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中国比较医学杂志 2020年第5期30卷 7-13页

作者：王嫚诗张玲秦川丛斌国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心北京100021 河北省法医学重点实验室河北医科大学法医学院河北省法医分子鉴定协同创新中心石家庄050017

目的探索α-突触核蛋白A53T转基因小鼠认知功能,运动功能与焦虑样行为学的改变以及病理学变化特点。方法选用背景为C57BL/6的α-突触核蛋白A53T转基因小鼠作为实验组,同窝阴性小鼠为对照组。采用旷场及圆筒实验检测小鼠的焦虑状态;转棒... 详细信息

目的探索α-突触核蛋白A53T转基因小鼠认知功能,运动功能与焦虑样行为学的改变以及病理学变化特点。方法选用背景为C57BL/6的α-突触核蛋白A53T转基因小鼠作为实验组,同窝阴性小鼠为对照组。采用旷场及圆筒实验检测小鼠的焦虑状态;转棒及抓力实验评价小鼠的运动协调能力以及前肢张力;水迷宫及条件恐惧实验评价小鼠的认知能力。通过免疫组织化学染色法研究模型小鼠脑内病理特征;通过电镜观察模型小鼠脑内线粒体变化。结果与对照组比较,α-突触核蛋白A53T转基因小鼠运动距离增加,呈现过度活跃状态;对条件恐惧记忆的时间缩短,出现认知障碍;圆筒、转棒与抓力实验及水迷宫实验未见统计学差异。模型组小鼠黑质、纹状体、梨状皮层及海马的α-synuclein磷酸化水平增加,前额叶路易小体沉积,黑质纹状体α-synuclein沉积增多,黑质TH阳性细胞数量显著减少;与对照组比较,电镜观察模型组小鼠脑内线粒体嵴及其内容物不清,线粒体形态改变。结论突触核蛋白A53T转基因小鼠出现认知功能受损,并且早于运动障碍发生;病理特征表现为α-synuclein/LBs沉积于前额叶、皮层,黑质多巴胺能神经元缺失以及线粒体形态改变,可作为一种突触核蛋白相关认知障碍性疾病如路易氏体痴呆和帕金森病痴呆的动物模型。

关键词： A53T转基因小鼠动物模型行为学认知线粒体

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Exonuclease-1缺失延缓端粒酶缺失小鼠造血微环境的衰老

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中国比较医学杂志 2012年第5期22卷 37-43页

作者：石桂英林培容白琳鞠振宇中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021 北京华信医院北京100016

目的研究Exo-1对端粒酶缺失小鼠造血微环境衰老的影响。方法以端粒酶基因敲除小鼠(Terc-/-)和Exo-1基因敲除小鼠(Exo-1-/-)杂交,并进一步互交产生第三代端粒酶基因敲除小鼠(G3Terc-/-)以及第三代Terc和Exo-1双基因敲除小鼠(G3Terc-/-Exo... 详细信息

目的研究Exo-1对端粒酶缺失小鼠造血微环境衰老的影响。方法以端粒酶基因敲除小鼠(Terc-/-)和Exo-1基因敲除小鼠(Exo-1-/-)杂交,并进一步互交产生第三代端粒酶基因敲除小鼠(G3Terc-/-)以及第三代Terc和Exo-1双基因敲除小鼠(G3Terc-/-Exo-1-/-)。以CD45.1野生型小鼠的骨髓细胞为供体,以2月龄G3Terc-/-或G3Terc-/-Exo-1-/-小鼠为受体,进行骨髓移植。在受体小鼠9月龄时,取骨髓、脾脏、胸腺、外周血等组织器官的细胞进行流式分析,研究G3Terc-/-和G3Terc-/-Exo-1-/-受体小鼠中的野生型供体来源的造血干细胞的发育分化。结果同G3Terc-/-小鼠相比,G3Terc-/-Exo-1-/-双基因敲除受体小鼠骨髓中野生型供体来源的B220+细胞比例升高,前体B细胞的比例也明显升高;脾脏B220+细胞的比例明显升高;胸腺发育正常;外周血中B220+细胞比例升高。结论 Exo-1缺失延缓了端粒酶基因敲除小鼠造血系统微环境的衰老,从而逆转了端粒功能障碍引起的骨髓造血干细胞发育分化异常。

关键词：端粒功能障碍 Exo-1 造血干细胞造血微环境

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RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用

