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2017年中国微生物学会学术年会

作者：孙萌萌唐军占玲俊中国医学科学院医学实验动物研究所国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室卫计委人类疾病比较医学重点实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京市人类重大疾病实验动物模型中国医学科学院结核病中心北京100021

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实验动物源人兽共患病防控战略研究

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中国动物检疫 2017年第2期34卷 38-41页

作者：孔琪夏霞宇高虹魏强马继红池丽娟秦川中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生计生委人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京市人类重大疾病动物模型工程技术研究中心北京100021 中国动物疫病预防控制中心北京100125

本文通过实地调研、会议研讨、问卷调查和资料查阅等方法,阐明了实验动物源人兽共患病的防控现状,分析了其中存在的问题,总结了相关疫病的防控经验。在此基础上,形成了我国实验动物源人兽共患病防控的战略目标和措施,提出了相应建议。

关键词：实验动物人兽共患病动物病原质量控制战略研究

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结核病易感性的研究进展

结核病易感性的研究进展

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第十三届中国实验动物科学年会

作者：孙萌萌唐军秦川占玲俊中国医学科学院医学实验动物研究所国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室卫计委人类疾病比较医学重点实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心中国医学科学院结核病中心

大量的遗传学研究表明:结核病是多基因和环境因素共同作用的结果。近年来,结核病易感基因及其单核苷酸多态性位点(SNPs)研究成为热点,但与易感性有确切关联的基因和SNP报道较少,并且某些易感基因有种族、人群、地域分布的差异,不同种群... 详细信息

大量的遗传学研究表明:结核病是多基因和环境因素共同作用的结果。近年来,结核病易感基因及其单核苷酸多态性位点(SNPs)研究成为热点,但与易感性有确切关联的基因和SNP报道较少,并且某些易感基因有种族、人群、地域分布的差异,不同种群或地区的局部研究得到的研究结论常不一致,甚至相反,因此,需要进一步寻找能广泛适用的、有确切关联的易感基因。鉴于此,需要在具备基因多样性的实验动物中进行初筛,然后在动物或人群中验证。协同杂交(Collaborative Cross,CC)小鼠具有遗传多样性并且有清晰的背景基因数据库,可为结核易感性研究提供新的工具。本综述总结已报道的结核易感基因及其SNP的研究进展,展望CC小鼠在此研究的应用和重要意义。

关键词：结核病易感性基因多态性复杂性状遗传小鼠

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天然免疫在非典型性猴免疫缺陷病毒(SIV)感染中的作用机制探讨

天然免疫在非典型性猴免疫缺陷病毒(SIV)感染中的作用机制探讨

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2017第十九届中国科协年会

作者：熊圣文王卫丛喆薛婧陈霆魏强秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

背景在不同的个体中,人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染导致差异性的疾病进程.95％以上的感染者出现典型性疾病进程,还有约5％HIV-1 感染者出现非典型疾病进程,表现为病毒感染后,病毒载量水平维持在检测线以下或出现较晚,CD4+ T 细胞绝对数下...

背景在不同的个体中,人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染导致差异性的疾病进程.95％以上的感染者出现典型性疾病进程,还有约5％HIV-1 感染者出现非典型疾病进程,表现为病毒感染后,病毒载量水平维持在检测线以下或出现较晚,CD4+ T 细胞绝对数下降不明显,疾病进程呈现不典型性.在小剂量多次粘膜感染艾滋病猴模型研究中,研究人员也发现类似情况.部分恒河猴被猴免疫缺陷病毒(SIV)/猴-人免疫缺陷病毒(SHIV)感染后,血浆病毒载量出现明显的延迟和(或)峰值下降现象.目前研究发现细胞免疫、中和抗体等特异性免疫在非典型性SIV 感染中的作用十分有限,而天然免疫一直被认为是病毒感染早期的一种重要防御机制,包括巨噬细胞的吞噬作用、NK 细胞的ADCC 作用以及树突细胞的抗原提呈作用等;但在非典型艾滋病毒感染过程中,天然免疫发挥作用及作用机制目尚不清楚.

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CD45异构体对HIV-1gp120蛋白诱导T细胞凋亡的影响

CD45异构体对HIV-1gp120蛋白诱导T细胞凋亡的影响

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2017第十九届中国科协年会

作者：李克雷薛婧丛喆陈霆魏强秦川北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

HIV感染可通过多种机制引起机体内T细胞凋亡,其中,病毒的编码蛋白可以根据其在靶细胞内的表达水平调节细胞凋亡.gp120蛋白作为HIV包膜蛋白的主要组成部分,既可以在细胞外与细胞表面的CD4分子结合导致靶细胞和旁观者细胞凋亡,又可以在细...

