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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：王晓映宗园媛张连峰秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心

目的探讨mir-222在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法取6月龄APPswe/PS△E9小鼠脑组织,进行micmRNA芯片的检测;利用real-time PCR对芯片检测结果进行验证;构建mir-222表达载体,将其转染至SH-SY5Y细胞中,转染后48h提取蛋白检测p27kip1... 详细信息

目的探讨mir-222在阿尔茨海默病发病机制中的作用。方法取6月龄APPswe/PS△E9小鼠脑组织,进行micmRNA芯片的检测;利用real-time PCR对芯片检测结果进行验证;构建mir-222表达载体,将其转染至SH-SY5Y细胞中,转染后48h提取蛋白检测p27kip1的表达情况。结果芯片结果显示,与野生型C57BL/6J小鼠相比,6月龄APPswe/PS△E9小鼠脑组织中mir-222表达明显下降,经real-time PCR验证,差别具有统计学意义(P值为0.012);将mir-222表达载体转染至SH-SY5Y细胞后,p27kip1表达减少。结论 mir-222可能通过调节细胞周期抑制因子p27kip1的表达参与阿尔茨海默病的发生。

关键词：阿尔茨海默病 microRNA 转基因小鼠 microRNA芯片

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人骨髓间充质干细胞移植治疗食蟹猴脑出血模型的病理学观察

人骨髓间充质干细胞移植治疗食蟹猴脑出血模型的病理学观察

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：刘嘉琳朱华代小伟刘颖李秦肖冲陈云新卢珊韩钦冯铭魏俊杰黄澜马春梅刘亚莉赵春华王任直秦川中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所北京协和医院神经外科

目的观察人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)移植治疗4周后,食蟹猴脑出血模型的脑部病理学变化。方法在脑定位仪定位下,通过自体血注入法制成食蟹猴脑出血模型,并将其随机分为模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组... 详细信息

目的观察人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)移植治疗4周后,食蟹猴脑出血模型的脑部病理学变化。方法在脑定位仪定位下,通过自体血注入法制成食蟹猴脑出血模型,并将其随机分为模型组、高剂量治疗组和低剂量治疗组,将生理盐水混悬的男性MSCs 250μl注射到脑出血部位附近,低剂量组细胞密度为4×10～3个/μl,高剂量组为20×10～3个/μl,模型组注射等体积的生理盐水。4周后,将大脑分为7个部分,每个部分厚约0.9cm,如有出血则按厚度0.3cm连续取材,直至出血面消失,应用整体病理切片扫描、HE染色及免疫组织化学的方法观察hMSCs移植治疗食蟹猴脑出血4周后脑部的病理变化。结果脑出血模型组HE染色可见大脑注射部位脑组织大面积变性坏死,多量吞噬含铁血黄素的泡沫细胞增生,周围少许肉芽组织增生伴局部纤维组织形成。hMSCs治疗组,整体切片扫描结果提示:与模型组相比,hMSCs低剂量及高剂量治疗组均可见脑组织变性坏死范围减小,且低剂量治疗组略好于高剂量治疗组;HE染色可见大脑注射部位局部脑组织变性坏死、吞噬含铁血黄素的泡沫细胞增生,周围肉芽组织增生伴局部纤维组织形成。免疫组化发现治疗组出血区内可见神经巢蛋白(Nestin)阳性细胞内散在分布,而在模型组中呈阴性表达。结论 hMSCs移植治疗食蟹猴脑出血模型4周后,可促进脑损伤的修复,且治疗效果可能与治疗剂量有一定相关性。

关键词：人骨髓间充质干细胞移植食蟹猴脑出血

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多巴胺D5受体转基因小鼠的建立

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中国比较医学杂志 2008年第5期18卷 54-58页

作者：张艳荣全雄志董伟张连峰杨志伟中国医学科学院实验动物研究所中国协和医学院比较医学中心北京100021

目的建立人多巴胺D5受体突变基因F173 L（D5F173L）,S390G（D5S390G）及正常人D5基因（hD5 WT）的转基因小鼠,利用该转基因动物模型来研究D5受体在原发性高血压中的发病机制。方法利用显微注射的技术将插入CMV启动子下游的D5F173L,D5S3... 详细信息