RT-SHIV rt基因单拷贝PCR扩增方法的建立及初步应用

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第十届中国实验动物科学年会

作者：鞠斌王卫丛喆姚南陈霆杜文达苏爱华高锡强魏强中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室

目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因... 详细信息

目的建立RT-SHIV病毒全长rt基因单拷贝PCR扩增方法,用于HIV-1 rt基因体内遗传与变异研究。方法 Oligo软件设计RT-SHIV rt基因特异性扩增引物,梯度稀释方法进行特异性和灵敏度筛选,进而优化退火温度和PCR反应最佳循环数等条件,建立rt基因PCR扩增方法;在此基础上将模板进行有限稀释,摸索rt基因单拷贝PCR扩增条件;使用该方法扩增感染猴体内PT-SHIV病毒rt基因,BioEdit软件进行基因序列分析。结果筛选得到一组巢式PCR引物,成功建立了RT-SHIV rt基因PCR扩增方法;当模板浓度为100 copies/μL时,扩增产物为单拷贝序列;测序结果显示RT-SHIV感染猴d266和d294血浆样本分别存在1处和6处氨基酸突变。结论本研究建立的全长rt基因单拷贝PCR扩增方法特异性好、灵敏度高、重复性强,可以应用于各类RT-SHIV病毒的全长rt基因分析。

关键词： RT-SHIV 单拷贝PCR rt基因

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A(H1N1)甲型流感病毒基因多态性对病毒复制及毒力的影响研究

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医学研究杂志 2011年第4期40卷 23-26页

作者：玛依拉许黎黎鲍琳琳吕琦邓巍李枫棣占玲俊朱华马春梅秦川中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的研究A(H1N1)甲型流感病毒基因多态性对病毒复制及毒力的影响。方法选择A/Californ ia/04/2009,A/S ichuan/1/2009和A/Be ijing/3/2009 3株病毒,分别感染MDCK细胞,测定病毒RNA载量和病毒效价;同时滴鼻接种BALB/c小鼠,检测小鼠感染后... 详细信息

目的研究A(H1N1)甲型流感病毒基因多态性对病毒复制及毒力的影响。方法选择A/Californ ia/04/2009,A/S ichuan/1/2009和A/Be ijing/3/2009 3株病毒,分别感染MDCK细胞,测定病毒RNA载量和病毒效价;同时滴鼻接种BALB/c小鼠,检测小鼠感染后的多项指标,观察期为14天。另一方面,对3株病毒的全基因组进行测序及序列比对,对其基因突变情况及多态性进行分析。结果 A/S ichuan/1/2009株相较而言具有较高的复制能力及毒力,序列分析结果显示全基因中有5个氨基酸发生了突变,其中PA蛋白中343位点的A突变为T,PB1蛋白中353位点的K突变为R,566位点的T突变为A,PB2蛋白中471位点的T突变为M,对病毒毒力的增强起重要作用。结论 A(H1N1)甲型流感病毒基因组多态性与其复制及毒力密切相关。

关键词： A(H1N1)甲型流感病毒多态性复制毒力

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心脏特异表达Calponin 1转基因小鼠的心脏功能分析

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中国比较医学杂志 2011年第1期21卷 59-63,F0003页

作者：王书美吕丹陈炜张晓娟曹兴水张连峰中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 中国医学科学院实验动物研究所国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院和北京协和医学院北京100021

目的建立心脏特异表达Calponin 1转基因小鼠,研究Calponin 1对心脏发育及心肌病的调节作用。方法利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立Calponin 1转基因小鼠,PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western Blot检测Calpon... 详细信息

目的建立心脏特异表达Calponin 1转基因小鼠,研究Calponin 1对心脏发育及心肌病的调节作用。方法利用心脏特异启动子α-MHC构建转基因表达载体,显微注射法建立Calponin 1转基因小鼠,PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western Blot检测Calponin 1在心脏组织中的表达,心脏超声检测转基因小鼠的心脏结构和功能,HE染色和Masson染色检测转基因小鼠心脏的病理改变。结果 Calponin 1在野生型小鼠心脏中有表达,在扩张型心肌病小鼠的心脏组织表达降低。通过显微注射法,建立了2个心脏组织Calponin 1基因高表达的转基因小鼠系。与野生型小鼠相比,Calponin 1转基因小鼠收缩期左室内径(LVID,systolic)增加28%(P<0.01,n=12),舒张期左室内径(LVID,diastolic)增加16.2%(P<0.01,n=12),收缩期左室后壁厚度(LVPW,systolic)减小15.7%(P<0.01,n=12),舒张期左室后壁厚度(LVPW,diastolic)减小21%(P<0.01,n=12),射血分数(ejection fraction,EF)降低11.5%(P<0.01,n=12),短轴内径缩短率(fraction shortening,FS)降低14.6%(P<0.05,n=12)。转基因小鼠心脏组织病理H&E染色和Masson染色显示,转基因小鼠心室扩张,心肌细胞不均匀肥大,细胞间隙变大,心肌间质纤维增多。结论 Calponin 1在心脏特异过表达引起转基因小鼠心脏左室内径增加,收缩期容积和舒张期容积显著增大,心室壁变薄,射血分数及短轴缩短率降低等扩张性心肌病表型,推测Calponin 1是参与心肌病病理发生的基因之一。

