检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2023年第12期43卷 1905-1910页

作者：鞠瑞王钰铖朱蕾于晓丽董燕郭磊中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院药理学系北京100005 中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院实验教学中心北京100005 北京协和医学院护理学院北京100144

目的探索用药前、用药时及用药后三幕微情境课堂在护理药物学教学中的成效。方法选取护理本科2020级和2021级完成护理药物学课程的学生作为研究对象,分别设为对照组(用药情境教学)和实验组(用药情境细化的三幕微情境教学),研究所选章节... 详细信息

目的探索用药前、用药时及用药后三幕微情境课堂在护理药物学教学中的成效。方法选取护理本科2020级和2021级完成护理药物学课程的学生作为研究对象,分别设为对照组(用药情境教学)和实验组(用药情境细化的三幕微情境教学),研究所选章节知识内容相同。对两组护理药物学课程成绩和试题回答准确率进行分析;设计调查问卷分析学生在三幕微情境课堂上的学习感受。结果实验组护理药物学成绩显著高于对照组(P<0.001);对于三幕微情境课堂知识相关的闭卷考试试题,实验组答题准确率显著高于对照组(P<0.001);对于未进行教学设计调整的课堂知识相关的闭卷考试试题,两组答题准确率之间没有显著差异;调查问卷显示学生认为三幕细化用药情境对于知识学习记忆和素养培养有帮助。结论相比细化前的情境课堂,用药前中后三幕微情境课堂更合理地串联了知识要点,增加了学生知识掌握程度及职业责任意识。

关键词：护理本科护理药物学教学用药三幕微情境知识串联护理沟通

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基于共组装多肽水凝胶的级联光动力疗法用于抗肿瘤研究

基于共组装多肽水凝胶的级联光动力疗法用于抗肿瘤研究

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作者：王丹北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

由于活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)的高细胞毒性，各种基于ROS的抗肿瘤策略广泛应用于癌症治疗，如光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)、化学动力疗法和声动力疗法。尤其是，PDT作为一种非侵入性的治疗方法，已被FDA批准用于癌... 详细信息

由于活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)的高细胞毒性，各种基于ROS的抗肿瘤策略广泛应用于癌症治疗，如光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)、化学动力疗法和声动力疗法。尤其是，PDT作为一种非侵入性的治疗方法，已被FDA批准用于癌症的临床治疗，其机制主要是光敏剂在光照下吸收光能后被激发成高能状态，从而产生大量的细胞毒性ROS杀死肿瘤细胞。除了直接杀伤肿瘤细胞外，研究表明，基于ROS的PDT可以通过产生急性炎症反应、引起免疫原性物质释放和激活细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxicTlymphocytes,CTLs)来激活抗肿瘤免疫反应。然而，受到ROS固有的短半衰期和低肿瘤穿透性的限制，基于ROS的PDT杀伤肿瘤的能力是有限的。　　与此同时，研究发现另一种重要的自由基活性物质——活性氮(reactivenitrogenspecies,RNS),如过氧亚硝基阴离子、亚硝酸根离子、硝酰基阴离子和二氧化氮，相比ROS具有更长的半衰期和更强的肿瘤穿透力。RNS是由一氧化氮(nitricoxide,NO)和ROS进一步反应产生的物质，由于具有更强的氧化和硝化能力，RNS的活性和毒性更高。研究表明，RNS可以使肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associatedmacrophages,TAMs)从M2状态极化到M1状态，改变免疫抑制性肿瘤微环境(tumormicroenvironment,TME),增加抗肿瘤T细胞的浸润。因此，原位产生RNS被视为TME免疫调节和提高免疫检查点阻断(immunecheckpointblockade,ICB)疗法的一种策略。　　自组装多肽因具有合成简单、易化学修饰、生物相容性好和载药高效可控等特点被广泛应用于癌症治疗、肿瘤成像、抗菌、组织再生等生物医学领域。已有大量研究根据药物/多肽共组装、药物多肽偶联物自组装设计多肽分子，利用体外或原位自组装策略实现药物的靶向递送，达到癌症治疗的目的。受上述启发,本研究设计由Ce6-KKFKFEFEF(KEF-Ce6)和RRRRRRRR-KFKFEFEF(KEF-R8)两种多肽分子共组装形成的多肽水凝胶(CAH),能够实现ROS/NO/RNS的级联释放，改善TME,增强抗肿瘤免疫反应，从而促进癌症免疫治疗。　　本研究首先设计开发了一种共组装多肽水凝胶体系。通过经典的固相合成法成功合成了目标多肽KEF-Ce6和KEF-R8;透射电镜结果显示水凝胶的微观形貌为互相缠绕的纳米纤维，呈三维网络状结构;紫外吸收光谱和荧光光谱结果证明KEF-Ce6和KEF-R8多肽的成功共组装;流变学结果和圆二色谱结果表明共组装水凝胶比单独多肽水凝胶具有更好的力学性能，其二级结构主要为β折叠构象。随后，成功优化出最佳级联释放ROS/NO/RNS的共组装水凝胶平台，即CAH(KEF-Ce6/KEF-R8=4∶1)。体外细胞实验结果显示，CAH(4∶1)具有高效产生ROS/NO/RNS及杀伤肿瘤细胞的能力。不仅如此，体内抗肿瘤研究结果显示，CAH产生的RNS可以促进TAMs向M1型极化,下调M2型TAMs和Treg细胞,最终逆转肿瘤部位免疫抑制TME。最后，我们研究了共组装水凝胶与αPD-L1联合治疗的共组装水凝胶用于抗肿瘤治疗。结果显示，联合治疗组肿瘤抑制率约为68.4％,单独αPD-L1治疗组肿瘤抑制率约是36.4％;生存期统计结果显示，单独αPD-L1治疗组在第31天的时候，未有存活的小鼠;而联合治疗组直到第35天,仍有小鼠存活。　　综上所述，本研究成功构建了一种基于共组装多肽水凝胶级联释放ROS/NO/RNS的平台，通过进一步将ROS转化为RNS,放大了基于ROS的PDT治疗效果，并通过RNS逆转了免疫抑制TME。当与αPD-L1治疗相结合时，荷瘤小鼠显示出延长的生存期。因此，这种基于RNS的PDT和αPD-L1联合治疗的方法将是一种有望增强癌症免疫治疗的策略。本研究构建的共组装多肽水凝胶平台代表了一种适用于临床癌症治疗的技术，可以通过RNS介导的免疫调节功能提高ICB的治疗效果。