目的建立人多巴胺D5受体突变基因F173 L（D5F173L）,S390G（D5S390G）及正常人D5基因（hD5 WT）的转基因小鼠,利用该转基因动物模型来研究D5受体在原发性高血压中的发病机制。方法利用显微注射的技术将插入CMV启动子下游的D5F173L,D5S390G及hD5 WT基因的转基因载体注射入C57BL/6小鼠体内,建立多巴胺D5F173L,D5S390G及hD5 WT的转基因小鼠。通过PCR鉴定转基因小鼠的基因型。利用Western Blotting方法鉴定该受体蛋白在肾脏的表达情况。使用智能无创血压测量仪测量转基因小鼠的血压值。结果分别建立了多巴胺D5F173L,D5S390G及hD5 WT转基因C57BL/6小鼠,Western Blotting方法鉴定结果显示,与非转基因C57BL/6小鼠比较,D5转基因小鼠D5受体在肾脏有较高的表达。3-6月龄D5 F173L转基因小鼠的收缩压、舒张压和平均动脉血压均明显高于多巴胺D5S390G及hD5 WT转基因小鼠（n=6-8,P〈0.05）。结论多巴胺D5受体在原发性高血压发病中具有重要作用,但作用机理还有待于进一步研究。

关键词：多巴胺D5受体转基因动物高血压

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人骨髓间充质干细胞移植对食蟹猴脑出血损伤的修复作用

人骨髓间充质干细胞移植对食蟹猴脑出血损伤的修复作用

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：李加美朱华代小伟刘颖李秦肖冲陈云新韩钦卢珊冯铭魏俊杰黄澜马春梅刘亚莉赵春华王任直秦川中国医学科学院北京协和医学院实验动物研究所中国医学医学科学院北京协和医学院基础研究所北京协和医院神经外科

目的观察人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)移植8周后,对食蟹猴脑出血脑组织损伤的修复作用。方法 6只脑出血模型食蟹猴随机分为3组,模型组,hMSCs高剂量组(20×10～3个/μl)和hMSCs低剂量组(4×10～3个/... 详细信息

目的观察人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)移植8周后,对食蟹猴脑出血脑组织损伤的修复作用。方法 6只脑出血模型食蟹猴随机分为3组,模型组,hMSCs高剂量组(20×10～3个/μl)和hMSCs低剂量组(4×10～3个/μl)。将250μl hMSCs或生理盐水注射到脑出血部位附近,于8周后结束实验,对大脑组织进行病理学检查。将大脑分为7个部分,每个部分约9mm,如有病变则按厚度0.3cm连续取材,直至损伤消失。应用整体切片扫描仪结合组织病理学检查观察hMSCs治疗后脑组织的病理学变化。同时应用免疫组织化学的方法检测Nestin,以探讨其可能的作用机制。结果 hMSCs移植后8周,整体切片扫面结果提示,模型组注射部位大面积出血和脑组织损伤,而治疗组脑组织损伤程度较模型组小;且低剂量组的治疗效果略好于高剂量组。镜下可见模型组大脑注射血液部位多量脑组织变性坏死,大量吞噬含铁血黄素的泡沫细胞增生,周围少许肉芽组织增生伴局部纤维组织形成,同时可见神经胶质细胞增生;在治疗组可见少许脑组织变性坏死,中等量吞噬含铁血黄素的泡沫细胞增生,以及大量神经胶质细胞增生。免疫组织化学结果显示治疗组Nestin呈阳性表达,高剂量组与低剂量组之间无明显差别,而模型组为阴性。结论骨髓间充质干细胞可促进食蟹猴脑出血脑组织损伤修复,其作用效果可能与治疗剂量有关;同时人骨髓间充质干细胞在脑内可能向神经干细胞分化。

关键词：人骨髓间充质干细胞移植脑出血食蟹猴

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光化学法制作食蟹猴局部脑缺血模型

光化学法制作食蟹猴局部脑缺血模型

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：朱华李秦徐艳峰冯铭李昊孙井江赵春华王任直秦川中国医学科学院&北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院实验动物研究所motac合作实验室中国医学科学院北京协和医院中国医学科学院基础医学研究所

目的使用光化学法构建食蟹猴局部脑缺血模型,为干细胞移植治疗提供必要的条件。方法选择8只健康成年食蟹猴,静脉注射35mg/kg体重的玫瑰红B 5 min后用冷光源照射大脑皮层中央前回10 min。第一次注射后10 min注射第二次玫瑰红B,浓度与第... 详细信息

目的使用光化学法构建食蟹猴局部脑缺血模型,为干细胞移植治疗提供必要的条件。方法选择8只健康成年食蟹猴,静脉注射35mg/kg体重的玫瑰红B 5 min后用冷光源照射大脑皮层中央前回10 min。第一次注射后10 min注射第二次玫瑰红B,浓度与第一次相同。照射完毕后,向颞侧移动光源发光口,在第二点照射10 min。利用影像学、神经功能缺损评分和组织病理学对模型进行评价。结果动物清醒后表现出不同程度的脑缺血症状与体征。病理学检查可见明显的坏死灶。坏死灶周围脑组织水肿,神经细胞变性坏死。结论成功的将光化学法首次应用于灵长类动物,为进行与临床有重要意义的神经细胞保护研究提供了重要的工具。