关键词：碱性调宁蛋白转基因小鼠扩张性心肌病心脏超声

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人载脂蛋白C3基因转基因小鼠的建立及血脂变化分析

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中国比较医学杂志 2012年第10期22卷 1-5页

作者：全雄志高翔张旭葛文萍关菲菲董伟张连峰卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院实验动物研究所和北京协和医学院比较医学中心北京100021

目的制备系统性表达人载脂蛋白C3(APOC3)基因的转基因小鼠,建立高血脂小鼠模型。方法将人APOC3基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOC3转基因C57BL/6J小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的... 详细信息

目的制备系统性表达人载脂蛋白C3(APOC3)基因的转基因小鼠,建立高血脂小鼠模型。方法将人APOC3基因插入系统性表达启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立人APOC3转基因C57BL/6J小鼠。并利用特异引物PCR法鉴定转基因小鼠的基因型,Western blot检测基因表达水平,血生化分析检测不同月龄转基因小鼠与同龄野生型小鼠的血脂指标,脂肪染色观察肝脏脂肪水平。结果建立了高表达人APOC3基因的转基因小鼠品系;转入的人APOC3基因在血液、肝脏、小肠、肌肉、心脏、肾脏、脾脏中均有明显表达;不同月龄转基因小鼠的血浆甘油三酯水平明显高于同龄野生型小鼠;转基因小鼠的肝脏脂肪含量高于野生型小鼠。结论系统性表达人APOC3基因的转基因小鼠表现高脂血症表型,可以作为高血脂以及高血脂相关的心血管病的工具动物。

关键词：载脂蛋白C3 转基因小鼠甘油三酯高脂血症人APOC3基因

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MicroRNA在乳腺癌转移中的作用

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现代肿瘤医学 2011年第10期19卷 2080-2084页

作者：刘学丽张连峰卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京100021 国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室中国医学科学院医学实验动物研究所和北京协和医学院比较医学中心北京100021

MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性小分子RNA,在转录后水平抑制基因的表达。研究表明多种miRNAs在包括乳腺癌在内的多种肿瘤中扮演着癌基因或者抑癌基因的角色,并且在肿瘤发生发展的各个阶段都有特定的miRNAs参与。本文综述了乳腺癌侵袭和... 详细信息

MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性小分子RNA,在转录后水平抑制基因的表达。研究表明多种miRNAs在包括乳腺癌在内的多种肿瘤中扮演着癌基因或者抑癌基因的角色,并且在肿瘤发生发展的各个阶段都有特定的miRNAs参与。本文综述了乳腺癌侵袭和转移过程中相关的miRNAs的作用。

关键词： MicroRNA 乳腺癌转移

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柚皮苷及其与吴茱萸碱联合用药对APPswe/PS△E9转基因痴呆模型小鼠学习记忆力的影响

柚皮苷及其与吴茱萸碱联合用药对APPswe/PS△E9转基因痴呆模型小...

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世界中联中药专业委员会第四届学术年会暨中药新药研发与中药资源可持续利用国际研讨会

作者：王冬梅马元武袁树民张旭马春梅张连峰中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京 100021 国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021 中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室北京 100021 国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021国家中医药管理局人类疾病动物模型三级

目的：探讨柚皮苷及柚皮苷与吴茱萸碱联合用药对Appswe／PS△E9转基因痴呆模型小鼠学习记忆能力的影响，研究柚皮苷与吴茱萸碱联合使用是否具有协同或叠加作用。方法：Appswe／PS△E9转基因痴呆模型小鼠随机分组，每组12只，雌雄各半，... 详细信息

目的：探讨柚皮苷及柚皮苷与吴茱萸碱联合用药对Appswe／PS△E9转基因痴呆模型小鼠学习记忆能力的影响，研究柚皮苷与吴茱萸碱联合使用是否具有协同或叠加作用。方法：Appswe／PS△E9转基因痴呆模型小鼠随机分组，每组12只，雌雄各半，分别选择在3月龄和5月龄两个时间段开始进行治疗，各给药组按设定剂量分别单独或联合加入鼠粮中。3月龄给药16周，5月龄给药4周后进行水迷宫实验，以安理申作为阳性药对照，并与安慰剂组小鼠进行比较。Thioflavin-S染色检测单独使用柚皮苷治疗转基因小鼠脑组织老年斑的形成。结果：单独使用柚皮苷4周和16周，缩短寻找平台的潜伏期分别为22％，32％;单独使用吴茱萸碱4周和16周吴茱萸碱，缩短寻找平台的潜伏期分别为33％，10％。柚皮苷治疗16周减少海马老年斑26％。柚皮苷与吴茱萸碱联合应用能够显著缩短寻找平台的潜伏期47％。结论：单独使用柚皮苷或吴茱萸碱均能改善痴呆模型小鼠的学习记忆能力，柚皮苷长期的使用优于短期的治疗效果，但是吴茱萸碱短期有效，长期作用反而下降;柚皮苷与吴茱萸碱联合应用能够显著改善Appswe／PS△E9痴呆模型小鼠的学习记忆能力，但联合用药组并未表现出强于单独给药组的协同保护效应。

