检索结果-内蒙古大学图书馆

中华血液学杂志 2007年第8期28卷 532-536页

作者：王东海王洋王敏刘航徐智芳饶青孟继虹王建祥中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的检测 pig7基因在急性白血病(AL)细胞中的表达水平及其临床意义,在基因甲基化调控方而探讨 pig7基因表达异常的可能机制。方法应用实时定量逆转录 PCR(RT-PCR)方法对138例 AL 患者、21名正常人骨髓标本以及6个白血病细胞株进行了 pig... 详细信息

目的检测 pig7基因在急性白血病(AL)细胞中的表达水平及其临床意义,在基因甲基化调控方而探讨 pig7基因表达异常的可能机制。方法应用实时定量逆转录 PCR(RT-PCR)方法对138例 AL 患者、21名正常人骨髓标本以及6个白血病细胞株进行了 pig7转录本的检测,并在全反式维甲酸(ATRA)作用下观察 NB4细胞分化效应及 pig7基因表达情况。进行限制性内切酶分析以鉴定白血病细胞中存在的 pig7转录剪接体。通过甲基化特异性 PCR(MSP)检测白血病细胞 pig7基因启动子区域是否存在过度甲基化。结果 AL 进展期(包括初治、复发/难治)患者骨髓细胞 pig7 mRNA 相对表达水平与正常骨髓细胞相比明显降低(RQ 中位数分别为0.62和18.30,P<0.01),其中急性髓系白血病(AML)与急性淋巴细胞白血病(ALL)差异无统计学意义,而初治组与复发/难治组比较 pig7mRNA 水平差异有统计学意义,前者明显高于后者(RQ 中位数分别为1.43和0.16,P<0.05)。pig7低表达患者完全缓解率也较低(P<0.05)。NB4细胞经 ATRA 诱导分化后 pig7表达水平由1.61±0.72增至44.75±3.93(P<0.01)。酶切结果提示白血病细胞中仅存在 SIMPLE 剪接体。在 K562、HL-60及 Nalm-6细胞 pig7启动子区域存在过度甲基化,而 U937、NB4和 kasumi-1细胞中该区域非甲基化状态占优势。结论 pig7基因在 AL 的表达下调为白血病发病机制的探讨和疗效预测提供了新的思路。

关键词：白血病,急性基因,pig7 聚合酶链反应,实时定量 DNA甲基化

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Gleevec耐药白血病细胞中P-糖蛋白功能失调及其调节

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中国肿瘤临床 2007年第17期34卷 973-977页

作者：齐静杨铭周圆王彩云熊冬生杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020

目的:明确Pgp在Gleevec耐药白血病细胞中的表达和功能,为临床合理用药提供理论指导。方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测K562/G01细胞对阿霉素(Doxorubicin,DOX)和伊马替尼(Gleevec,STI571)细胞毒作用的敏感性以及Pgp抑制剂维拉帕米(Verapa... 详细信息

目的:明确Pgp在Gleevec耐药白血病细胞中的表达和功能,为临床合理用药提供理论指导。方法:四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测K562/G01细胞对阿霉素(Doxorubicin,DOX)和伊马替尼(Gleevec,STI571)细胞毒作用的敏感性以及Pgp抑制剂维拉帕米(Verapamil,VPL)对K562/G01细胞药物敏感性的调节作用;RT-PCR和Western-blotting方法检测细胞中MDR基因mdr1及Pgp的表达;流式细胞仪(Flow cytometry,FCM)检测细胞内DOX及罗丹明123(Rhodamin123,Rho123)水平以及Gleevec和ATP对Pgp功能的调节作用。结果:人白血病Gleevec耐药K562/G01细胞对Gleevec耐药约40倍,但对MDR类化疗药物DOX却保持敏感,而且,Pgp抑制剂VPL不改变K562/G01细胞对DOX的敏感性。与MDR表型的K562/A02细胞一样,K562/G01细胞表达mdr1及其编码的Pgp蛋白,但Pgp却没有药物外排泵功能,K562/G01细胞中DOX或Rh123浓度与敏感细胞K562相当。加入Gleevec或ATP可明显降低K562/G01细胞中DOX水平。结论:人白血病Gleevec耐药细胞K562/G01表达mdr1/Pgp,但Pgp功能明显受阻,Bcr/Abl抑制剂Gleevec或ATP可部分恢复K562/G01细胞中Pgp的药物外排泵功能。

