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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：赵海平冯娟董伟吕丹李万波秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的观察YCZX02对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模... 详细信息

目的观察YCZX02对遗传性扩张型心肌病模型的治疗作用,并研究其可能的药理机制。方法繁殖cTnT转基因扩张型心肌病小鼠,PCR法鉴定基因型,待小鼠到1.5月龄后进行心脏超声检测,根据体重、心功能将其分成三组:阴性鼠作为对照组,阳性鼠分为模型组及YCZX02给药组（n=12）。将YCZX02（40mg/kg/d）放入动物饮水中,连续给药7个月。cTnT转基因小鼠在实验过程中有猝死,从给药开始记录各组的动物死亡数,七个月后用spss10.0统计软件进行生存率分析。每个月进行一次心脏超声检测,对左心室长轴M超结果进行分析,比较各组动物的心脏构型及心功能。给药7个月后,采用HE染色和Masson染色,光镜观察心脏的显微结构。RT-PCR法检测心脏缝隙连接蛋白Cx40、Cx43,心肌收缩蛋白MYL4、MYL7、MYH6、MYH7,钾离子通道kcnj3、kcnal以及钙调蛋白PLN、SLN表达水平的变化。结果连续7个月的超声检测显示,cTnT转基因小鼠出现进行性的左心室扩张及收缩功能障碍,并有猝死发生;drag2减轻了扩心病小鼠的左心室扩张,改善了心功能,并降低了死亡率。心脏HE及Masson染色显示,cTnT转基因小鼠有心肌细胞的不均匀肥大及间质胶原的增生,YCZX02改善了心脏的结构。RT-PCR结果显示cTnT转基因小鼠心脏缝隙连接蛋白Cx40的表达降低,心肌收缩蛋白MYL4、MYL7表达增加,钾离子通道kcnj3、kcnal表达升高,钙调蛋白SLN表达升高,Cx43、MYH6、MYH7、PLN的表达没有显著的变化。YCZX02提高了Cx40的表达,降低了MYLA、MYL7的表达,降低了kcnj3、kcnal、SLN的表达。结论 YCZX02对cTnT转基因扩张型心肌病小鼠有治疗作用,可能部分通过调节钙钾离子转运发生作用。

关键词： YCZX02 cTnTR141W转基因扩张型心肌病治疗

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动物与新发传染病

动物与新发传染病

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中国科协第179次青年科学家论坛——传染病病原体变异和致病机制

作者：秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

野生动物源性传染性人兽共患病作为新发传染病已经成为威胁人类健康的重要因素。对人类健康造成了巨大的全球负担，其确切程度尚难统计。作者介绍了新发对传染病的种类，并对流行病学和新发传染病与野生动物的关系进行了详细的分析，同... 详细信息

野生动物源性传染性人兽共患病作为新发传染病已经成为威胁人类健康的重要因素。对人类健康造成了巨大的全球负担，其确切程度尚难统计。作者介绍了新发对传染病的种类，并对流行病学和新发传染病与野生动物的关系进行了详细的分析，同时，还对新发传染病的防治作了展望。

关键词：新发传染病流行病学野生动物

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cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立

cTnTR92Q转基因小鼠肥厚型心肌病模型的建立

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：董伟冯娟祝梅香全雄志张伟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立cTnT肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnT转... 详细信息

目的建立cTnT肥厚型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,RT-PCR检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnT转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个不同表达水平的cTnT转基因小鼠品系。转入的cTnT基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。组织学分析显示cTnT转基因小鼠心脏变大,心室壁肥厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室壁变厚,收缩期容积和舒张期容积显著缩小,射血分数、短轴缩短率明显增加。结论 cTnT转基因小鼠心脏变大,室壁变厚,心腔变小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化以及心肌舒张功能失调,说明成功建立了cTnT转基因小鼠肥厚型心肌病模型,为研究肥厚型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 肥厚型心肌病转基因模型基因突变

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cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：冯娟董伟全雄志张晓娟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的建立cTnT扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,Reahime PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting... 详细信息

目的建立cTnT扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnT基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnT转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnT转基因小鼠的基因表型,Reahime PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,组织学和电镜检测cTnT转基因小鼠心脏的病理改变。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的定位。超声心动图检测cTnT转基因小鼠心脏的结构和功能。记录cTnT转基因小鼠的生存状况。逆转录PCR检测cTnT转基因小鼠的心脏肥大分子标志物。结果建立了3个系的cTnT转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnT的表达水平是内源性cTnT的1.5～2.0倍。cTnT转基因小鼠心脏组织学检测显示,室壁变薄,心室扩张,间质纤维化。电镜检测显示肌纤维变细,部分溶解。免疫组织化学检测显示,突变的cTnT蛋白聚集在cTnT转基因小鼠心脏的肌小节中。M型超声心动图检测显示,左室收缩末期内径和左室舒张末期内径明显增加58.3%和27.8%,左室收缩期容积和左室舒张期容积显著增加191.2%和75.9%,射血分数和短轴缩短率分别降低39.9%和45.4%。从2月龄到8月龄,转基因小鼠左室收缩末期容积和左室舒张末期容积增加2倍左右,EF%降低36.7%,FS%降低39.7%。4月龄后转基因小鼠出现早期死亡,至8月龄早期死亡率达11.1%。心脏肥大的分子标记物检测显示Nppb表达增加29%,Actal增加4倍,而Atp2a2降低58%。结论 cTnT转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnT转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 基因突变扩张型心肌病转基因模型

