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α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY所致血管内皮调节机制的比较研究

α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY所致血管内皮调节机制的比较...

国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：洪倪段金虹张彦东吴云清蒋东桥戴顺龄王雯中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院首都医科大学病理生理教研室

复制去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)模型,比较植物雌激素α-玉米赤霉孵(α-ZAL)、大豆异黄酮主要成分染料木素(GST)和17β雌二醇(17βE2)对血管内皮的保护作用。雌性大鼠行OVX后分组:①正常对照;②假手术+2.5%蛋氨酸;③OVX+蛋氨... 详细信息

复制去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)模型,比较植物雌激素α-玉米赤霉孵(α-ZAL)、大豆异黄酮主要成分染料木素(GST)和17β雌二醇(17βE2)对血管内皮的保护作用。雌性大鼠行OVX后分组:①正常对照;②假手术+2.5%蛋氨酸;③OVX+蛋氨酸;④OVX+蛋氨酸+GST;⑤OVX+蛋氨酸+α-ZAL。GST和α-ZAL分别隔日肌注250μg/0.25 mL/12周。测定HCY和ET-1浓度,RT-PCR法检测血管内皮ET-1 mRNA表达;主动脉作病理制片。结果显示:血浆HCY含量(μmol/L)按组序①3.19±0.19*;②20.624±1.771*;③49.9±5.01;④14.41±0.15*,21.83±1.80*⑤20.06±3.33*,*与③比较,P<0.01。ET-1 (pg/mL)含量按组序①100.46±13.12*;②93.23±11.05*;③244.22±23.30;④80.92±12.46*;⑤94.56±11.93*,*与③组比较P<0.01,血管内皮ET-1 mRNA的表达与③组比较P<0.01。病理:OVX+蛋氨酸组血管内皮明显损伤,部分内膜增厚,有泡沫样细胞浸润,聚集呈小团状,肌层正常,假手术组、β-ZAL、GST和17βE2组血管内膜大致正常,未见明显的炎性细胞浸润。结论:α-ZAL、GST和17βE2均能降低HCY含量,α-ZAL低于GST。α-ZAL、GST和17βE2减少ET-1分泌和ET-1 mRNA表达调节血管内皮助能。主动脉血管病理显示α-ZAL、GST和17βE2在内皮保护作用相似。

关键词： α-ZAL 17βE2 GST HHCY ET-1mRNA

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α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY模型子宫内膜和乳腺上皮作用的病理学比较

α-ZAL、GST和17βE2对去势大鼠HHCY模型子宫内膜和乳腺上皮作用...

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国际心脏研究会（ISHR）中国分会第十届暨中国病理生理学会心血管专业委员会第十三届学术会议

作者：张彦东段金虹洪霓吴云清蒋东桥王雯戴川页龄中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院首都医科大学病理生理教研室

植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)、大豆异黄酮中主要成分染料木素(GST)和17βE2对血管内皮的保护作用相类似,本文从病理学角度比较三种激素对去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)子宫内膜和乳腺上皮的增殖作用。用雌性大鼠行去势术... 详细信息

植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)、大豆异黄酮中主要成分染料木素(GST)和17βE2对血管内皮的保护作用相类似,本文从病理学角度比较三种激素对去势(OVX)大鼠高同型半胱氨酸血症(HHCY)子宫内膜和乳腺上皮的增殖作用。用雌性大鼠行去势术后分组,①正常对照组;②假手术组+2.5%蛋氨酸;③OVX +蛋氨酸;④OVX+蛋氨酸+GST;⑤OVX+蛋氨酸+α-ZAL,且GST和α-ZAL分别隔日肌注250μg/ 0.25 mL/12周。测定血浆同型半胱氨酸(HCY)浓度;子宫和乳腺作病理制片。结果显示:血浆HCY含量(μmol/L)按组序①3.25±0.14*;②20.62±1.78*;③51.58±4.58;④14.38±0.14*;⑤22.59±1.60*,*与③比较P<0.01。子宫指数按组序①0.18±0.07;②0.19±0.05;③0.03±0.01*;④0.04±0.01*;⑤0.07±0.02*,*与③比较P<0.01。病理:OVX+蛋氨酸组乳腺萎缩,腺体明显减少,纤维增生:子宫内膜萎缩,腺体减少,平滑肌萎缩;17βE2组乳腺上皮明显增生,腺体增多;子宫内皮明显增生、增厚,腺体明显增多部分鳞化,肌层明显增厚;α-ZAL和GST两组乳腺上皮与子宫内膜略增生,腺体增生不明显,肌层大致正常,其余各组基本正常。结论:α-ZAL、GST和17βE2均能降低HHCY大鼠血浆的HCY含量,α-ZAL略优于GST。17βE2组子宫指数明显升高,α-ZAL和GST组略高于正常组。α-ZAL和GST在促进子宫内膜和乳腺增生方面明显低于17βE2,与GST相比α-ZAL略优于GST。