关键词：光化学法脑出血食蟹猴

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食蟹猴脑出血模型的建立及评价

食蟹猴脑出血模型的建立及评价

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：朱华李秦冯铭陈云新李昊孙井江赵春华王任直秦川中国医学科学院&北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院实验动物研究所motac合作实验室中国医学科学院北京协和医院中国医学科学院基础医学研究所

目的建立稳定的食蟹猴自体股动脉抗凝血脑出血模型。方法健康成年食蟹猴8只,采用新鲜抗凝自体股动脉血1.5ml立体定向一次性缓慢匀速注入右侧基底节区屏状核内侧,利用MRI、PET、神经功能缺损评分和组织病理学对模型进行评价。结果动物在... 详细信息

目的建立稳定的食蟹猴自体股动脉抗凝血脑出血模型。方法健康成年食蟹猴8只,采用新鲜抗凝自体股动脉血1.5ml立体定向一次性缓慢匀速注入右侧基底节区屏状核内侧,利用MRI、PET、神经功能缺损评分和组织病理学对模型进行评价。结果动物在麻醉苏醒后出现了与血肿部位相对应的神经系统定位体征,影像学检查血肿腔位于右侧基底节,注血部位大片代谢缺损区,中线向左侧移位。组织病理学检查损伤局部周围可见多量泡沫细胞、淋巴细胞及单核巨噬细胞浸润,部分损伤脑组织已被肉芽组织机化。结论自体股动脉抗凝血定向脑内注射法可建立稳定、可靠的食蟹猴脑出血模型,注血量、注血部位和速度是模型成功与否的关键。

关键词：动物模型脑出血食蟹猴基底节

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高致病性禽流感(H5N1)实验流行病学初探——感染途径

高致病性禽流感(H5N1)实验流行病学初探——感染途径

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：代小伟朱华黄澜刘亚莉马春梅魏强秦川北京协和医学院中国医学科学院实验动物学研究所

目的观测不同感染途径实验性感染BALB/c小鼠后的感染状况,了解H5N1病毒的感染特点,为更深入的流行病学研究提供理论基础方法分别通过口腔接种、污染饲料、腹腔注射、皮肤损伤途径感染6-8周龄BALB/c小鼠,定期安乐动物采血及各器官组织进... 详细信息

目的观测不同感染途径实验性感染BALB/c小鼠后的感染状况,了解H5N1病毒的感染特点,为更深入的流行病学研究提供理论基础方法分别通过口腔接种、污染饲料、腹腔注射、皮肤损伤途径感染6-8周龄BALB/c小鼠,定期安乐动物采血及各器官组织进行血清学、病原学、病理学检查,记录抗体变化、病毒分离情况及病理学改变。结果各途径感染小鼠感染后出现竖毛、弓背、觅食减少、体重减轻、精神呆滞及神经系统症状,肺组织病毒分离及RT-PCR阳性,病理表现间质性肺炎。感染后第7d动物血清中可检测到H5N1抗体。结论通过口腔接种、污染饲料、腹腔注射及皮肤损伤多种途径感染BALB/c小鼠,均能发生感染,提示呼吸道以外的感染方式不容忽视,有益于人类更好的防控禽流感;可通过多种方式建模,深入研究禽流感的发病机制。

关键词：禽流感 H5N1病毒 BALB/c小鼠感染途径动物模型

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大鼠脑内移植人骨髓间充质干细胞方法的建立

大鼠脑内移植人骨髓间充质干细胞方法的建立

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亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：李加美朱华陈云新刘颖代小伟肖冲韩钦卢珊冯铭魏俊杰黄澜马春梅刘亚莉赵春华王任直秦川中国医学科学院北京协和医院实验动物研究所中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所北京协和医院神经外科

目的建立大鼠脑内移植人骨髓间充质于细胞的方法,并观察移植的人骨髓间充质干细胞在脑内的存活状态。方法 200g左右雌性Wistar大鼠18只,随机分为生理盐水对照组,CM-DiI实验组和BrdU实验组;人骨髓间充质干细胞分别在体外标记CM-DiI和Brd... 详细信息