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PDGF-CCK转基因小鼠的建立及对代谢影响的初步研究

PDGF-CCK转基因小鼠的建立及对代谢影响的初步研究

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：刘学丽杜静董伟全雄志秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

前言胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)是一种广泛存在于胃肠道和中枢神经系统的脑肠肽,具有多种生理学功能。作为在脑内含量最丰富的脑肠肽之一,CCK在神经系统内参与了多种生理过程并发挥着重要的功能,如抑制进食、抗焦虑、镇痛、调节... 详细信息

前言胆囊收缩素(Cholecystokinin,CCK)是一种广泛存在于胃肠道和中枢神经系统的脑肠肽,具有多种生理学功能。作为在脑内含量最丰富的脑肠肽之一,CCK在神经系统内参与了多种生理过程并发挥着重要的功能,如抑制进食、抗焦虑、镇痛、调节血压和增强记忆等。但是,迄今为止人们对CCK在脑中发挥作用的具体机制还不清楚;对CCK在脑中的许多功能还存在着很大的争论。目的为了更好的研究CCK在中枢神经系统的功能,本实验采用神经特异性启动子PDGF,建立了在神经系统特异性表达CCK的转基因小鼠并对CCK对小鼠摄食行为和体重的影响进行了初步探讨。结果我们通过扩增CCK cDNA编码区,克隆到含有神经特异性启动子PDGF的载体,构建了CCK转基因表达载体;酶切含有PDGF启动子、CCK目的片段、PolyA的片断进行显微注射,建立携带有CCK的转基因小鼠,通过鼠尾PCR的方法鉴定转基因首建鼠;采用WestemBlot方法鉴定CCK在脑内的表达;测量阳性鼠和同窝阴性鼠体重、血糖、血脂并进行统计学分析。结论我们得到了3只CCK阳性首建鼠,其中2首建鼠品系的鼠脑内CCK表达量比野生鼠明显增加。对各组小鼠进食进水量监测显示:给与正常饮食时,CCK降低了雄鼠摄食量,增加雌鼠摄食量;高脂饮食时,CCK增加了小鼠摄食量;对摄水量无显著影响。转基因小鼠体重低于阴性鼠,餐后血糖高于阴性鼠,血脂未发现显著差异。脑内CCK高表达可使小鼠消瘦,且血糖升高。实验结果初步显示,CCK对小鼠摄食行为有影响,是调节小鼠摄食和体重的一个重要神经肽。

关键词：胆囊收缩素中枢神经系统模型

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cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠模型的比较分析

cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠模型的比较分析

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：冯娟董伟张丽吕丹赵海平全雄志张伟秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的比较cTnT和cTnT转基因小鼠,筛选肥厚型心肌病和扩张型心肌病的重要修饰基因。方法 M型超声心动图检测cTnT和cTnT转基因小鼠心脏的结构和功能。病理检测心脏组织学。透射电镜检测心脏的超微结构。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的... 详细信息

目的比较cTnT和cTnT转基因小鼠,筛选肥厚型心肌病和扩张型心肌病的重要修饰基因。方法 M型超声心动图检测cTnT和cTnT转基因小鼠心脏的结构和功能。病理检测心脏组织学。透射电镜检测心脏的超微结构。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的定位。基因表达芯片分析cTnT和cTnT转基因小鼠心脏的基因表达差异,RT-PCR验证基因芯片分析结果。结果 cTnT转基因小鼠显示室壁增厚,心腔缩小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化,心肌纤维变粗;射血分数和短轴缩短率增加,左室容积显著下降。cTnT转基因小鼠显示室壁变薄,心室扩张,间质纤维化发,心肌纤维变细,部分溶解;射血分数和短轴缩短率下降,左室容积显著增加。突变的cTnT蛋白在cTnT和cTnT转基因小鼠心肌细胞的肌小节中分布不同。基因表达芯片分析显示1200个基因表现出不同的调控。RT-PCR验证表达改变的基因,包括肌小节蛋白基因,细胞骨架蛋白基因,钙调节相关蛋白基因,离子通道蛋白基因,细胞外基质基因,信号传导相关基因和未知基因等。结论 cTnT和cTnT突变蛋白的表达导致小鼠HCM和DCM两种相反的病理表型。在相同的遗传背景下,通过全基因表达芯片发现多种基因在HCM和DCM心脏中有相反的表达调控。其中有Gas5、Riok1、Ask1、Meox1、Ryk、Dkk3和Wif-1等细胞外因子或表面受体有可能是控制心肌细胞向相反方向分化的重要修饰基因,为进一步认识心脏生长发育和心肌病的发病机制提供线索。

