为临床推广提供参考.

关键词：胰腺癌化疗药物实时细胞分析药物敏感性

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