HIV感染可通过多种机制引起机体内T细胞凋亡,其中,病毒的编码蛋白可以根据其在靶细胞内的表达水平调节细胞凋亡.gp120蛋白作为HIV包膜蛋白的主要组成部分,既可以在细胞外与细胞表面的CD4分子结合导致靶细胞和旁观者细胞凋亡,又可以在细胞内上调Fas、FasL、TNF-α、TRAIL受体DR4和DR5的表达诱导细胞凋亡,还可以使细胞滞留在G2期导致胞内ROS升高促进凋亡.研究显示,CD45分子在HIV-1gp120蛋白介导的CD4+T细胞凋亡中发挥调节作用,在gp120蛋白的作用下,CD45分子通过调节FasL的表达参与细胞凋亡.作为Ⅰ型跨膜糖蛋白,CD45分子主要以CD45RABC、CD45RO、CD45RA、CD45RB和CD45RC等异构体形式表达于淋巴细胞,其胞外结构域糖基化形式的差异对CD45异构体活性和功能具有重要影响.目前,CD45异构体在HIV感染引起的细胞凋亡方面研究甚少,为加深对CD45异构体在细胞凋亡过程中作用的理解,本研究通过构建稳定表达CD45异构体的细胞系,比较了CD45异构体在调节gp120蛋白介导的CD4+T细胞凋亡过程中的差异,并进一步分析了其下游分子Lck的活性变化.在本研究中,我们首先比较了CD45+的Jurkat细胞和CD45－的J45.01细胞受到gp120诱导时凋亡率的变化.结果显示,Jurkat细胞可发生明显凋亡现象,J45.01细胞不发生凋亡,说明CD45分子在gp120介导的凋亡过程发挥了调节作用;随后,我们构建了5种稳定表达CD45异构体的细胞系,并比较了这5种异构体在gp120介导T细胞凋亡过程中的作用.结果发现,CD45RO可以明显调节细胞凋亡,其他异构体对细胞凋亡无调节作用;接下来,我们分析了CD45的糖基化形式对细胞凋亡的影响.O-聚糖存在于除CD45RO以外的异构体上,我们通过O-糖基化抑制剂去除这几种异构体细胞表面的O-糖基化.gp120蛋白诱导凋亡处理后,去除O-糖基化后的CD45RA-J45.01细胞表现出凋亡特性,其它异构体细胞未发生明显凋亡.说明O-聚糖对HIV-1gp120蛋白介导的细胞凋亡有一定的抑制作用,但在各异构体中发挥的作用大小并不一致,这可能与CD45异构体的空间结构有关.为了进一步说明CD45异构体在调节细胞凋亡中的功能差异,在HIV-1gp120蛋白诱导各个细胞系后,我们分析了CD45异构体酪氨酸磷酸酶的活性变化.通过比较CD45对其底物Lck的活性抑制位点Tyr505的去磷酸化程度,发现CD45RO可使Lck Tyr505发生明显的去磷酸化,说明HIV-1 gp120 蛋白处理细胞后,CD45RO 的活性增强;Lck Tyr394 是Lck 的活化位点,该位点磷酸化程度增强代表Lck 活性增强.通过比较该位点磷酸化程度变化,发现在CD45RO-J45.01 细胞中Lck Tyr394 磷酸化程度增强,说明在HIV-1 gp120 蛋白处理细胞后CD45RO 促进了Lck 的活化;Lck 的活化在胞内信号转导中具有重要作用,于是我们利用Lck的特异性抑制剂PP2 处理CD45RO-J45.01 细胞和Jurkat 细胞,再经HIV-1 gp120 蛋白诱导凋亡处理,发现PP2可抑制CD45RO-J45.01 细胞和Jurkat 细胞凋亡,说明Lck 的活化参与HIV-1 gp120 蛋白介导的T 细胞凋亡.综上所述,本研究明确了CD45 异构体在调节HIV-1 gp120 蛋白介导的T 细胞凋亡中存在的差异,揭示了这一凋亡过程主要是CD45RO 通过活化Lck 促使凋亡信号向胞内传导,进而对细胞凋亡起调节作用.本研究结果为HIV-1 感染引起的旁观者细胞凋亡奠定了理论基础.

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SIV感染猴外周血CD14+单核细胞CD169分子表达的变化

SIV感染猴外周血CD14+单核细胞CD169分子表达的变化

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2017第十九届中国科协年会

作者：李想丛喆薛婧魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

背景唾液酸黏附素(Siglecs)是宿主最大的一组唾液酸结合蛋白,是表达于免疫系统的Ⅰ型跨膜蛋白.Siglec-1,也被称作CD169,是第一个被发现的Siglecs 的成员,主要表达于单核巨噬细胞和树突状细胞的表面.有研究发现,HIV 感染机体后,组织巨...

