检索结果-内蒙古大学图书馆

第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：谢英国娇李冰刘超河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所中国人民解放军军事兽医研究所动物病毒学研究室吉林农业大学动物科学技术学院

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路。方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫... 详细信息

目的本实验旨在构建禽流感病毒聚合酶酸性亚基(PA)转基因小鼠,以期获得转基因小鼠模型,为流感病毒致病机理研究和抗流感药物开发提供新思路。方法甲型H1N1流感病毒野毒株A/Changchun/01/2009(H1N1)为军事兽医研究所动物病毒学与特种疫病学实验室分离、保存,经RNA抽提逆转后从中扩增出甲型流感病毒H1N1PA基因的CDS基因全长序列。通过定向克隆的方法将其连接到pIRES2-GFP载体上,酶切鉴定并测序。为提高目的基因表达效率再将重组质粒中的CMV启动子替换为UBC启动子,命名为pUBC-IRES-PA。转染至293T细胞,通过GFP表达情况检测其在细胞内的表达效率。Qiagen@EndoFree Plasmid Maxi Kit制备质粒,线性化后用SephadexG-50进行凝胶层析纯化,纯化产物用0.1×TE缓冲液稀释至终浓度5ng/μl。水平显微注射法将其导入140枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核。将注射后存活的约110枚受精卵移植入3只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中。仔鼠出生10天后,提取尾尖组织DNA,PCR扩增鉴定仔鼠基因型。结果构建的真核重组表达质粒pUBC-IRES-PA转染293T细胞后,可检测到PA的转录和表达。共产生14只子代小鼠,鼠尾PCR检测获得转基因阳性首建鼠1只,可以稳定遗传并建系。结论本实验成功构建了pUBC-IRES-PA真核表达载体,初步获得了稳定整合PA基因的转基因小鼠,进一步进行基因表达情况与病理学方法检测后有望建立小鼠流感病毒PA蛋白转基因模型,促进流感发病机理研究和药物开发。

关键词：流感病毒转基因小鼠

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PPARγ在阿尔茨海默病中的作用及影响因素研究进展

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医学研究生学报 2015年第9期28卷 989-994页

作者：宋楠秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京医学博士研究生100021

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)是一种以记忆丧失和认知衰退为主要临床症状的大脑神经退行性疾病。目前有关AD的病因仍然不明确且临床上无有效的防治措施。PPARγ是一种配体激活型转录因子,在AD的病理过程中扮演着重要角色,... 详细信息

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)是一种以记忆丧失和认知衰退为主要临床症状的大脑神经退行性疾病。目前有关AD的病因仍然不明确且临床上无有效的防治措施。PPARγ是一种配体激活型转录因子,在AD的病理过程中扮演着重要角色,可作为神经保护作用靶点;同时许多PPARγ的激动剂己经被证明在AD的细胞和动物模型上具有神经保护作用。文中综述了PPARγ在AD中发挥的作用,以及影响PPARγ活化的因素,特别强调矢车菊素-3-O-葡糖糖苷(Cy3G)在发挥神经保护作用的同时,可能作为神经系统中潜在的PPARγ激动剂。

关键词： PPARγ PPARγ激动剂基因表达调控神经保护 Cy3G

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动物中DNA甲基转移酶2研究进展

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中国比较医学杂志 2015年第2期25卷 46-49,F0003页

作者：吕丹张连峰北京协和医学院中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

哺乳动物中DNA甲基转移酶家族包括DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,Dnmt1),DNA甲基转移酶2(DNA methyltransferase 2,Dnmt2,也叫做天冬氨酸tRNA甲基转移酶1(tRNA aspartic acid methyltransferase 1,TRDMT1))和DNA甲基转移酶3(DNA methyltransferase 3,Dnmt3)。Dnmt2在进化史上比Dnmt1和Dnmt3更古老,存在于更多物种中,包括植物、真菌、寄生虫、昆虫、鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物,但其生化学机制和生物学功能仍不十分清楚,已有研究报道也存在许多矛盾之处。本文仅就Dnmt2在动物中的研究,包括其结构特点,对RNA甲基化的作用及相关生物学表型的研究进展作一总结。

关键词： Dnmt2 甲基化 RNA 功能

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不同浓度丙戊酸钠对锚蛋白启动子活性的调控

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中国医学科学院学报 2015年第5期37卷 508-513页

作者：刘翠武杰隋小龙李彦红韩云林徐玉环黄澜朱华盛树力秦川中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的采用体外锚蛋白(Ank G)启动子介导荧光素酶报告基因活性的研究,探讨丙戊酸钠(VPA)对Ank G启动子活性的调控机制。方法通过对人和小鼠的Ank G启动子序列进行比对分析,克隆小鼠Ank G启动子序列;将Ank G启动子片段克隆至荧光素酶报告基... 详细信息