关键词：白血病 Gleevec耐药性 P-糖蛋白

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白血病细胞系来源的P2X_7受体的功能研究

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生物物理学报 2007年第2期23卷 139-144页

作者：张海燕郑国光聂坤王琳林永敏种靖慧马媛媛吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

P2X7受体是ATP门控的离子通道。从白血病细胞系J6-1细胞中扩增P2X7受体编码区全序列,克隆到pTARGET真核表达载体,经DNA序列分析后转染Ramos细胞,获得稳定表达细胞株;应用RT-PCR、Westernblot和流式细胞术检测P2X7受体在Ramos中的表达;... 详细信息

P2X7受体是ATP门控的离子通道。从白血病细胞系J6-1细胞中扩增P2X7受体编码区全序列,克隆到pTARGET真核表达载体,经DNA序列分析后转染Ramos细胞,获得稳定表达细胞株;应用RT-PCR、Westernblot和流式细胞术检测P2X7受体在Ramos中的表达;荧光分光光度计检测P2X7受体介导的胞内钙离子浓度变化。结果显示,J6-1细胞来源的P2X7受体在第559位有一个A→G的有义突变,导致Asn187→Asp187,可在Ramos细胞中表达,在特异性激动剂BzATP作用下可引起胞内钙离子浓度的升高,但所需激动剂浓度高于常规浓度。

关键词： P2X7受体克隆表达功能 ATP酶

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B3HM细胞免疫小鼠脾细胞scFv噬菌体展示文库的构建及表达

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中国生物工程杂志 2007年第7期27卷 12-16页

作者：许静张磊刁世勇刘斌孟磊姜学英韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:利用噬菌体展示技术构建B3HM细胞免疫小鼠的脾细胞表达scFv文库。方法:用人骨髓细胞系B3HM细胞免疫小鼠,取其脾细胞采用RT-PCR方法扩增VH和Vk基因并克隆入噬菌体展示表达载体,构建scFv文库,测定文库的库容量,BstNI酶切单克隆分析... 详细信息

目的:利用噬菌体展示技术构建B3HM细胞免疫小鼠的脾细胞表达scFv文库。方法:用人骨髓细胞系B3HM细胞免疫小鼠,取其脾细胞采用RT-PCR方法扩增VH和Vk基因并克隆入噬菌体展示表达载体,构建scFv文库,测定文库的库容量,BstNI酶切单克隆分析文库的多样性,对文库进行富集检测,鉴定单克隆噬菌体与B3HM细胞结合反应。结果:文库的库容为5×106cfu,单克隆的BstNI酶切图谱显示多样性,单克隆噬菌体抗体与B3HM细胞呈阳性反应。结论:噬菌体展示文库的成功构建为寻找新的致白血病相关基因,阐明白血病发病机理奠定了基础。

关键词： B3HM细胞噬菌体展示抗体库单链抗体

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原核表达载体pOPE101-8E5的改构及单链抗体的表达鉴定

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中国生物工程杂志 2007年第4期27卷 18-22页

作者：许静刁世勇张磊徐洁孟磊中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌... 详细信息

利用基因重组技术将链亲和素(core-streptavidin)cDNA插入原核表达载体pOPE101-8E5的3′端,并用单链抗体scFv-C4的重链和轻链可变区cDNA取代其scFv-8E5,构建重组表达载体pOPE101-C4∷core-streptavidin。将该表达载体转化入在大肠杆菌中进行诱导表达,用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法分析表达产物的表达量和产物活性。结果提示成功地获得一个分子量约为45kDa的scFv-C4∷core-streptavidin的融合蛋白,它可结合KG1a细胞裂解物中分子量约为60kDa、45kDa的蛋白带,且其结合功能可以通过融合蛋白中的链亲和素基因直接测定。