目的建立大鼠脑内移植人骨髓间充质于细胞的方法,并观察移植的人骨髓间充质干细胞在脑内的存活状态。方法 200g左右雌性Wistar大鼠18只,随机分为生理盐水对照组,CM-DiI实验组和BrdU实验组;人骨髓间充质干细胞分别在体外标记CM-DiI和BrdU。动物用复方氯胺酮麻醉,应用脑定位仪固定头部,剃除局部毛发,碘伏消毒,沿正中线切开约1cm,充分暴露前囟,应用定位系统精确定位得出前囟坐标值,然后以前囟为参考,得出右侧纹状体注射点的坐标:AP(前后)=前囟坐标+0.2mm,L(左右)=前囟坐标-3mm,H(深度)=前囟坐标-5mm。在注射点处钻开颅骨到硬脑膜,应用10μl微量加样器脑内注射5μl标记的人骨髓间充质干细胞,骨髓间充质肝细胞的密度为1×10～4个/μl,注射速度为1μl/min,注射完毕后留针3min。手术后缝合皮肤,局部消毒并涂抹红霉素软膏,同时按照1.2倍麻醉药比例给予苏3号注射液催醒。与术后7天结束实验,动物麻醉后200ml生理盐水和4%的多聚甲醛200ml依次灌注,取脑。CM-DiI标记的用OCT包埋,震动冰冻切片机连续切片,厚度为10μm。切片经4%的多聚甲醛固定15min后,50%甘油封片,直接荧光显微镜观察荧光;BrdU标记的以10%中性福尔马林固定,行HE染色、免疫组织化学染色观察骨髓间充质干细胞的存活状态。结果人骨髓间充质干细胞脑内移植后7天,普通HE染色发现右侧纹状体内可见存活的骨髓间充质干细胞,未见淋巴细胞、中性粒细胞及巨噬细胞浸润,周围脑组织正常;荧光显微镜观察在纹状体内也可见到红色荧光的细胞;同时BrdU免疫组织化学结果显示在右侧纹状体内可见阳性细胞存在,生理盐水对照组呈阴性反应。结论成功建立脑内干细胞移植技术,为以后干细胞移植治疗神经系统疾病的实验研究打下基础。

关键词：脑定位仪人骨髓间充质干细胞脑内移植

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兔抗麻雀IgY酶标抗体的制备

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中国比较医学杂志 2008年第5期18卷 41-44页

作者：杨帆刘先菊林树柱秦川张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

目的制备辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗麻雀IgY抗体,为禽类血清学检测体系的建立提供技术储备。方法硫酸铵盐析法粗提麻雀血清IgY,进一步在SDS-PAGE上分离后,切下带有目的条带的凝胶作为免疫原,免疫实验兔制备抗血清,Protein-A柱亲和... 详细信息

目的制备辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗麻雀IgY抗体,为禽类血清学检测体系的建立提供技术储备。方法硫酸铵盐析法粗提麻雀血清IgY,进一步在SDS-PAGE上分离后,切下带有目的条带的凝胶作为免疫原,免疫实验兔制备抗血清,Protein-A柱亲和纯化兔抗IgY血清IgG,,使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果硫酸铵盐析法粗提IgY,可去除部分杂蛋白,SDS-PAGE上分离后切下带有目的条带的凝胶,可以得到足够纯度的抗原,将带有IgY的凝胶作为抗原免疫后获得的抗血清经Protein-A纯化后,二抗在SDS-PAGE上鉴定,纯度达到99%以上。改良的过碘酸钠法标记获得的抗体浓度为1.008 mg/mL,ELISA检测酶标抗体效价为1∶1000。Western blotting鉴定抗体具有特异性。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY酶标抗体。

关键词：麻雀抗IgY HRP

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LRRK2基因与帕金森病

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中国比较医学杂志 2008年第8期18卷 40-43,52页

作者：刘鹏秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021

帕金森病是一种复杂的多因素共同作用的神经变性性疾病,遗传因素和环境因素被认为是发病的重要原因。越来越多的研究发现遗传因素在其发病中起着重要作用,而最近LRRK2基因的发现更加确定了遗传因素在帕金森发病中不可忽视的作用。本文对... 详细信息

帕金森病是一种复杂的多因素共同作用的神经变性性疾病,遗传因素和环境因素被认为是发病的重要原因。越来越多的研究发现遗传因素在其发病中起着重要作用,而最近LRRK2基因的发现更加确定了遗传因素在帕金森发病中不可忽视的作用。本文对LRRK2基因以及LRRK2基因在帕金森病中的研究做一综述。

关键词：帕金森基因 LRRK2 dardarin

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