目的采用体外锚蛋白(Ank G)启动子介导荧光素酶报告基因活性的研究,探讨丙戊酸钠(VPA)对Ank G启动子活性的调控机制。方法通过对人和小鼠的Ank G启动子序列进行比对分析,克隆小鼠Ank G启动子序列;将Ank G启动子片段克隆至荧光素酶报告基因(Luciferase)质粒p GL3,构建真核表达载体;采用脂质体Lipofectamine2000将重组质粒和空载体质粒分别与pRL-CMV共转染至N2a细胞和293T细胞,同时给予0、0.5、1.0 mmol/L的VPA处理12 h后,采用双荧光素酶法检测Ank G启动子片段在细胞中的转录活性及VPA处理后细胞中荧光素酶报告基因的活性。结果酶切和测序鉴定证实Ank G启动子克隆及其表达载体构建成功;荧光素酶活性检测显示Ank G启动子在N2a和293T细胞中均有较高的转录活性;0.5 mmol/L VPA处理两种品系细胞12 h后,Luciferase活性都明显上调。结论 VPA能够从转录水平调控Ank G启动子的活性,体内VPA对Ank G表达的调控可能是直接在转录水平进行的。

关键词：丙戊酸钠锚蛋白启动子

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HIV-1与pDCs的相互作用

HIV-1与pDCs的相互作用

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第十二届中国实验动物科学年会

作者：彭卓颖薛婧魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

目的浆细胞样树突状细胞(Plamcytoid dendritic cells,pDCs)是一类可以产生大量Ⅰ型干扰素(Interferon α,IFN-α)的固有免疫细胞。在人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)急性感染期,pDCs通过分泌IFN-α抑制病毒复制... 详细信息

目的浆细胞样树突状细胞(Plamcytoid dendritic cells,pDCs)是一类可以产生大量Ⅰ型干扰素(Interferon α,IFN-α)的固有免疫细胞。在人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)急性感染期,pDCs通过分泌IFN-α抑制病毒复制并激活适应性免疫应答。在HIV慢性感染期,pDCs通过调节免疫细胞发挥免疫抑制的作用,不断破坏淋巴细胞,从而造成免疫系统崩溃,促进疾病进程。本文将就HIV-1与pDCs之间的相互作用做一综述。

关键词：浆细胞样树突状细胞人类免疫缺陷病毒 Ⅰ型干扰素

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HIV-1与pDCs的相互作用

HIV-1与pDCs的相互作用

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：彭卓颖薛婧魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室

目的浆细胞样树突状细胞(Plamcytoid dendritic cells,pDCs)是一类可以产生大量Ⅰ型干扰素(Interferonα,IFN-α)的固有免疫细胞。在人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)急性感染期,pDCs通过分泌IFN-α抑制病毒复制并激活适应性免疫应答。在HIV慢性感染期,pDCs通过调节免疫细胞发挥免疫抑制的作用,不断破坏淋巴细胞,从而造成免疫系统崩溃,促进疾病进程。本文将就HIV-1与pDCs之间的相互作用做一综述。

关键词：浆细胞样树突状细胞人类免疫缺陷病毒 I型干扰素

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利用CRISPR/CAS9技术介导LoxP序列靶向引入小鼠SM22α基因

利用CRISPR/CAS9技术介导LoxP序列靶向引入小鼠SM22α基因

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第十二届中国实验动物科学年会（2016.南宁）

作者：刘超董伟李冰谢英苏利波张力韩梅河北省实验动物重点实验室河北医科大学实验动物学部北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所河北医科大学生物化学与分子生物学教研室河北省医学生物技术重点实验室

目的平滑肌22α（SM22α）是平滑肌细胞（VSMC）骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关。本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/L0xP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC... 详细信息

目的平滑肌22α（SM22α）是平滑肌细胞（VSMC）骨架相关蛋白,参与VSMC骨架重构,与动脉粥样硬化、高血压等血管重塑性疾病与关。本研究旨在在SM22α基因内部引入LoxP序列,制备基于Cre/L0xP系统的SM22α条件性基因敲除小鼠,研究其在VSMC骨架重构中的作用机制。方法利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠SM22α基因。在外显子1～2和3～4的非编码区各设计sgRNA位点并将其定向克隆至pUC57-sgRNA。设计包含外显子2、3及2个LoxP序列且两侧各带有700bp同源臂的环状供体载体。Cas9的mRNA使用mMESSAGE mMACHINE（?）T7Ultra Kit进行体外转录,sgRNA使用线性化的spUC57-sgRNA重组质粒作为模板用MEGAshortscriptKit体外转录合成。将制备好Cas9 mRNA、sgRNA和供体质粒进行混合,其浓度分别为Cas9 mRNA 25 ng/μl,sgRNA 10 ng/μl,供体质粒4 ng/μl。水平显微注射法将其导入170枚C57BL/6×B6D2F1受精卵原核。将注射后存活的约140枚受精卵移植入5只当日见栓的假孕KM雌鼠输卵管中,得到17只子代小鼠,经PCR和测序筛选目标小鼠。结果有一只小鼠等位基因的特定位点插入了LoxP序列,三只小鼠删除了SM22α基因的第2第3外显子。结论借助CRISPR/Cas9技术得到了SM22α基因内部引入LoxP序列的小鼠和SM22α基因敲除小鼠,为研究SM22α在VSMC中的作用机制提供了重要实验条件。