关键词：光动力疗法活性氮肿瘤微环境免疫检查点阻断疗法共组装多肽

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食管癌血液miRNA标准化内参miR--423--5p;FAM83A--CK1相互作用促进食管癌的发生发展

食管癌血液miRNA标准化内参miR--423--5p;FAM83A--CK1相互作用促...

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作者：郭媛媛北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

本文主要从以下几方面进行论述：　　第一部分食管癌血液miRNA标准化内参miR-423-5p　　食管鳞状细胞癌(ESCC)是一种常见的消化道恶性肿瘤，发病隐匿，早期通常无明显特异性体征，约70％患者首次确诊时就属于局部晚期，进展快，预后差... 详细信息

本文主要从以下几方面进行论述：　　第一部分食管癌血液miRNA标准化内参miR-423-5p　　食管鳞状细胞癌(ESCC)是一种常见的消化道恶性肿瘤，发病隐匿，早期通常无明显特异性体征，约70％患者首次确诊时就属于局部晚期，进展快，预后差，缺乏早期预警的特异性标志物。目前，食管内窥镜检查是临床食管癌诊断金标准，但由于其成本较高、侵入性较强，难以作为早期食管癌筛查手段，因此，亟待研发新的无创或微创早筛诊断模型。　　循环miRNAs在血液、尿液、唾液及其他体液中均存在，具有可检测、可定量和稳定性高的特点，可用于患者的微创检测和动态监测，有望成为理想的肿瘤早期筛查生物标志物。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)是最常用的循环miRNA表达检测方法，然而由于缺乏理想的内参阻碍miRNA表达水平准确变化的评估和无创生物标志物的开发。　　在本研究中，我们旨在筛选特异且稳定性高的食管鳞状细胞癌血液miRNA标准化内参以克服这一障碍。首先，我们根据已发表的数据库筛选“管家” miRNAs,初步获得21个备选miRNAs;随后，我们在GSE106817和TCGA数据集中按照特定标准筛选并评估候选21个miRNAs的适用性;最后，我们确定miR-423-5p在血清中的丰度相对较高，在ESCC患者与健康对照者血清中，miR-423-5p的表达水平比较差异无统计学意义(n=188,P=0.29),NormFinder算法评估确定miR-423-5p是最稳定的。综上所述，研究表明miR-423-5p可以作为食管癌血液miRNA标准化的理想内参。　　第二部分 FAM83A-CK1相互作用促进食管癌的发生发展　　食管癌发病隐匿、临床症状不明显、进展快，缺乏早期预警特异性的标志物，大多数患者在确诊时就属于局部晚期，总体生存率低于15-25％。临床主要采取以手术治疗为主，联合新辅助化疗、放疗、同步放化疗与免疫治疗的模式。食管癌靶向治疗虽然取得了一些进展，如曲妥珠单抗(HER-2)、雷莫卢单抗(VEGFR)与帕博利珠单抗(PD1)已获FDA批准，但至于最佳治疗模式、疗效评价及安全性仍待进一步探究。因此，精准靶向治疗、治疗靶点选择、治疗模式及精准人群筛选是临床迫切需要解决的问题。　　早期肿瘤发生的特征是一组受限制的驱动基因突变及特定基因拷贝数增加。肿瘤驱动基因拷贝数变异是靶向治疗、疗效和预后评价的重要标志物，拷贝数变异可以用于评估罹患食管癌风险，为药物研发提供关键靶点。基于实验室前期508对食管鳞癌全基因组测序数据，我们聚焦局部拷贝数变异的数据，发现FAM83A(Family with sequence similarity 83 member A))存在显著拷贝数扩增，与临床分期、转移与预后相关;利用TCGA全基因组数据分析发现FAM83A在多种肿瘤中都存在突变、缺失与拷贝数变异，提示FAM83A可能参与食管癌的发生发展。　　利用CRISPR/Cas9系统成功构建了 FAM83A敲除小鼠(FAM83A-/-),发现敲除FAM83A可以显著抑制4-NQO诱导食管癌变，体内外实验发现FAM83A促进食管癌细胞增殖、转移和干性;利用蛋白质谱、Co-IP与分子对接确定FAM83A相互作用蛋白酪蛋白激酶1(Casein kinase 1,CK1),发现FAM83A参与调控 Wnt/β-catenin信号通路，影响CK1δ/ε的表达和核定位，促进β-catenin的入核，上调下游靶基因c-myc表达;为了探究靶向FAM83A治疗策略，我们通过高通量虚拟筛选及系列的功能验证，鉴定了靶向FAM83A二聚体有效的小分子化合物咖啡酸和虎杖苷。　　综上所述，我们从食管癌中拷贝数扩增基因FAM83A入手，探究其在食管癌发生发展中的作用及机制，发现FAM83A有望作为食管癌治疗潜在的靶点，进一步靶向FAM83A筛选药物，期望为临床食管癌治疗提供靶向药物开发策略。