背景唾液酸黏附素(Siglecs)是宿主最大的一组唾液酸结合蛋白,是表达于免疫系统的Ⅰ型跨膜蛋白.Siglec-1,也被称作CD169,是第一个被发现的Siglecs 的成员,主要表达于单核巨噬细胞和树突状细胞的表面.有研究发现,HIV 感染机体后,组织巨噬细胞和外周血单核细胞高表达CD169,并且随着外周血血浆载量的升高而升高,CD169 在外周血单核细胞中表达量的变化,可以作为研究HIV/SIV 感染的一个早期的表面标记.而在VSV 等病毒的研究中发现,病毒感染单核巨噬细胞后可以诱导细胞释放IFN-α,从而诱导细胞表达CD169.本文拟观察恒河猴感染SIVmac239 前后外周血单核细胞以及各亚群单核细胞表面CD169 分子表达量的变化,分析SIV 感染与CD169 表达的关系;并分析其变化与SIV 感染及细胞因子IFN-α作用的关系.方法本研究中,我们用SIVmac239 静脉途径感染正常中国恒河猴,运用流式细胞术检测不同感染时间外周血CD14+单核细胞及其表面分子CD169 的变化.同时采集正常恒河猴外周血,分离PBMC,流式细胞术分选CD14+单核细胞,分别使用SIVmac239 直接感染、和细胞因子IFN-α刺激CD14+单核细胞,流式细胞术检测细胞表面分子CD169 表达量的变化.结果正常恒河猴外周血CD14+单核细胞表面低表达CD169,经SIVmac239 病毒感染后,CD14+单核细胞的比例出现下降(P＜0.01),CD14+单核细胞表面CD169 表达量升高(P＜0.01),并且在感染的急性期,CD169 的表达量迅速增加.不同外周血单核细胞亚型CD14low/-CD16+,CD14++CD16- 和CD14+CD16+感染后CD169 的表达量均明显增高(P＜0.01),而CD14+CD16+单核细胞中CD169 的升高相比其他两种亚群更为明显.本研究中,我们在体外用SIV 直接感染恒河猴外周血CD14+单核细胞,不能诱导单核细胞表达CD169,而细胞因子IFN-Α可以刺激CD14+单核细胞高表达CD169 分子.结论正常恒河猴经SIVmac239 病毒感染后,外周血单核细胞高表达CD169,不同亚群单核细胞表面CD169 分子均出现明显增加,而CD14+CD16+单核细胞中CD169 的升高更为明显,提示CD14+CD16+单核细胞在感染中可能发挥重要的作用.病毒直接感染不能导致单核细胞高表达CD169,SIV 感染猴外周血单核细胞表面CD169 的升高是体内细胞因子,尤其是IFN-α作用的结果.

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Fkbp51基因敲除小鼠肝脏与大脑海马区RNA表达谱系的分析比较

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中国比较医学杂志 2016年第5期26卷 40-48页

作者：徐玉雪邱彬魏强雍伟东中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的通过分析野生型小鼠(WT)与Fkbp51基因敲除(KO)小鼠肝脏、海马RNA表达谱系之间的差异,研究Fkbp51基因在代谢通路和神经通路中的作用。方法利用第二代测序技术对Fkbp51KO与WT小鼠的肝脏与海马mRNA进行表达谱测序,将测序结果用BRB-Arra... 详细信息

目的通过分析野生型小鼠(WT)与Fkbp51基因敲除(KO)小鼠肝脏、海马RNA表达谱系之间的差异,研究Fkbp51基因在代谢通路和神经通路中的作用。方法利用第二代测序技术对Fkbp51KO与WT小鼠的肝脏与海马mRNA进行表达谱测序,将测序结果用BRB-Array Tools进行分析,筛选出小鼠肝脏与海马的差异基因,然后分别利用在线工具DAVID对差异基因进行GO本体分析,STRING数据库对其进行蛋白质的相互作用网络分析,并利用Genecard对基因进行注释。结果 (1)Fkbp51的缺失,在肝脏中造成类固醇生物合成及代谢、脂类物质代谢以及氧化还原反应等相关基因表达水平的变化;(2)在海马中造成机械刺激探测、学习或记忆、突触传递的调节、PPAR信号通路、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)等相关基因表达水平的变化;(3)在肝脏与海马中,Fkbp51的缺失同时造成了11个基因的共差异表达,这11个基因的蛋白网络互作图显示:HMGCS2与INSIG1及相关蛋白形成网络,而USP2与PER、CRY、DBP等相关蛋白形成另一个网络。这两个网络既参与代谢也参与神经调节。结论Fkbp51在代谢与神经中的作用既是相互独立又是相互联系的。