关键词： α-ZAL 17βE2 GST HHCY 子宫内膜乳腺

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人干燥综合征B抗原重组体的构建及融合表达

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医学分子生物学杂志 2008年第2期5卷 133-136页

作者：李倩高扬倪安平于孟学朱立平刘音李永哲林嘉友甘晓丹中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科北京市100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学研究室北京市100005

目的克隆人干燥综合征B抗原基因(human sjogren’s syndrome antigen B,SSB)并进行原核表达,为使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础。方法根据GenBank中检索到的人SSB cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取... 详细信息

目的克隆人干燥综合征B抗原基因(human sjogren’s syndrome antigen B,SSB)并进行原核表达,为使用重组抗原用于自身抗体的临床检测奠定基础。方法根据GenBank中检索到的人SSB cDNA序列,在5′非编码区和3′非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,逆转录RT-PCR扩增人干燥综合征B抗原cDNA。PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导入大肠埃希菌DH5α,构建重组质粒PET-30a-SSB。对重组质粒进行酶切鉴定,选择阳性克隆测序。重组质粒导入大肠埃希菌BL21,阳性克隆经鉴定后在IPTG诱导下表达。结果RT-PCR扩增产物为1245bp。重组质粒PET-30a-SSB经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切证实含目的基因片段。序列分析提示与GenBank中检索到的一致。SDS-PAGE和Western印迹结果显示融合蛋白相对分子量为73ku,具有天然SSB抗原活性。结论成功克隆SSB基因并表达融合蛋白。

关键词：人干燥综合征B抗原 cDNA克隆重组体融合表达

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NeuroD在神经细胞分化中的调控作用

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医学分子生物学杂志 2008年第3期5卷 278-282页

作者：方洪波张业沈珝琲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京市100005

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游... 详细信息

神经分化因子(NeuroD)是一种含bHLH结构域的结合E-box的转录调控因子,主要参与神经细胞分化过程和胰腺发生、功能维持。近年来的研究表明,NeuroD的表达受细胞因子调控或某些化学因子影响,同时与多种蛋白,如Brg1,AK1和Htt等共同调节下游基因表达,进而调控细胞周期和神经细胞分化进程。这些研究为NeuroD参与细胞分化进程,糖尿病和其他神经性疾病的发生提供了依据。

关键词： NeuroD 胰腺全反式维甲酸

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人干燥综合征A抗原基因克隆表达及其重组蛋白临床应用研究

人干燥综合征A抗原基因克隆表达及其重组蛋白临床应用研究

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：李倩高扬李永哲倪安平于孟学刘音朱立平林嘉友甘晓丹中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60KD),旨在获得特异性重组抗原,探索使用重组抗原建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等检测方法,用于自身抗体的临床。方法利用基因工程技术,首先从Hela细胞提取总RNA.应用逆转录RT- PCR方法扩增cDNA,再... 详细信息

目的克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60KD),旨在获得特异性重组抗原,探索使用重组抗原建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等检测方法,用于自身抗体的临床。方法利用基因工程技术,首先从Hela细胞提取总RNA.应用逆转录RT- PCR方法扩增cDNA,再以此为模板扩增目的基因.将PCR产物与表达载体PET-30a双酶切后进行连接反应,构建重组表达载体,转化大肠杆菌*** BL21,碱裂解法进行质粒小量制备,通过双酶切鉴定和PCR扩增鉴定,并经测序证实为SSA60KD目的基因。表达载体构建成功后。在大肠杆菌宿主菌*** DH5α中表达,产生了大量重组融合蛋白。利用金属螯合亲和层析法,对其进行纯化。得到了高纯度的具有Ro抗原活性的重组蛋白.达到ELISA检测要求。建立ELISA检测方法。对592例风湿病患者血清进行了检测分析。结果抗Ro60KD抗体对pSS诊断的敏感性为49.19%.特异性为60.46%;对SLE诊断的敏感性为57.69%,特异性为64.06%;该抗体在pSS、SLE、RA、SSc、MCTD中的阳性率分别为49.19%、57.69%、8.33%、15.00%、16.67%.抗体阳性率在pSS与SLE两组间无差异(P=0.200);在RA、SSc、MCTD三组间无差异(P=0.888);但在(pSS+SLE)组与(RA+SSc+MCTD)组间有显著性差异(P<0.001)。为SS、SLE等疾病的临床诊断、鉴别诊断、病程监控及改善预后提供有效工具:为探讨其与特定风湿性疾病的关系提供新的手段。结论本研究成功地构建了SSA 60KD重组表达载体,表达并纯化了60KD重组蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原,建立了ELISA方法.检测了风湿病患者血清中抗60KD抗体.为进一步探讨自身抗体与疾病的相关性、了解抗原抗体相互作用及其在发病机制中的作用:为使用重组抗原用于临床检测;为进行抗原表位的定位研究、小肽的筛选及蛋白功能的研究奠定了基础。随着分子生物学和免疫学技术的进步,以重组蛋白或合成多肽为抗原用于自身抗体检测,具有广阔的临床应用前景。目前国内尚无使用重组抗原ELISA法检测SSA60KD抗体试剂盒问世。本研究正进一步扩大样本量进行临床检测。除SSA60KD外。用同样方法还完成了SSA52KD、SSB、rRNP基因的克隆表达。为建立ELISA、免疫印迹、蛋白芯片等满足不同临床需求多种检测方法继续探索。

