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中国微循环学会神经变性病专业委员会第五届学术年会暨第二届北京国际神经变性病学术大会、北京神经变性病学会第一届学术会议

作者：史长华陈巍张玲秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的利用抗体芯片技术研究中药Ⅰ号方(PN-1)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠蛋白分子的差异表达,初步探讨其作用机制.方法将APP swe/PS1 ΔE9(PAP)的AD模型小鼠分为AD模型组(PAP),PN-1治疗组,相同月龄的正常野生型C57BL/6J小鼠作为空白对... 详细信息

目的利用抗体芯片技术研究中药Ⅰ号方(PN-1)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠蛋白分子的差异表达,初步探讨其作用机制.方法将APP swe/PS1 ΔE9(PAP)的AD模型小鼠分为AD模型组(PAP),PN-1治疗组,相同月龄的正常野生型C57BL/6J小鼠作为空白对照组(WT),PAP组和空白对照组每天给予双蒸水灌胃,给药组每天给予中药提取物灌胃,给药3个月后,利用Kinex TM Antibody Microarray 筛选差异表达蛋白,然后用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)进行分析,应用蛋白印迹法(Western blot)和免疫组化验证芯片结果.采用SPSS 20.0软件进行统计分析,采用独立样本t检验和校正t检验分析组间差异.结果与WT组相比,PAP组小鼠海马差异表达蛋白共66个,33个上调,33下调,其中caspase6和caspase9上调,PAXI,HSPB1下调;与PAP组相比,PN-1治疗组差异表达蛋白共65个,30个上调,35个下调,其中PAXI,caspase6和caspase9下降;VEGFR和AKT(ser)升高.IPA生物信息学分析得出PN-1可通过VEGF通路发挥作用;Western blot检测结果显示,与PAP组相比较,PN-1治疗组VEGFR和AKT磷酸化水平上调(P＜0.01),免疫组化结果显示,与PAP组相比较,PN-1治疗组caspase9下调(P＜0.01),CD105上调(P＜0.05)与芯片结果一致.结论 PN-1可通过VEGF信号通路直接或间接参与血管生成,并在神经元的修复过程中起重要作用.

关键词：阿尔茨海默病中药Ⅰ号方 Kinex TM Antibody Microarray

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长非编码RNA的功能及其在阿尔茨海默病中的作用

长非编码RNA的功能及其在阿尔茨海默病中的作用

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：史长华张玲秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs)是真核细胞中转录本长度大于200核苷酸的非编码RNA。lncRNAs作用机制众多,可在表观遗传、转录、转录后不同水平对靶基因表达进行调控,广泛参与生物体的各种生理及病理过程。lncRNAs的异常表... 详细信息

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNAs)是真核细胞中转录本长度大于200核苷酸的非编码RNA。lncRNAs作用机制众多,可在表观遗传、转录、转录后不同水平对靶基因表达进行调控,广泛参与生物体的各种生理及病理过程。lncRNAs的异常表达与肿瘤、心血管系统疾病、神经退行性疾病等的发生发展密切相关。在神经系统,lncRNAs表达丰富与其疾病状态表现出强相关性。近年来的研究表明,lncRNA参与阿尔茨海默病中β淀粉酶的的生成,突触损伤,神经营养因子的丢失,炎症,线粒体功能障碍,氧化应激等作用。本文就lncRNAs在阿尔茨海默病中的研究进展进行综述,以期为阿尔茨海默病的防治提供新的思路。

关键词：长链非编码RNA 阿尔茨海默病神经发育,突触可塑性

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巴马小型猪生殖毒性试验的基础数据研究

巴马小型猪生殖毒性试验的基础数据研究

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：张元慧高虹中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心 100021 北京市朝阳区潘家园南里5号

检测生殖毒性试验中巴马小型猪妊娠期的体重、生殖功能指标及胎猪的各项发育指标,为巴马小型猪的发育毒性研究提供参考数据,以期扩大非啮齿动物在生殖毒性试验中的选择范围,并在必要时替代犬或非人灵长类动物,为药物临床前试验提供新的... 详细信息

检测生殖毒性试验中巴马小型猪妊娠期的体重、生殖功能指标及胎猪的各项发育指标,为巴马小型猪的发育毒性研究提供参考数据,以期扩大非啮齿动物在生殖毒性试验中的选择范围,并在必要时替代犬或非人灵长类动物,为药物临床前试验提供新的研究思路.