关键词： SM22a VSMC骨架重构 CRISPR/CAS9

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细胞色素P450 2E1的毒性机制研究进展

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中国医药导报 2015年第19期12卷 39-44页

作者：裴彦宇高虹中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

细胞色素P450 2E1(CYP2E1)在生物体内许多内源性或外源性物质的代谢过程中发挥着重要作用。CYP2E1主要分布在肝脏中,同时在肝外组织如心脏、肾脏等也有高表达。CYP2E1参与活性氧自由基的生成,引发氧化应激反应、脂质过氧化反应、炎性反... 详细信息

细胞色素P450 2E1(CYP2E1)在生物体内许多内源性或外源性物质的代谢过程中发挥着重要作用。CYP2E1主要分布在肝脏中,同时在肝外组织如心脏、肾脏等也有高表达。CYP2E1参与活性氧自由基的生成,引发氧化应激反应、脂质过氧化反应、炎性反应和细胞凋亡等过程,进而对机体产生毒性,诱发脂肪性肝病、糖尿病及肿瘤等疾病。本文综述了CYP2E1的毒性机制研究进展以及其在心脏毒性评价中的展望,其可能作为一个潜在的心脏毒性评价新指标应用于新药安全性评价中。

关键词：细胞色素P450 2E1 氧化应激毒性心脏毒性

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降钙素基因相关肽转基因小鼠的建立及血压动态分析

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中国比较医学杂志 2015年第10期25卷 11-16页

作者：鲍丹董伟张旭刘宁高珊张海涛高翔葛文平吕丹中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的建立降钙素基因相关肽α(calcitonin gene-related peptide,CGRPα)和β(CGRPβ)转基因小鼠,并对其血压进行动态对比分析,建立可用于高血压研究的动物模型。方法把人CGRPα和CGRPβ基因分别插入鸡β-肌动蛋白启动子下游,构建转基因... 详细信息

目的建立降钙素基因相关肽α(calcitonin gene-related peptide,CGRPα)和β(CGRPβ)转基因小鼠,并对其血压进行动态对比分析,建立可用于高血压研究的动物模型。方法把人CGRPα和CGRPβ基因分别插入鸡β-肌动蛋白启动子下游,构建转基因表达载体,显微注射法建立C57BL/6J CGRPα和CGRPβ转基因小鼠,PCR鉴定转基因小鼠基因型。采用Western Blot鉴定CGRPα和CGRPβ在心脏、肺、肾脏和肝脏组织中的表达,筛选高表达转基因品系。用无创血压测量仪分析转基因小鼠动态血压变化。结果建立了在心脏、肺、肾脏和肝脏组织中均高表达CGRPα基因的CGRPα转基因小鼠;在肺和肝脏组织中高表达CGRPβ基因的CGRPβ转基因小鼠。CGRPα转基因小鼠血压正常,CGRPβ转基因小鼠在12月龄时表现出显著的血压降低。结论 CGRPα和CGRPβ转基因小鼠可作为用于CGRP对外周血管阻力和高血压抵抗机制研究的动物模型。

关键词： CGRP 转基因外周血管阻力高血压抵抗

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一种gRNA快速合成及检测方法的建立

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中国实验动物学报 2015年第3期23卷 267-271,290页

作者：杜建勇邓然高虹雍伟东中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的建立一种gRNA快速合成及检测的方法。方法设计引物并利用PCR技术迅速扩增gRNA的DNA模板片段,然后通过体外转录纯化得到gRNA;最后通过体外反应迅速对gRNA和Cas9酶切效率及特异性进行检测。结果体外合成的gRNA特异性强,活性高,在靶点... 详细信息

目的建立一种gRNA快速合成及检测的方法。方法设计引物并利用PCR技术迅速扩增gRNA的DNA模板片段,然后通过体外转录纯化得到gRNA;最后通过体外反应迅速对gRNA和Cas9酶切效率及特异性进行检测。结果体外合成的gRNA特异性强,活性高,在靶点上成功切开DNA双链。结论成功建立gRNA快速合成及检测的方法,为后续转染或显微注射筛选有活性gRNA节约了时间。

关键词： CRISPR/Cas9 PCR扩增体外转录体外检测

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