关键词：心肌肌钙蛋白T 基因芯片转基因模型修饰基因

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神经皮肤黑变病中黑色素的来源初探

神经皮肤黑变病中黑色素的来源初探

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：陈云新李加美朱华徐艳峰代小伟黄澜刘亚莉马春梅贾春实肖冲刘颖邓巍 Erwan Bezard 李秦秦川中国医学科学院&北京协和医学院比较医学中心病理室法国Bordeaux第二大学法国国家科学研究院中国医学科学院&北京协和医学院实验动物研究所motac实验室

目的探讨食蟹猴神经皮肤黑变病(NCM)中黑色素的来源。方法收集北京协和医学院比较医学中心病理室食蟹猴神经皮肤黑变病的病理学标本一例,复习其病理切片并辅助免疫组化及电镜技术对黑色素的来源做进一步探讨。结果皮肤病理检查显示真皮... 详细信息

目的探讨食蟹猴神经皮肤黑变病(NCM)中黑色素的来源。方法收集北京协和医学院比较医学中心病理室食蟹猴神经皮肤黑变病的病理学标本一例,复习其病理切片并辅助免疫组化及电镜技术对黑色素的来源做进一步探讨。结果皮肤病理检查显示真皮内黑色素主要由黑色素细胞产生,黑色素细胞CD31免疫组化染色阴性。脑膜的组织病理学显示脑膜下黑色素主要由黑色素细胞产生,黑色素细胞CD31免疫组化染色阴性。脑实质的组织病理学显示其黑色素由黑色素细胞和血管内皮细胞产生,CD31免疫组化染色显示含有黑色素的血管内皮细胞呈阳性着色。电镜检查结果同样显示血管内皮细胞内可见黑色素小体沉积。结论我们在世界上首次揭示了食蟹猴NCM大脑中血管内皮细胞可产生黑色素,这给内皮细胞增加了一项新的功能。

关键词：神经皮肤黑变病血管内皮细胞黑色素来源

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心肌肌钙蛋白Ⅰ基因突变与心肌病的研究进展

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中国实验动物学报 2007年第5期15卷 387-389页

作者：冯娟张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一,与心肌肌钙蛋白T和C相互作用,与肌动蛋白-原肌球蛋白结合从而抑制肌动蛋白-肌球蛋白的收缩作用。在肥厚型、扩张型和限制型心肌病中发现30多种cTnI基因的突变,cTnI基因突变转基因... 详细信息

心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一,与心肌肌钙蛋白T和C相互作用,与肌动蛋白-原肌球蛋白结合从而抑制肌动蛋白-肌球蛋白的收缩作用。在肥厚型、扩张型和限制型心肌病中发现30多种cTnI基因的突变,cTnI基因突变转基因小鼠也反映了心肌病的特征。本文总结了cTnI基因突变在心肌病发病机制中的研究情况。

关键词：心肌肌钙蛋白Ⅰ 基因突变心肌病转基因动物

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红色荧光和绿色荧光转基因小鼠模型的建立

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中国实验动物学报 2007年第4期15卷 267-270,I0003,I0004页

作者：冯娟高苒全雄志邸冉董伟马春梅黄澜刘亚莉曹兴水秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所中国协和医学院比较医学中心北京100021

目的建立红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,为活体荧光影像系统建立重要的实验动物模型。方法把DsRed-Express和EGFP基因插入chicken-βactin强启动子下游构建转基因载体,建立红色荧光和绿色荧光转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定红色荧光和绿... 详细信息

目的建立红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,为活体荧光影像系统建立重要的实验动物模型。方法把DsRed-Express和EGFP基因插入chicken-βactin强启动子下游构建转基因载体,建立红色荧光和绿色荧光转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定红色荧光和绿色荧光转基因小鼠的基因表型,活体荧光影像系统分析红色荧光和绿色荧光转基因小鼠,荧光显微镜检测红色荧光和绿色荧光转基因小鼠全身组织器官的组织形态。结果分别建立了3个系的红色荧光和3个系的绿色荧光转基因小鼠。活体荧光影像系统分析转基因小鼠分别呈现红色荧光和绿色荧光。经荧光显微镜观察,DsRed-Express转基因小鼠的红色荧光蛋白在多个组织器官中表达,尤其在胰腺、肝脏、肾脏和脾脏等器官表达量较高。EGFP转基因小鼠绿色荧光蛋白在全身各个组织器官中表达,尤其在胰腺、心脏、小肠、外周血细胞和脑组织等器官组织中表达量较高。结论DsRed-Express和EGFP基因在转基因小鼠中系统性高表达,成功建立了红色荧光和绿色荧光转基因小鼠。DsRed-Express和EGFP转基因小鼠将成为活体荧光影像系统的重要实验动物模型。

关键词：红色荧光蛋白绿色荧光蛋白转基因模型,动物

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cTnT^(R141W)转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立

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中国比较医学杂志 2007年第10期17卷 563-567,I0001页

作者：冯娟董伟全雄志祝梅香邸冉高苒马春梅黄澜刘亚莉朱华秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Nor... 详细信息

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnTR141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。

关键词：心肌肌钙蛋白T 扩张型心肌病转基因超声

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