关键词：药理学动物实验妊娠期生殖毒性

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狨猴人工辅助生殖技术及基因修饰模型研究进展

狨猴人工辅助生殖技术及基因修饰模型研究进展

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第八届北京实验动物科学国际论坛

作者：滕永康刘云波中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心100021北京市朝阳区潘家园南里5号

目前基因修饰水平的的趋于成熟为非人灵长类转基因动物制作创造了很多机遇，转基因狨猴因生物学特性、饲养成本、繁殖效率等方面的特定优势为干预和治疗人类疾病的的发展奠定了良好的基础。当然，也存在这不足之处。例如:一是，狨猴辅... 详细信息

目前基因修饰水平的的趋于成熟为非人灵长类转基因动物制作创造了很多机遇，转基因狨猴因生物学特性、饲养成本、繁殖效率等方面的特定优势为干预和治疗人类疾病的的发展奠定了良好的基础。当然，也存在这不足之处。例如:一是，狨猴辅助生殖技术的很多细节仍不成熟，如卵母细胞及胚胎的冻存复苏，胚胎的体外培养和移植效率等，使得研究者在获得转基因狨猴前需要很多的供体和受体猴，无形中加大了实验成本，增加了基因修饰狨猴研究的开展和普及难度，限制了基因修饰狨猴的研究发展。二是，目前狨猴转基因技术主要存在日本/美国等国家，国内对狨猴尤其是转基因狨猴的研究仍处在初步阶段，很多研究技术和方法仍需进一步验证和摸索，研究工作任重而道远。三是，由于具有生殖能力的胚胎干细胞和体细胞核移植尚未广泛应用在非人灵长类动物上，狨猴的转基因技术仍局限在慢病毒介导的方法上，外源基因的随机插入不能从根本上达到精确基因修饰效果，需要进一步研究和完善基因修饰方法。四是，据以往的报告，狨猴的胚胎成功移植率并不高，因此整个狨猴的ART各个环节，均有待进一步研究，提高。

关键词：实验用猴转基因育种人工辅助生殖技术基因修饰

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建立博来霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7衰老细胞模型

建立博来霉素诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7衰老细胞模型

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：管博文杨银孟爱民中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的细胞衰老在老年性疾病发生发展过程中起重要作用,也成为治疗衰老相关疾病的重要靶点。本项实验通过博来霉素(BLM)诱导巨噬细胞衰老,建立细胞衰老模型并应用该模型观察衰老清除剂ABT263对衰老细胞的杀伤作用。方法首先用建立BLM诱导R... 详细信息

目的细胞衰老在老年性疾病发生发展过程中起重要作用,也成为治疗衰老相关疾病的重要靶点。本项实验通过博来霉素(BLM)诱导巨噬细胞衰老,建立细胞衰老模型并应用该模型观察衰老清除剂ABT263对衰老细胞的杀伤作用。方法首先用建立BLM诱导RAW264.7细胞衰老模型。在24孔板中,每孔接种2×10～4细胞,置于37℃培养箱培养24h,分别向每孔加入BLM调至0,12.50,25.00,50.00,100.00,200.00μg/mL,继续培养72h,用β-gal试剂盒进行染色,显微镜下观察统计衰老百分比。之后测定ABT263对RAW264.7增殖能力的影响,将细胞分为veh组和ABT263组,接种在96孔板,每孔接种4000个,置于37℃培养箱培养48h。veh组吸除上清加入0.2%DMSO的DMEM,继续培养24h。ABT263组吸除上清分别加入ABT263浓度为0,3.125,6.25,12.5,25,50μM的DMEM。继续置于37℃培养箱中培养24h。随后采用MTT法测细胞生存率。最后测定ABT263对衰老RAW264.7细胞的细胞毒作用。将细胞分为BLM+veh组和BLM+ABT263组。接种在24孔板上,每孔接种4×104个细胞,置于37℃培养箱培养24h。之后每孔加入BLM,调成50μg/mL培养72h。之后吸除上清,BLM+veh组加入0.2%DMSO的DMEM,培养24h。BLM+ABT263组分别加入ABT263浓度为3.1256.25,12.5,25,50μM的DMEM溶液,培养24h。随后采用MTT法测细胞生存率。结果 BLM诱导RAW264.7细胞出现衰老,分别为0.24%,18.79%,28.83%,46.01%,56.78%,57.21%,呈剂量依赖。测定ABT263对RAW264.7增殖能力影响的试验中将veh组的生存率设为100%,ABT263不同浓度组的生存率分别为109.22%、91.92%、88.64%、88.69%和10.74%。IC50=32.31μM。在测定ABT263对衰老RAW264.7细胞的细胞毒作用试验中将BLM+veh组的生存率设为100%,BLM+ABT263组的生存率按浓度由低到高分别为66.03%、54.42%、46.06%、32.78%和21.88%。IC50=8.580μM。结论 (1)BLM可以诱导RAW264.7细胞衰老,其中50μg/mL的BLM可最有效诱导出衰老,构建衰老细胞模型。可用于筛选清除衰老细胞的药物。(2)在给予低剂量Bcl-2抑制剂ABT263时,RAW264.7的生存率没有明显下降。当50μM的浓度时,细胞生存率明显降低,与veh组相比具有显著性差异。提示该模型能筛选清除衰老的药物。