关键词：食管鳞状细胞癌发病机制非编码小RNA-423-5p 标准化内参诊断标准 FAM83A基因酪蛋白激酶1

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CYP2E1介导心肌损伤的调控机制研究

CYP2E1介导心肌损伤的调控机制研究

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作者：马嘉昕北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

背景:　　心力衰竭(Heartfailure,HF)被定义为心脏不能满足身体各器官的代谢需求，是多种心血管疾病的终末阶段，如心肌肥厚(Hypertrophy)，心肌梗塞(myocardialinfarction,MI)及心肌病(Cardiomyopathy)等。作为全球的公共卫生和社会问... 详细信息

背景:　　心力衰竭(Heartfailure,HF)被定义为心脏不能满足身体各器官的代谢需求，是多种心血管疾病的终末阶段，如心肌肥厚(Hypertrophy)，心肌梗塞(myocardialinfarction,MI)及心肌病(Cardiomyopathy)等。作为全球的公共卫生和社会问题,对心力衰竭发病机制及创新性治疗策略的探索迫在眉睫。线粒体对维持心脏最佳性能起核心作用，心脏作为对能量需求极高的器官，需要大量的线粒体以支持ATP生产的高需求，包括线粒体动力学平衡异常等线粒体代谢障碍已被证实是诱发心衰等心血管疾病的重要机制。　　CYP2E1属于细胞色素P450(Cytochromes,Cyp450)家族成员，在哺乳动物的肝脏、心脏及脑等组织中表达。传统的CYP2E1研究主要针对微粒体以及肝损伤调控，而近年来越来越多的证据表明其也大量定位在线粒体上，同时在内外源毒物及多种病理状态下，该基因表达显著增强，提示着CYP2E1还有更为广泛的生物学作用有待研究。　　我们前期的研究结果显示，CYP2E1于心肌内高表达可增加心肌氧化应激和凋亡，而于心肌组织内表达敲低后可显著抑制心衰病理进程，然而CYP2E1介导心肌病及心肌损伤的具体机制仍不明确。　　目的:　　建立心肌组织特异性CYP2E1过表达及心肌组织特异性CYP2E1敲除大鼠模型，对比研究CYP2E1对大鼠心脏发育、功能维持、心肌病病理进程的影响及其介导心肌损伤的分子机制。　　方法:　　1)利用基因编辑技术建立心肌组织特异性Cyp2e1过表达大鼠。利用Cyp2e1条件性敲除大鼠与α-MHC-Cre工具大鼠杂交获得心肌组织特异性Cyp2e1敲除大鼠。利用PCR方法，对本课题心肌特异性Cyp2e1过表达大鼠和心肌特异性Cyp2e1敲除大鼠等工具动物的基因型进行鉴定。　　2)超声影像学检测技术分析大鼠在体心脏结构和功能变化。　　3)免疫荧光手段观察CYP2E1于心肌细胞中的定位及表达变化，病理组织学观察大鼠心脏整体形态、心肌组织的显微结构形态变化。　　4)透射电子显微镜观察大鼠心肌细胞超微结构及心肌线粒体形态变化。　　5)转录组及蛋白质组学分析筛选与Cyp2e1表达相关的分子组群、生物进程及信号通路。　　6)Westernblot检测CYP2E1及线粒体代谢相关分子表达水平。　　结果:　　1)Westernblot及免疫荧光结果显示，CYP2E1在多种心肌病理情况下表达上调，且上调的CYP2E1主要分布于线粒体内。同时，酶活性变化趋势同蛋白变化趋势一致。　　2)运用基因编辑技术构建Cyp2e1条件性基因敲除(Cyp2e1flox/+)大鼠模型，经与α-MHC-Cre转基因工具大鼠杂交繁育，获得心肌组织特异性Cyp2e1敲除纯合子大鼠(Cyp2e1flox/flox/α-MHC-Cre,文中缩略为Cyp2e1-KO),该敲除大鼠与构建的心肌组织特异性Cyp2e1过表达大鼠(文中缩略为Cyp2e1-OV),用于本课题的后续表型及机制分析。Cyp2e1-KO大鼠心肌组织中的CYP2E1蛋白的敲除效率为74.3％,而Cyp2e1-OV大鼠CYP2E1蛋白于心肌组织中表达增加约10倍。　　3)CYP2E1过表达加速而敲除后抑制ISO诱导的病理性心肌肥厚失代偿进程，包括心脏结构形态重塑以及心脏功能障碍。　　4)CYP2E1过表达恶化而敲除后改善ADR对大鼠心肌损伤程度，包括心脏在体功能异常以及心肌纤维破坏程度。　　5)转录组及蛋白质组学结果提示CYP2E1的表达与线粒体相关生物进程及心肌损伤显著相关，包括线粒体能量代谢、氧化应激、细胞凋亡等进程。　　6)信号机制分析表明，一方面CYP2E1通过影响Drp1和OPA1,促进线粒体分裂抑制融合，并激活线粒体自噬进程，从而破坏心肌线粒体的动力学平衡;另一方面，CYP2E1降低14-3-3表达，从而抑制14-3-3对损伤心肌的保护作用，激活线粒体依赖的凋亡途径。　　结论:　　本文发现在多种心脏疾病时CYP2E1于心肌线粒体内特异性表达增高,CYP2E1高表达可恶化而表达缺失可抑制病理性心肌肥厚及心肌损伤进程，分子验证显示CYP2E1通过破坏线粒体动力学平衡，激活线粒体依赖的凋亡途径，从而介导心肌损伤进程，该课题为进一步明确CYP2E1在心血管疾病中的生物学作用提供了实验室数据，并为心肌病及心力衰竭的临床防治，提供了可能得理论依据和靶点线索。