关键词：干燥综合征 ELISA 重组抗原 SLE 重组蛋白临床应用研究基因克隆表达

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人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定

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免疫学杂志 2008年第6期24卷 684-687页

作者：刘惠荣吴刚周冰申乐薛红陈保生内蒙古农业大学生物工程学院生物科学教研室呼和浩特010018 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京市药品不良反应监测中心北京100024

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合。结论成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具。

关键词：磷脂转移蛋白原核表达抗体

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ω-3多不饱和脂肪酸单用及联合表阿霉素对胃癌作用动物实验研究

ω-3多不饱和脂肪酸单用及联合表阿霉素对胃癌作用动物实验研究

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中华医学会第十一届全国营养支持学术会议

作者：郭卫东于健春康维明刘玉琴青岛大学医学院附属医院肝胆外科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞培养中心

研究背景和目的:在目前以手术为主要手段的胃癌综合治疗中,化疗仍然是必不可少的手段之一,但是化疗对机体的毒副作用,比如骨髓抑制、免疫抑制、胃肠道反应等也是显而易见的。许多病人因为耐受不了而放弃治疗,更有一些身体状况不佳的病... 详细信息

研究背景和目的:在目前以手术为主要手段的胃癌综合治疗中,化疗仍然是必不可少的手段之一,但是化疗对机体的毒副作用,比如骨髓抑制、免疫抑制、胃肠道反应等也是显而易见的。许多病人因为耐受不了而放弃治疗,更有一些身体状况不佳的病人因化疗而加速死亡的报道。因此,减少化疗药的毒副作用显得尤为必要。

关键词： ?-3多不饱和脂肪酸表阿霉素药物疗法联合体内研究

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一种简单而有效的检测胃癌微小RNA表达水平的方法

一种简单而有效的检测胃癌微小RNA表达水平的方法

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张岱吕丹王振宁罗阳徐岩张勇刘彦山孙淼张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系中国医科大学医学基因组学研究室

目的胃癌在全世界范围内是处于发病率第二位的恶性肿瘤;在中国,胃癌发病率仍高居各种恶性肿瘤之首,每年新确诊患者达400,000人,且呈上升趋势;每年因胃癌死亡人数为260,000,占所有恶性肿瘤死亡的23.24%。近年来,表观遗传学与肿瘤发生的... 详细信息

目的胃癌在全世界范围内是处于发病率第二位的恶性肿瘤;在中国,胃癌发病率仍高居各种恶性肿瘤之首,每年新确诊患者达400,000人,且呈上升趋势;每年因胃癌死亡人数为260,000,占所有恶性肿瘤死亡的23.24%。近年来,表观遗传学与肿瘤发生的相关性研究已成为肿瘤遗传学的重要内容。其中,微小RNA(miRNA)所介导的基因转录后调节被证明与肿瘤的发生密切相关。本研究旨在通过建立一种简单而有效的实验技术来检测胃癌中miRNA的表达情况,从而为胃癌的早期诊断和分子病理学提供miRNA水平的分析工具和实验依据。

关键词：胃癌组织 RNA

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应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的改变

应用多重连接依赖探针扩增(MLPA)技术研究胃癌基因组DNA拷贝数的...