关键词： ABT263 RAW264.7细胞衰老博来霉素

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细胞衰老与Ⅱ型糖尿病

细胞衰老与Ⅱ型糖尿病

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：党女孟爱民中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室

Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）是目前全球最常见的代谢综合征,流行病学资料显示全球约有8%的成年人患有T2DM。二型糖尿病人与同龄人相比,预期寿命平均缩短6年。有观点认为糖尿病人可能经历了一个提前衰老的过程。衰老是... 详细信息

Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus,T2DM）是目前全球最常见的代谢综合征,流行病学资料显示全球约有8%的成年人患有T2DM。二型糖尿病人与同龄人相比,预期寿命平均缩短6年。有观点认为糖尿病人可能经历了一个提前衰老的过程。衰老是器官或组织逐渐丧失功能的过程,而细胞衰老（cell senescence）是衰老的细胞学基础。细胞衰老是指细胞应激致细胞产生不可逆的永久性细胞周期停滞的状态,这些内外刺激包括端粒侵蚀、DNA损伤、氧化应激以及癌基因活化等等。研究发现,细胞衰老与糖尿病的关系是相当复杂而微妙,糖尿病造成的高糖、炎症微环境及脂毒性等促使细胞衰老并进一步累积,反之,细胞衰老由于永久性周期停滞直接引起胰岛β细胞功能障碍、脂质代谢障碍等细胞功能障碍、通过间接分泌衰老相关分泌表型（senescence-associated secretory phenotype,SASP）介导慢性低水平炎症状态等,引起糖尿病及其并发症。Aguayo等人证明表达p16等衰老标志的β细胞,其胰岛素分泌功能有障碍,能导致类糖尿病样改变。此外,利用胰岛素受体拮抗剂S961饲喂C57BL/6J小鼠构建胰岛素抵抗模型,以及使用慢性内质网应激Ins2（Akita）小鼠模型,发现该两种模型在发生胰岛素抵抗等类糖尿病样病变的同时,p16、Igf1r、Bambi等β细胞衰老标志物的mRNA表达明显上调,证明胰岛素抵抗也可以导致β细胞衰老。也就是说,细胞衰老可能是糖尿病发生发展的关键环节,既是糖尿病代谢改变和组织损伤的后果,又是造成糖尿病及其并发症的原因之一。因此,针对细胞衰老与糖尿病之间联系环节的治疗,有可能为糖尿病提供新的治疗策略。

关键词：细胞衰老 Ⅱ型糖尿病衰老相关分泌表型SASP 动物模型

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利用心脏特异性CYP2E1基因修饰小鼠评价药物心脏毒性的初步探索

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中国实验动物学报 2016年第1期24卷 53-58,79页

作者：裴彦宇孙井江赵显莉贺银丽魏若尧高虹中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的使用两种心脏特异性CYP2E1基因修饰小鼠来评价药物西布曲明(sibutramine)的心脏毒性作用,选择出在评价药物的心脏毒性中具有更高敏感性的动物模型。方法 8周龄雄性Tg(+)型小鼠、s Tg(+)型小鼠、野生型C57BL/6小鼠(WT),各50只,分别... 详细信息

目的使用两种心脏特异性CYP2E1基因修饰小鼠来评价药物西布曲明(sibutramine)的心脏毒性作用,选择出在评价药物的心脏毒性中具有更高敏感性的动物模型。方法 8周龄雄性Tg(+)型小鼠、s Tg(+)型小鼠、野生型C57BL/6小鼠(WT),各50只,分别随机分成5组,每组10只,溶媒对照组(灌胃给予纯净饮用水)及4个实验组(50、100、150、300 mg/kg西布曲明)。给药过程中进行一般症状观察以及存活率的测定;给药15 d后取血并解剖取心脏,测定各组实验小鼠血生化心脏损伤指标:乳酸脱氢酶(LDH),肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CK-MB)。并进行病理组织学检查,免疫组织化学方法观察心脏组织缝隙蛋白43(connexin 43,CX43)的表达情况。结果 (1)血生化指标显示,在给药剂量50 mg/kg和100 mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著高于WT型小鼠(P<0.05或P<0.01);在给药剂量50、100和150 mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著高于s Tg(+)型小鼠(P<0.05或P<0.01);而在给药剂量300 mg/kg时,Tg(+)型小鼠均显著低于WT和s Tg(+)型小鼠(P<0.05或P<0.01),且s Tg(+)型小鼠减小的程度最小。(2)病理组织学结果显示,Tg(+)和WT型小鼠各个给药组均表现出心脏损伤的迹象。(3)免疫组织化学染色显示,随着给药剂量的加大,Tg(+)、s Tg(+)和WT型三种小鼠CX43在心肌细胞闰盘处的表达数量均逐渐下降,且染色颜色逐渐变浅;而CX43在心肌细胞闰盘处的表达数量下降程度和染色颜色变浅程度由高到低分别为,Tg(+)型小鼠,其次是WT型小鼠,s Tg(+)型小鼠。结论 Tg(+)型小鼠在评价药物潜在心脏毒性试验中可能比WT型小鼠具有更高的敏感性,而s Tg(+)型小鼠则是很好的心脏毒性保护模型。