关键词：心肌损伤 CYP2E1介导细胞凋亡

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SARS--CoV--2及其变异毒株S蛋白的生物信息学分析和电离辐射对SARS--CoV--2细胞入侵的影响

SARS--CoV--2及其变异毒株S蛋白的生物信息学分析和电离辐射对SAR...

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作者：张宏达北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

目的:在SARS-CoV-2的感染过程中，S蛋白在病毒识别并结合宿主细胞受体进入细胞的过程中发挥重要的作用。在病毒传播过程中，SARS-CoV-2进化出多种变异毒株,变异毒株的S蛋白都存在不同程度的氨基酸突变。本研究通过对SARS-CoV-2变异毒株... 详细信息

目的:在SARS-CoV-2的感染过程中，S蛋白在病毒识别并结合宿主细胞受体进入细胞的过程中发挥重要的作用。在病毒传播过程中，SARS-CoV-2进化出多种变异毒株,变异毒株的S蛋白都存在不同程度的氨基酸突变。本研究通过对SARS-CoV-2变异毒株的S蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析来预测不同突变株对S蛋白修饰后修饰是否产生影响，以期预测氨基酸突变引起的翻译后修饰改变对病毒受体识别和细胞入侵的影响。另一方面，低剂量放射治疗被认为可以改善和治疗新冠肺炎患者的症状，但是电离辐射是否对SARS-CoV-2的致病机制发挥作用还缺乏证明。本论文探究了电离辐射能否造成细胞中参与病毒人侵细胞条件的改变从而改变病毒传染性。　　方法:通过将SARS-CoV-2标准株和变异株的氨基酸序列构建系统进化树，筛选具有代表性的变异株，并通过蛋白修饰位点预测网站预测SARS-CoV-2标准株和代表性变异株S蛋白的糖基化修饰和磷酸化修饰位点，分析变异毒株是否会通过蛋白修饰的改变来改变S蛋白与宿主细胞的相互作用;在实验研究中，我们以HIV-1病毒骨架和S蛋白构建SARS-CoV-2 S假病毒，通过检测荧光素酶活性来评价电离辐射对假病毒感染细胞的影响;Western Blot、PCR检测电离辐射对细胞中关键受体ACE2的基因和蛋白表达水平影响;PCR检测电离辐射对细胞中NRP1和CD147等可替代性受体的基因表达水平影响;免疫荧光检测电离辐射对细胞表面硫酸乙酰肝素表达的影响;FITC荧光预测细胞表面能够促进S蛋白与细胞受体结合的糖基化修饰;溶酶体酸性荧光探针检测电离辐射对细胞内溶酶体酸性环境的影响;Western Blot检测电离辐射对细胞内组织蛋白酶D表达的影响。　　结果:预测结果S蛋白上主要有17个潜在的N-糖基化位点，受变异株序列改变影响的修饰位点是第17和654位点。S蛋白上潜在的O-糖基化位点有15个，变异株中发生了第12、71、255和686位点的修饰改变。潜在的43个磷酸化修饰位点中受氨基酸突变影响的位点主要位于S1亚基上,只有一个位点位于S2亚基;在0.1 Gy、0.5Gy、1Gy和2Gy的不同剂量照射后，SARS-CoV-2 S假病毒感染细胞的荧光素酶活性是提高的;照射后，293T-ACE2和CHO-ACE2细胞的ACE2蛋白和基因表达水平提高;在 293T-ACE2 和 Vero 细胞中的 TMPRSS2、NRP1、CD4、CD147、ASGR1受照射影响后基因表达水平提高，Vero细胞中的KREMEN1受照射影响后基因表达提高;293T-ACE2表面的硫酸乙酰肝素在照射后表达增加;FITC荧光观察PNA-FITC、LCA-FITC和ECL-FITC三种凝集素在不同剂量的照射后与293T-ACE2细胞的结合增加;照射后，溶酶体酸性荧光探针显示293T-ACE2和CHO-ACE2细胞的黄色荧光占比增加;照射后，293T-ACE2和CHO-ACE2细胞内组织蛋白酶D表达增加。　　结论:通过生物信息学的方法预测了 SARS-CoV-2不同变异毒株上S蛋白的氨基酸位点突变改变了 S蛋白的糖基化修饰和磷酸化修饰，提出S蛋白修饰对于SARS-CoV-2病毒与宿主细胞的结合可能存在作用。电离辐射会使细胞表面关键受体、可替代功能受体和辅助受体的增加，也会使细胞表面的糖蛋白HS表达增加促进S蛋白与ACE2受体结合。凝集素与电离辐射后的细胞结合增加预测了细胞表面三种潜在可以与SARS-CoV-2 S蛋白亲和的糖基化修饰。通过细胞溶酶体酸性程度和组织蛋白酶D表达结果表明电离辐射会使细胞组织蛋白酶D表达增加，从而可能会促进SARS-CoV-2通过内吞作用进入细胞，所以SARS-CoV-2与细胞受体结合进入细胞和内吞作用释放到细胞内两种入侵细胞的方式都会受电离辐射的影响。