关键词：中药药理实验阿尔茨海默病病理机制学习记忆动物模型

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恒河猴艾滋病模型中枢神经系统及淋巴结病变的电镜观察

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中国比较医学杂志 2012年第6期22卷 5-8,83,84页

作者：徐艳峰孙丽华潘菊华卢耀增中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021 中国中医科学院广安门医院北京100053

目的观察恒河猴艾滋病模型不同感染阶段中枢神经系统及淋巴结的超微结构改变,探讨艾滋病的发病机制和病理改变的发展过程。方法 15只恒河猴,1只为正常对照,其余14只静脉注射感染SIVmac239猴艾滋病病毒,分别于感染后1周,2周,1个月,2个月... 详细信息

目的观察恒河猴艾滋病模型不同感染阶段中枢神经系统及淋巴结的超微结构改变,探讨艾滋病的发病机制和病理改变的发展过程。方法 15只恒河猴,1只为正常对照,其余14只静脉注射感染SIVmac239猴艾滋病病毒,分别于感染后1周,2周,1个月,2个月,12个月,18个月取腹股沟淋巴结及下丘脑组织进行透射电镜检查。结果感染后1周即可出现淋巴结内淋巴细胞病变,表现为线粒体肿胀,嵴溶解,出现自噬体等。感染后2周及1个月时淋巴细胞病变主要表现为线粒体肿胀,嵴溶解;感染2个月时淋巴细胞细胞核形态出现明显改变。感染后12个月淋巴结内多数淋巴细胞出现病变,细胞肿胀,细胞器正常形态大部分消失;部分细胞出现溶解性坏死的特征。至感染后期(18个月时),淋巴结内局部淋巴细胞稀疏,细胞核肿胀或形态不规则。中枢神经系统的病变在感染后1周出现,表现为神经纤维肿胀,感染后2周出现神经元的病变,表现为神经元线粒体肿胀,粗面内质网脱颗粒,尼氏体消失;神经纤维内出现空泡。感染后12个月及18个月时,神经元和神经纤维的病变加重。结论在SIV感染早期,淋巴结内淋巴细胞及中枢神经系统即可出现病变,维持一段相对稳定的时间后,至疾病后期,病变加重。中枢神经系统与淋巴结的超微结构病变发展规律有一定的相似性。

关键词： SIV 艾滋病动物模型电镜恒河猴中枢神经系统淋巴结

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研究抗病毒口服液抗EV71病毒作用

研究抗病毒口服液抗EV71病毒作用

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世界中联中药专业委员会第四届学术年会暨中药新药研发与中药资源可持续利用国际研讨会

作者：鲍琳琳许黎黎徐艳峰李枫棣吕琦秦川中国医学科学院医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京 100021

目的：研究抗病毒口服液体内抗EV7l病毒作用。方法：10日龄ICR小鼠，随机分为对照组，模型组，利巴韦林组，抗病毒高、中、低剂量组共6组，每组50只。MP10107TCISD50以腹腔注射的方式感染ICR小鼠。小鼠感染后2小时灌胃给药，每日2次，连... 详细信息

目的：研究抗病毒口服液体内抗EV7l病毒作用。方法：10日龄ICR小鼠，随机分为对照组，模型组，利巴韦林组，抗病毒高、中、低剂量组共6组，每组50只。MP10107TCISD50以腹腔注射的方式感染ICR小鼠。小鼠感染后2小时灌胃给药，每日2次，连续5天，模型组给与等体积生理盐水。每日观察小鼠临床症状变化情况，连续观察8天，并根据体重、后肢瘫痪及死亡情况等评分。小鼠感染后第3天，第5天取肌肉组织测定病毒载量。结果：抗病毒口服液改善感染EV71病毒ICR小鼠的临床症状，降低死亡率，显著性降低肌肉组织中病毒载量。结论：抗病毒口服液具有体内抗EV7l病毒作用。

关键词：抗病毒药物中药制剂 EV71病毒动物实验

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