关键词：链亲和素单链抗体融合蛋白表达载体

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特异性抗细胞表面分子单链抗体的分离和鉴定

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中国免疫学杂志 2007年第9期23卷 839-841,846页

作者：许静吴立华徐洁刘俊霞孟磊何一心宋增璇中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离和鉴定抗造血干/祖细胞表面分子单链抗体(scFv),克隆其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布。方法:用完整的KG1a细胞吸附法富集文库3轮,再用CD44单克隆抗体为引导分子进行引导选择,分离... 详细信息

目的:从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离和鉴定抗造血干/祖细胞表面分子单链抗体(scFv),克隆其基因并研究其对应抗原在不同细胞表面的分布。方法:用完整的KG1a细胞吸附法富集文库3轮,再用CD44单克隆抗体为引导分子进行引导选择,分离单克隆后用间接免疫荧光法鉴别其细胞结合特异性。对具有不同细胞结合特异性的克隆进行DNA序列分析,用一级结构不同的单链抗体作免疫印迹鉴别抗原分子量。结果:间接免疫荧光结果显示,64个阳性克隆分别识别不同的细胞系,分属3种细胞结合谱,DNA序列测定结果证明C95、H1两个克隆具有独特的一级结构,利用Westernblot成功测定它们特异性识别KG1a细胞膜蛋白的表观分子量分别为34kD/22kD。结论:成功建立了分离和鉴定抗细胞表面分子phage-scFv单克隆的方法,并从抗KG1a细胞的噬菌体展示文库中分离出2个抗造血干/祖细胞的特异性克隆。

关键词：噬菌体展示引导选择表面分子单链抗体

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β-catenin基因在白血病患者中的表达及其临床意义

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中华血液学杂志 2007年第8期28卷 541-544页

作者：麦玉洁邱录贵李增军于珍李长虹王亚非王国蓉李茜中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室大连大学附属中山医院血液科 116001

目的检测β-catenin在白血病患者中的表达,仞步探讨其在白血病中的作用。方法采用半定量 RT-PCR 方法检测β-catenin 在白血病患者中的表达,同时对部分标本应用免疫细胞化学检测其蛋白表达水平,结合临床资料分析其表达的意义。结果骨髓... 详细信息

目的检测β-catenin在白血病患者中的表达,仞步探讨其在白血病中的作用。方法采用半定量 RT-PCR 方法检测β-catenin 在白血病患者中的表达,同时对部分标本应用免疫细胞化学检测其蛋白表达水平,结合临床资料分析其表达的意义。结果骨髓单个核细胞(MNC)中β-cateninmRNA 在急性髓系白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中的表达(中位值分别为0.7593、0.6415)均明显高于正常人(0.3597)(P 值分别为0.001、0.016),也明显高于慢性粒细胞白血病(CML)慢性期患者(0.2571)(P 值分别为0.001、0.008),但存 AML 和 ALL 之间差异无统计学意义(P>0.05)。β-catenin 在 CML 慢性期患者的表达与正常人相比差异无统计学意义,但是在急变和加速期患者(0.9152)中明显增高,与急性白血病水平相当。按照 FAB 分型,β-catenin 在 AML M_5亚型中高表达,而在 M_3中表达明显低于其他亚型。免疫细胞化学结果显示,正常 MNC β-catenin 主要分布于细胞膜和细胞质,而在白血病细胞中,除 M_3外几乎均可以在细胞核中检测到其程度不一的表达。患者年龄、白细胞计数、高危核型以及治疗反应与β-catenin 均无显著相关,但在 AML 组β-catenin 与 CD34抗原表达有明显相关性。结论经典的 Wnt/β-catenin 信号传导途径有可能在急性白血病及 CML 急变和加速期中被激活。

关键词：基因,β-catenin 白血病基因表达

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骨髓增生异常综合征的治疗选择

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中华内科杂志 2007年第4期46卷 265-267页

作者：肖志坚郝玉书中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组起源于造血干细胞的获得性克隆性疾患，其特征性病理生理改变是克隆性造血干／祖细胞发育异常（dysplasia）和无效造血（ineffective hamatopoiesis），其基本临床特征是骨髓中造血细胞有发育异常的形... 详细信息