关键词：新冠肺炎电离辐射新型冠状病毒细胞入侵 S蛋白生物信息学

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基于Meta分析与整合生物信息学探究黄葵胶囊治疗慢性肾脏病的有效性、安全性及其机制

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中国中药杂志 2023年第16期48卷 4493-4507页

作者：王福平张蕾吕健刘毅谢雁鸣中国中医科学院中医临床基础医学研究所北京100700 中国中医科学院西苑医院北京100091

基于Meta分析及整合生物信息学对黄葵胶囊治疗慢性肾脏病的有效性、安全性及机制进行系统评价与综合分析。检索中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、Cochrane Library、PubMed、EMbase、Web ... 详细信息

基于Meta分析及整合生物信息学对黄葵胶囊治疗慢性肾脏病的有效性、安全性及机制进行系统评价与综合分析。检索中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、Cochrane Library、PubMed、EMbase、Web of Science数据库,筛选黄葵胶囊治疗慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的随机对照试验(randomized controlled trial,RCT),检索时间为建库至2023年1月3日。确定结局指标包括尿蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平,应用Cochrane Handbook 5.1评价标准和RevMan 5.3软件对纳入文献进行Meta分析。从CNKI搜集黄葵胶囊的活性成分,从GeneCards、OMIM和TTD中收集CKD的疾病靶点,采用Cytoscape 3.8.0构建“药物成分-疾病-靶点”网络和蛋白互作(PPI)网络进行核心成分和靶点筛选。利用GEO数据库中临床样品对黄葵胶囊治疗CKD的核心靶点进行差异分析,找出差异表达的核心靶点,并对核心靶点进行相关性分析与免疫细胞浸润分析。Meta分析共纳入13篇RCTs,总样本量2372例,试验组1185例,对照组1187例。结果显示,在降低尿蛋白方面,黄葵胶囊组与氯沙坦钾组治疗12(MD=19.60,95%CI[-58.66,97.86],P=0.62)、24周(MD=-66.00,95%CI[-264.10,132.11],P=0.51)比较差异均无统计学意义,黄葵胶囊+常规治疗优于单用常规治疗(MD=-0.55,95%CI[-0.86,-0.23],P=0.0006);在改善Scr方面,黄葵胶囊+常规治疗优于单用常规治疗(MD=-9.21,95%CI[-15.85,-2.58],P=0.006);在改善BUN方面,黄葵胶囊+常规治疗优于单用常规治疗(MD=-1.02,95%CI[-1.83,-0.21],P=0.01)。RCT中明确为不良反应者5例,症状为腹部或胃肠道不适。黄葵胶囊检索到有效成分43种,靶点393个,其中核心成分为杨梅素、槲皮素、棉皮素、反油酸、二氢杨梅素、异绿原酸B、咖啡酸等7种;CKD与黄葵胶囊交集靶点247个,其中核心靶点25个;通过GEO差异分析获得差异表达核心靶点18个,其与免疫细胞表达多呈正相关,涉及机制主要有免疫炎症、氧化应激、细胞焦亡、脂质代谢、性激素代谢及细胞修复等过程。结果表明,黄葵胶囊+常规治疗可明显降低尿蛋白、Scr、BUN,黄葵胶囊单用与氯沙坦钾在降低尿蛋白方面差异无统计学意义。这种功效可能与黄葵胶囊多成分、多靶点、多途径的免疫炎症与氧化应激等机制有关。由于纳入文献样本量偏小,且研究质量一般,需更多大样本、设计严谨、符合国际规范的临床试验提高证据质量级别,生物信息学结果也需要进一步的研究证实。