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：张岱吕丹王振宁罗阳徐岩张勇刘彦山孙森张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系中国医科大学医学基因组学研究室

目的多重连接依赖探针扩增(Multiplex Lization- Dependent Probe Amplification.简称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术.可以在单一反应中检测45个核苷酸序列;和其他技术(如Array-CGH和FISH)相比.MLPA反应具有快速.经济.... 详细信息

目的多重连接依赖探针扩增(Multiplex Lization- Dependent Probe Amplification.简称MLPA)是一种高通量检测基因拷贝数量改变的新技术.可以在单一反应中检测45个核苷酸序列;和其他技术(如Array-CGH和FISH)相比.MLPA反应具有快速.经济.易于操作等优点.使其在临床检验中具有良好的应用前景。本研究旨在通过MLPA技术对中国胃癌病人样本进行全基因组范围的DNA拷贝数改变的分析.以进一步探明胃癌的分子遗传学机理和发现与病人临床表现高度相关的基因标记物.为胃癌的早期诊断和分子分型提供实用的临床检验技术基础。方法:将经显微切割获得的50例胃癌患者肿瘤样本(肿瘤细胞>90%)和4例正常胃组织通过TaKaRa基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。通过MLPA的预制探针和样本基因组DNA进行杂交.经过对相邻位点片断的连接后进行多重PCR反应.对扩增产物进行毛细管电泳.使用GeneMarker软件对经ABI 3730毛细管电泳仪所获得的荧光电泳图谱进行定量分析.获得样本的基因组DNA拷贝数相对值,并利用HCluster软件对结果进行聚类分析。使用SPSS软件对基因位点的拷贝数与胃癌组织的临床病理参数进行统计学分析。结果:HCluster聚类分析显示:50例胃癌组织和4例正常胃组织被成功的分成两大类.其中50例胃组织根据其基因组DNA拷贝数的改变幅度而分成高、中、低、极低四组。对GeneMarker所计算的DNA拷贝数相对值进行定义:小于0.75为拷贝数缺失.大于1.3为拷贝数扩增.介于0.75和1.3之间为拷贝数正常。根据以上定义.在全部检测的112个基因位点中.拷贝数扩增的频率大于30%的基因位点有28个.占全部位点的25%.拷贝数缺失的频率大于30%的基因位点有26个,占全部位点的23.2%。拷贝数扩增频率最高的基因位点的前3位分别为:PTK2(8q24.3),72%;MYC(8q24.21),70%;EHF(11p13),66%。拷贝数缺失频率最高的基因位点的前3位分别为:CDKN2A(9p21.3),90%;MIF(22q11.23),86%;THBD (20p11.21).78%。在淋巴结转移阴性和阳性的两组病例之间.Mann- Whitney U test结果表明VEGF(p=0.044)和MYC(p=0.018)的拷贝数相对值具有显著性差别。结论:本研究结果证明通过MLPA技术对胃癌标本进行基因拷贝数的检测切实可行.同时具有高通量、低成本、操作简单等优点,因此可以在临床检验中推广使用;同时我们的实验结果为胃癌的基因诊断分型提供了有力的科学依据。

关键词：胃癌组织基因位点多重连接依赖探针扩增拷贝数 DNA 基因组

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RNA干扰阻断COX-2基因表达对食管鳞状上皮癌EC109细胞株增生和凋亡的影响

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首都医科大学学报 2008年第3期29卷 295-299页

作者：张莉张澍田于中麟李鹏宗晔许彩民华方圆韩兵社首都医科大学附属北京友谊医院消化科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所国家分子生物学实验室

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA... 详细信息

目的研究COX-2基因与食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的关系,观察阿司匹林对食管鳞癌细胞EC109增生和凋亡的影响,探索基因治疗和药物抑制肿瘤的机制。方法采用RNA干扰的方法,用荧光显微镜观察RNA干扰的转染效率,用Westernblot方法分析RNA干扰的效果,用噻唑兰法定量检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞增生的影响,用流式细胞仪检测RNA干扰和阿司匹林对食管鳞癌细胞凋亡的影响。结果Westernblot方法证实,RNA干扰后EC109细胞COX-2表达下降至对照组的40%。MTT法检测结果显示,用COX-2基因干扰后,EC109细胞生长抑制作用增强,COX-2基因干扰和阿司匹林联合作用后,肿瘤细胞的生长抑制作用进一步增强。流式细胞仪检测结果显示,母本细胞组和RNA干扰的阴性对照组凋亡率较低,COX-2基因干扰后,促凋亡作用增加。COX-2基因干扰后再给予阿司匹林,促凋亡作用进一步增加。结论RNA干扰特异性抑制细胞COX-2蛋白的表达后,抑制食管鳞癌细胞株EC109的生长增生,增强凋亡作用,阿司匹林和RNA干扰对肿瘤细胞的增生和凋亡可产生协同效果。

关键词：食管鳞状上皮癌环氧化酶-2 阿司匹林凋亡 RNA干扰

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