关键词： Fkbp51基因敲除小鼠肝脏神经系统 RNA-seq

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游离SIVmac239病毒与T细胞介导两种方式感染内皮细胞的效果比较

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中国比较医学杂志 2016年第6期26卷 1-5,10页

作者：黄丹丛喆徐珮薛婧魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的比较游离病毒感染与T细胞介导的感染方式对SIV感染内皮细胞的影响,探索SIVmac239感染内皮细胞的主要途径,从而为SIV入侵血脑屏障的机制提供理论基础。方法采用游离SIV病毒直接感染内皮细胞和SIV感染的CEMx174细胞与内皮细胞共培养... 详细信息

目的比较游离病毒感染与T细胞介导的感染方式对SIV感染内皮细胞的影响,探索SIVmac239感染内皮细胞的主要途径,从而为SIV入侵血脑屏障的机制提供理论基础。方法采用游离SIV病毒直接感染内皮细胞和SIV感染的CEMx174细胞与内皮细胞共培养的两种方式,通过巢式PCR、间接免疫荧光法、Western blotting以及ELISA检测内皮细胞的感染程度。结果两种感染方式都能在内皮细胞内检测到前病毒DNA,感染细胞与内皮细胞共培养时,内皮细胞内前病毒DNA含量,SIV P27蛋白表达量和细胞培养上清液中P27含量远高于游离病毒直接感染的方式。结论细胞介导的感染方式相较于游离病毒直接感染方式对内皮细胞的感染能力更强,可能是SIV病毒入侵血脑屏障的主要途径。

关键词： SIV 艾滋病脑病内皮细胞 P27

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CEMx174细胞中SAMHD1蛋白表达与SIVmac239病毒水平的相关性研究

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中国比较医学杂志 2016年第4期26卷 41-45页

作者：彭灵娟丛喆薛婧宋铭晶魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的研究SIV在感染CEMx174细胞过程中,SAMHD1在基因和蛋白水平的变化与病毒水平之间的相关性。方法 SIVmac239病毒感染CEMx174细胞后,每天收集上清和细胞,应用Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,检测细胞内SAMHD1 mRNA的相对表达量的变... 详细信息

目的研究SIV在感染CEMx174细胞过程中,SAMHD1在基因和蛋白水平的变化与病毒水平之间的相关性。方法 SIVmac239病毒感染CEMx174细胞后,每天收集上清和细胞,应用Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,检测细胞内SAMHD1 mRNA的相对表达量的变化;用Western blot检测SAMHD1蛋白与SIVmac239P27蛋白表达量的变化,并分析其相关性。结果 CEMx174细胞感染SIVmac239后,细胞中的SAMHD1 mRNA基于内参基因GAPDH的相对表达量逐渐增加,前3 d分别增加了14%,16%,42%,随后开始迅速增加,第4天达到了200%,第6天更是达到了890%;细胞中SAMHD1蛋白的表达量在感染后第1、2天时变化不大,随后逐渐降低,到第5、6天时,几乎检测不到,呈现逐渐下降的趋势。结论 CEMx174细胞感染SIVmac239后,SAMHD1基因表达上调,与上清中病毒载量水平正相关,细胞内SAMHD1蛋白水平与SIVmac239 P27蛋白水平呈负相关。

关键词： SAMHD1 HIV-1 SIV 实时荧光定量RT-PCR

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复杂性状遗传CC小鼠信息资源及研究应用

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中国比较医学杂志 2016年第7期26卷 11-14,73页

作者：孔琪夏霞宇秦川中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

复杂性状遗传CC小鼠(CC小鼠)由不同遗传背景的小鼠品系杂交后,近交培育而成,用于研究人类复杂性状疾病和疾病的遗传差异。CC小鼠能体现不同小鼠亚种的遗传差异,其单核苷酸多态性是传统近交系小鼠的四倍。CC小鼠在生命科学与医学研究领... 详细信息

复杂性状遗传CC小鼠(CC小鼠)由不同遗传背景的小鼠品系杂交后,近交培育而成,用于研究人类复杂性状疾病和疾病的遗传差异。CC小鼠能体现不同小鼠亚种的遗传差异,其单核苷酸多态性是传统近交系小鼠的四倍。CC小鼠在生命科学与医学研究领域的应用越来越广泛。本文通过信息检索等方式对CC小鼠相关信息资源进行梳理,阐述了CC小鼠的起源、数据库、应用工具,以及研究领域等,以推动CC小鼠资源在中国得到广泛应用。

关键词：复杂性状遗传CC小鼠小鼠品系资源数据库人类疾病

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