关键词：黄葵胶囊慢性肾脏病随机对照试验系统评价 Meta分析整合生物信息学

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胸腔镜解剖性肺段切除术在双侧肺癌手术中应用的单中心回顾性研究

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中国胸心血管外科临床杂志 2023年第1期30卷 39-46页

作者：高雪涵郭超杨丽冰张家齐刘磊周梦馨赵珂刘洪生李单青中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院胸外科北京100730

目的探讨电视辅助胸腔镜(video-assisted thoracoscopic surgery,VATS)解剖性肺段切除术在同期和分期双侧肺癌手术患者中应用的安全性及有效性。方法回顾性分析北京协和医院胸外科2013年12月—2022年5月收治的100例应用VATS解剖性肺段... 详细信息

目的探讨电视辅助胸腔镜(video-assisted thoracoscopic surgery,VATS)解剖性肺段切除术在同期和分期双侧肺癌手术患者中应用的安全性及有效性。方法回顾性分析北京协和医院胸外科2013年12月—2022年5月收治的100例应用VATS解剖性肺段切除术进行双侧手术患者的临床资料。根据手术时机将患者分为两组:同期双侧手术组52例,其中男17例、女35例,年龄(55.17±11.09)岁;分期双侧手术组48例,其中男16例、女32例,年龄(59.88±11.48)岁。对两组患者的术中情况及术后疗效进行评价。结果100例患者均顺利完成双侧VATS手术,至少一侧行解剖性肺段切除术。同期双侧手术组患者具有年龄小(P=0.040)、合并疾病比例小(P=0.030)、肺癌家族史罕见(P=0.018)及发现至手术间期更短(P=0.000)的特点。同期双侧手术组以肺段联合楔形切除术为主,分期双侧手术组以联合肺叶切除术为主(P=0.000);同期双侧手术苏醒时间较分期一期和二期手术更长(P=0.000,P=0.002),但手术时间、麻醉时间与分期双侧手术组两次叠加时间差异无统计学意义;淋巴结采样/清扫站数(P=0.041)及个数(P=0.026)较分期双侧手术组两次叠加数量更少;两组术中气道压管理差异无统计学意义(P>0.05)。同期双侧手术组出院后日常生活能力评分更低。结论VATS解剖性肺段切除术在同期及分期双侧肺癌手术中的应用安全可行,对侧可联合亚肺叶或肺叶切除术。同期双侧手术组在手术时间和术后并发症与分期双侧手术组大致相同,但出院后日常生活能力评分更低。在综合考虑患者心理因素、身体情况及个人意愿的基础上可优先选择同期双侧手术。

关键词：电视辅助胸腔镜手术解剖性肺段切除肺癌同期双侧手术分期双侧手术

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一个导致家族性远端肌病的新突变发现及致病性研究

一个导致家族性远端肌病的新突变发现及致病性研究

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作者：范百通北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

目的:对一个病因不明的远端肌病家系进行全外显子测序并筛选疑似致病突变，以查明潜在的遗传学病因。通过生物信息学分析，细胞生物学及分子生物学实验研究疑似致病突变的功能。根据美国医学遗传学与基因组学学会提出的遗传变异分类标... 详细信息