关键词：细胞色素P450 2E1 基因修饰西布曲明药物毒性

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复杂性状遗传CC小鼠在传染病领域的应用及研究进展

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中国比较医学杂志 2016年第8期26卷 20-24页

作者：许黎黎秦川中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

动物模型是传染病防控研究体系中的重要支撑环节,起到连接实验室基础科研和临床诊疗的桥梁作用。小鼠是目前最被广泛使用的传染病动物模型,然而,免疫系统完整的成熟小鼠很多情况下对某些传染病病原并不易感。近年来,开发临床病例表征与... 详细信息

动物模型是传染病防控研究体系中的重要支撑环节,起到连接实验室基础科研和临床诊疗的桥梁作用。小鼠是目前最被广泛使用的传染病动物模型,然而,免疫系统完整的成熟小鼠很多情况下对某些传染病病原并不易感。近年来,开发临床病例表征与人类更接近的协同杂交(Collaborative Cross,CC)小鼠,又称复杂性状遗传小鼠资源是目前的研究热点和建立疾病动物模型的另一切入口。本文将对目前使用CC小鼠感染传染病病原(包括病毒、细菌、真菌等)后呈现出表型多样性的研究报道做一综述,以期为进一步研究CC小鼠对不同传染病的易感性,丰富我国传染病动物模型资源库,为应对各种重大及新发突发传染病及临床的精细化诊疗提供有价值的参考数据。并在此基础上,提出一系列有关CC小鼠资源目前亟待解决的关键科学技术问题,同时对未来在传染病领域的应用作一展望,以作抛砖引玉之用。

关键词：复杂性状遗传小鼠传染病易感性动物模型

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复杂性状遗传CC小鼠--肿瘤研究新平台

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中国比较医学杂志 2016年第8期26卷 25-29页

作者：李克娟高苒北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所北京100021

癌症是由于机体细胞失去正常调控过度增殖而引发的一系列复杂性状疾病的统称,其本质上是一种基因疾病。用于传统肿瘤小鼠模型的重组近交(RI)品系由于只起源于两个近交祖系,因此规模小且等位基因多样性较少,在统计功效上存在局限性。复... 详细信息

癌症是由于机体细胞失去正常调控过度增殖而引发的一系列复杂性状疾病的统称,其本质上是一种基因疾病。用于传统肿瘤小鼠模型的重组近交(RI)品系由于只起源于两个近交祖系,因此规模小且等位基因多样性较少,在统计功效上存在局限性。复杂性状遗传(Collaborative Cross mice,CC)小鼠是由来自八个原始种系近交产生的数百种基因型不同的小鼠品系,能够体现不同小鼠亚种的遗传学变异,具有高遗传多样性,大种群规模等重要特征。它可以模拟人类复杂性状疾病中不同人群对病因或治疗方法个体易感性的差异,为促进复杂性状疾病易感基因筛查、基因功能发现等方面的研究提供了一个更好的研究工具与信息平台。本文就CC小鼠在医学应用中的研究现状、挑战性与局限性、以及其在肿瘤研究中的应用前景进行综述。

关键词：复杂性状遗传小鼠(CC小鼠) 遗传多样性个体易感性肿瘤

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警惕Zika病毒,公众无需恐慌

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中国比较医学杂志 2016年第2期26卷 87-90页

作者：许黎黎秦川中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

2015年底至今,Zika病毒在多国流行,关注升温。Zika病毒感染为伊蚊传播疾病,极有可能与新生儿小头畸形症有关,WHO建议孕妇要特别注意防止蚊虫叮咬。目前,除台湾省出现一例泰国籍输入病例外,我国大陆地区还没有Zika病毒感染的病例报道。... 详细信息

2015年底至今,Zika病毒在多国流行,关注升温。Zika病毒感染为伊蚊传播疾病,极有可能与新生儿小头畸形症有关,WHO建议孕妇要特别注意防止蚊虫叮咬。目前,除台湾省出现一例泰国籍输入病例外,我国大陆地区还没有Zika病毒感染的病例报道。伊蚊在我国台湾、海南、广东、广西、云南、福建等地在内的北纬25度以南的亚热带地区广泛存在,这些地区具有Zika病毒感染扩散的潜在风险。我们已提前做好资源和技术储备,应对可能出现的输入性病例,公众无需过于恐慌。

关键词： Zika病毒伊蚊动物模型技术储备

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