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组起源于造血干细胞的获得性克隆性疾患，其特征性病理生理改变是克隆性造血干／祖细胞发育异常（dysplasia）和无效造血（ineffective hamatopoiesis），其基本临床特征是骨髓中造血细胞有发育异常的形态学表现和外周血中血细胞减少，以及转变为急性髓系白血病（AML）的危险性很高。迄今，美国食品与药物管理局（FDA）批准用于MDS的药物已有3个：2004年5月19日批准的5-氮杂胞苷（azacytidine，5AC），2005年12月27日批准的雷利度胺（Lenalidomide，CC-5031，Revlimid）和2006年5月2日批准的地西他滨（decitabine，DAC）。

关键词：骨髓增生异常综合征美国食品与药物管理局造血干/祖细胞急性髓系白血病治疗病理生理改变 5-氮杂胞苷发育异常

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急性髓系白血病诱导缓解治疗期残留白血病细胞比例的预后价值

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中华血液学杂志 2007年第5期28卷 341-343页

作者：薛华李睿张莉杨栋林李洪强于明华郝玉书肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

染色体核型异常及其受累基因是急性髓系白血病（AML）最重要的独立预后因素和治疗策略制定的依据，但由于细胞和分子遗传学检测技术要求高，目前在我国尚难以成为常规。已有研究表明通过白血病细胞的清除速度及程度评估急性白血病的早... 详细信息

染色体核型异常及其受累基因是急性髓系白血病（AML）最重要的独立预后因素和治疗策略制定的依据，但由于细胞和分子遗传学检测技术要求高，目前在我国尚难以成为常规。已有研究表明通过白血病细胞的清除速度及程度评估急性白血病的早期疗效具有重要的临床意义。我们对原发初治AML患者在诱导缓解治疗期不同时点残留白血病细胞比例的预后意义进行了探讨，报道如下。

关键词：残留白血病细胞急性髓系白血病诱导缓解治疗期预后价值染色体核型异常分子遗传学急性白血病

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小鼠β-防御素2肿瘤疫苗的构建及特性鉴定

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中国免疫学杂志 2007年第8期23卷 675-679页

作者：马小彤徐玢董成亚石洋林永敏吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:构建分泌性小鼠β-防御素2(MBD2)真核表达质粒,转染L1210淋巴细胞白血病细胞,对转染细胞进行功能及特性鉴定。方法:RT-PCR法从小鼠皮肤细胞克隆MBD2成熟部分基因片段,用overlap PCR法将小鼠Igκ信号肽与MBD2成熟片段相连,构建MBD2... 详细信息

目的:构建分泌性小鼠β-防御素2(MBD2)真核表达质粒,转染L1210淋巴细胞白血病细胞,对转染细胞进行功能及特性鉴定。方法:RT-PCR法从小鼠皮肤细胞克隆MBD2成熟部分基因片段,用overlap PCR法将小鼠Igκ信号肽与MBD2成熟片段相连,构建MBD2分泌表达载体。经测序证实序列正确后,脂质体法转染L1210细胞,筛选稳定表达细胞株。RT-PCR、Western blot检测瘤苗MBD2的表达。Transwell法检测瘤苗分泌的MBD2对不成熟树突状细胞(iDC)迁移的作用。细胞计数、PI染色及FACS观察转染MBD2对肿瘤细胞增殖、细胞周期及MHCⅠ类(H-2Kd,H-2Dd)、Ⅱ类(I-Ad)分子及共刺激分子(CD80、CD860)表达的影响。结果:转染MBD2基因的肿瘤细胞表达并分泌MBD2,并以剂量依赖方式趋化iDC,表明具有生物学活性。转染MBD2基因对肿瘤细胞生长增殖、细胞周期及细胞表面MHC分子及共刺激分子表达无明显影响。结论:本实验成功构建了MBD2白血病细胞疫苗,为进一步体内评价抗白血病效果奠定了基础。

关键词：防御素天然免疫瘤苗急性淋巴细胞白血病

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