目的:对一个病因不明的远端肌病家系进行全外显子测序并筛选疑似致病突变，以查明潜在的遗传学病因。通过生物信息学分析，细胞生物学及分子生物学实验研究疑似致病突变的功能。根据美国医学遗传学与基因组学学会提出的遗传变异分类标准与指南中的证据评级规则，判断疑似致病突变的临床意义，以便医生为患者提供可能有效的治疗方法。扩充导致远端肌病的基因突变谱，为该类疾病的遗传咨询提供新的数据支撑。　　方法:(1)为了提供更多用于诊断的表型信息，收集先证者的股四头肌组织进行病理学检查。(2)为了揭示患者的遗传学病因，绘制先证者家系图并进行全外显子测序，结合突变频率、突变功能、疾病遗传模式筛选可疑突变，通过查阅文献判断突变的基因是否与肌病相关，缩小可疑突变的范围，最后结合患者表型及肌肉组织病理学检查结果评估基因突变与表型的相关性。(3)为了预测突变的有害性，通过生物信息学方法预测突变对蛋白质功能的影响、预测位点保守性、突变对蛋白结构的影响。(4)使用一代测序验证样本突变的真实性。(5)为了研究突变的功能，通过分子克隆方法构建目的基因cDNA过表达载体，分别携带本研究发现的突变、已报道的致病突变、野生型cDNA,用携带cDNA的过表达载体和空载体转染HEK293T细胞研究突变对蛋白质功能的影响。(6)为了研究突变通过哪种方式影响蛋白质的功能，使用EB病毒转化患者家系及健康无关个体的淋巴细胞，通过Western blot、三代全长转录组测序及RT-qPCR研究突变对蛋白质表达量、转录本类型和mRNA表达量的影响。　　结果:(1)肌肉活检显示先证者股四头肌肌纤维大小不等、部分肌纤维萎缩、萎缩肌纤维呈小群分布、少许肌纤维核内移、可见镶边空泡。(2)家系分析显示先证者父母为从兄妹婚配(向前追溯三代存在共同祖先)，先证者及其兄长为患者、父母表型正常，疾病可能呈隐性遗传模式;全外显子测序筛选可疑突变后查阅文献并使用Phenolyzer计算表型与候选基因的相关性后得到种子基因GNE,GNE存在由同义突变和错义突变共同构成的新突变:NM_005476.7:c.1988_1989delinsTA(p.S663L)。(3)一代测序显示该突变是真实的，先证者及兄长为纯合子，父母为杂合子。(4)保守性分析显示突变位点十分保守，经过FATHMM、I-Mutant、MutationTaster、VarSite、PolyPhen2软件预测显示该突变可能是致病的，可能影响GNE蛋白局部结构。(5)构建携带该突变的GNE cDNA过表达载体转染HEK293T细胞并进行酶活性检测，三次实验结果均显示p.S663L大幅降低GNE双功能酶的活性:与野生型相比，p.S663L令UDP-GlcNAc-2-差向异构酶活性下降67.5％±3.4％,令ManNAc激酶活性下降48.1％±7.7％(p＜0.001)。(6)用先证者及其父母与健康个体来源的淋巴细胞进行5次质免疫印迹显示p.S663L不改变GNE蛋白的表达量，三代转录组测序显示变异不导致GNE产生新的转录本，3次RT-qPCR显示变异不改变GNE mRNA表达量。但是使用变异所在结构域的抗体GNE Mouse McAb(67649-1-Ig)进行Western blot发现变异可能改变GNE蛋白激酶结构域的免疫原性，三次实验结果显示p.S663L的GNE蛋白灰度下降42.2±4.2％(p＜0.05)。　　结论:(1)先证者及其兄长罹患GNE肌病，病因为GNE纯合突变p.S663L。(2)p.S663L导致UDP-GlcNAc-2-差向异构酶活性下降67.5％±3.4％,ManNAc激酶活性下降48.1％±7.7％。(3)根据ACMG指南中的证据评级规则，p.S663L是可能致病的变异(PS3+PM2+PP1+PP3),其纯合突变可能导致GNE肌病。

关键词：远端肌病基因突变谱致病性 UDP-GlcNAc-2-差向异构酶 ManNAc激酶

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神经元特异性Isca1敲除多发性线粒体功能障碍综合征大鼠模型的建立和机制研究

神经元特异性Isca1敲除多发性线粒体功能障碍综合征大鼠模型的建...

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作者：盛瀚萱北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

学位级别：硕士

线粒体是真核生物中至关重要的细胞器，当线粒体DNA或者由核DNA编码的线粒体相关蛋白发生突变，就会导致一系列严重的临床疾病。多发性线粒体功能障碍综合征(multiple mitochondrial dysfunction Syndrome,MMDS)是一种在临床上死亡率极... 详细信息

线粒体是真核生物中至关重要的细胞器，当线粒体DNA或者由核DNA编码的线粒体相关蛋白发生突变，就会导致一系列严重的临床疾病。多发性线粒体功能障碍综合征(multiple mitochondrial dysfunction Syndrome,MMDS)是一种在临床上死亡率极高的遗传性线粒体疾病，与线粒体铁硫簇合成缺陷相关，可造成线粒体结构、代谢、功能的损伤。临床症状为神经系统损伤、肌肉张力下降、能量代谢下降、高乳酸血症等。MMDS发病机制复杂且并未被阐明，目前没有有效的治疗方案。Isca1基因编码蛋白参与线粒体铁硫簇生物合成中[4Fe-4S]的合成，该基因的纯合突变是MMDS5的致病突变。但目前的研究主要集中在临床诊断和病例报告中，缺少致病机制、分子生物学及微观结构与功能等基础医学的深入研究，更缺少用于临床治疗研究必需的动物模型。　　目的:　　建立Isca1基因神经元特异敲除的大鼠模型，对其进行行为表型分析、病理分析和分子生物学研究，建立可用于MMDS临床病理机制和临床治疗方案的动物模型，同时该动物模型可用于线粒体功能障碍导致的神经元的代谢、形态和分子机制研究，以及应用于靶向线粒体的药物评价和筛选。　　主要方法:　　(1)通过CRISPR/Cas9基因编辑技术建立Isca1flox/flox与NeuN-Cre两种大鼠并进行杂交，繁育得到能在神经元中特异性敲除Isca1基因的Isca1flox/flox-NeuN-Cre(CKO)大鼠。　　(2)通过核磁共振成像观察CKO大鼠的大小脑结构变化。　　(3)通过Racine''s scale评价敲除大鼠的癫痫表型。通过步态分析、旷场实验、Y迷宫实验和食物迷宫实验分析其行为异常和认知记忆障碍。　　(4)通过H&E染色、尼氏染色、高尔基染色分析神经元结构和病理变化。　　(5)通过透射电镜(TEM)、蛋白质免疫印迹和ATP含量检测判断线粒体结构和分子损伤情况。　　(6)通过小麦胚芽凝集素的免疫荧光法标记神经元胞膜形态，检测神经元死亡情况。　　结果:　　(1)通过杂交培育了Isca1神经特异敲除的大鼠，Western Blot验证敲除效率达到72.05％。　　(2)Isca1缺失后导致大鼠发育迟缓，6周龄时体重只有野生型(WT)大鼠的55.2％。　　(3)Isca1缺失后导致大鼠在4周龄时出现癫痫、痉挛，并随年龄恶化。　　(4)Isca1缺失后的大鼠出现运动障碍和记忆受损。在步态实验中出现步宽/步长的明显增加，旷场实验中运动距离、运动速度、进入中心区的时间和次数明显减少，Y迷宫的自发交替率从82.64％降低到55.54％,食物迷宫中进入目标区域的潜伏期从为32.7s增加到54.5s。　　(5)MRI显示Isca1敲除后大鼠的脑结构异常，大脑体积减少了6.7％,小脑体积减少了37.8％,侧脑室体积增加了176.9％。　　(6)病理分析证实，该模型大鼠在8周龄时出现了神经元细胞肿胀，大、小脑切片中空泡数量明显增加，核固缩、胞体肿胀;Nissl体减少，大量神经元丢失;神经元树突棘数量减少;线粒体超微结构异常，空泡化、膜断裂、嵴断裂等病变。　　(7)在线粒体中，检测到呼吸链复合物蛋白NDUFA9、NDUFS3、SDHB含量的降低和ATP生成的减少。　　结论:　　(1)本研究建立了MMDS5神经系统症状的大鼠模型，可以较好的模拟临床病例中的痉挛、癫痫、发育迟缓、神经功能恶化、脑室扩张等症状。　　(2)Isca1神经元特异性敲除导致大鼠神经元出现核固缩、胞体肿胀、Nissl小体减少、树突棘密度降低等病理改变。　　(3)Isca1神经元特异性敲除导致神经元线粒体肿胀、嵴断裂，多种呼吸链复合物蛋白含量降低，ATP生成减少。　　(3)与MMDS5患者相比，大鼠模型可存活至8周龄，有效延长了大鼠模拟临床线粒体疾病神经系统症状治疗研究的窗口期，该大鼠模型可用于研究MMDS的发病机制和药物筛选。

关键词：多发性线粒体功能障碍综合征 Isca1基因神经元行为表型分子生物学

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糖蛋白合成优化及分子动力学模拟研究

糖蛋白合成优化及分子动力学模拟研究

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作者：陈保权北京协和医学院(清华大学医学部)&中国医学科学院

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糖基化( Glycosylation)是一种广泛存在于生物体内的翻译后修饰，它可以影响蛋白质的稳定性、功能和定位。相比于重组表达产生蛋白的方法，化学合成是研究糖蛋白的重要手段之一，因为化学合成具有操作性高、产物结构确定、组成均一等优... 详细信息

糖基化( Glycosylation)是一种广泛存在于生物体内的翻译后修饰，它可以影响蛋白质的稳定性、功能和定位。相比于重组表达产生蛋白的方法，化学合成是研究糖蛋白的重要手段之一，因为化学合成具有操作性高、产物结构确定、组成均一等优势。然而，由于化学合成技术尚未发展到完备的程度，目前研究还受到很大的限制。　　本论文通过对模式分子碳水化合物结合模块( Carbohydrate binding module,CBM) 的研究，对化学合成进行了系统的优化。碳水化合物结合模块是纤维素酶的重要组成部分，选择其作为模式分子，既易于快速大量合成，又能代表一般蛋白的性质。基于该模式分子构建起数量可观的糖蛋白分子库，可以对糖蛋白组成-性质、结构-功能的研究产生重要的影响。　　在本论文中，我们对CBM的合成各个方面进行了系统的优化，包括树脂的选择、反应温度、特殊氨基酸的处理、困难肽的合成、裂解溶液的组分和比例等。在优化后，我们首先获得了未糖基化的CBM000的优化合成条件，优化后的合成条件使用CEM Liberty Blue多肽合成仪在11 h左右实现了目标产物峰占比64.44％的纯度。接着，在此基础上，我们实现了对糖基化的CBM的合成条件优化，并获得了糖上保护基的脱除的优化条件，解决了保护基脱除过程中出现的β-消除副反应。我们总结出了不同大小的糖脱除保护基的规律，为构建CBM糖基化异形体的分子库奠定了良好的基础。　　除了化学合成和生物学研究相结合的方法，分子动力学模拟方法也可以为糖蛋白组成、性质和结构与功能的研究做出重要贡献。在本论文中，我们优化了分子动力学模拟方法，利用它研究了不同CBM糖基化异形体与底物纤维六糖、纤维素的结合情况，并证明了在底物结合的过程中，糖基化可以通过形成氢键与蛋白质本身的疏水相互作用相互竞争或协调，从而对底物结合产生影响。

关键词：糖蛋白化学合成反应条件优化分子动力学

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