目的制备用于检测血清中针对几种桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片,为针对桃过敏原组分过敏患者的临床诊断提供快速可靠的方法。方法合成6种常见的桃过敏原组分的编码基因,分别将其插入p GAPZαA酵母表达载体,AvrⅡ单酶切线性化后,电转毕赤酵母SMD1168,表达和纯化相应的桃过敏原组分蛋白,并制备蛋白质芯片;用蛋白芯片检测临床血清样本中针对桃过敏原组分蛋白的抗体,与ImmunoCAP法相比,验证蛋白质芯片检测的灵敏度和特异性。结果用酵母表达系统成功表达并纯化了4种桃过敏原组分Pru p 1、Pru p 3、Pru p 4和Pru p 7,制备了能进行质量控制的检测血清桃过敏原组分抗体的蛋白质芯片。检测了疑似桃过敏患者血清41例,结果以ImmunoCAP法为金标准,蛋白芯片检测血清Pru p 1、Pru p 3和Pru p 4抗体的灵敏度分别为40%、100%和100%,特异性为78%、50%和100%;对上述3种组分抗体的综合检测灵敏度为86%,特异性为96%。针对缺乏ImmunoCAP检测结果的Pru p 7抗体,蛋白芯片检测出6份阳性的血清样本,均为桃过敏患者。结论桃过敏原组分检测芯片在灵敏度和特异性方面与ImmunoCAP相当,血清用量少,优化后有望成为临床桃过敏检测的一种新方法。
目的观察CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)及钙联蛋白(CNX)在内侧颞叶癫痫小鼠海马区域中表达的时间和空间分布。方法采用海人酸(KA)诱导内侧颞叶癫痫小鼠模型,免疫印迹和免疫荧光技术检测CHOP和CNX在急性期(12、24 h)小鼠海马CA3区的表达量及分布差异,并与注射PBS的正常小鼠进行对照。结果免疫印迹检测结果显示,KA注射后12 h小鼠海马中的CHOP(F=1.136,P=0.4069)和CNX表达量(F=2.378,P=0.2087)与对照组差异没有统计学意义,KA注射后24 h注射侧海马中的CHOP(F=8.510,P=0.0362)和CNX表达量(F=6.968,P=0.0497)明显高于对照组。免疫荧光结果显示,KA注射后12 h CHOP的表达主要集中于CA3区,注射后24 h在CA1和CA3区表达水平均升高;KA注射后24 h CHOP蛋白(F=24.480,P=0.0057)和CNX蛋白(F=7.149,P=0.0478)的表达量显著高于对照组。结论伴随着癫痫发作的产生,CHOP蛋白表达量上升,提示神经元内质网应激水平不断增加,可能需要更多CNX作为分子伴侣帮助更多未折叠蛋白完成折叠过程。
目的探讨细胞连接相关蛋白在不同发育阶段小鼠睾丸中的表达模式。方法 Western blot检测并分析1~6周龄小鼠睾丸、原代支持细胞以及小鼠精原细胞系GC1 spg、精母细胞系GC2 spg、间质细胞系TM3、支持细胞系TM4等4种生殖相关细胞系中细胞...
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目的探讨细胞连接相关蛋白在不同发育阶段小鼠睾丸中的表达模式。方法 Western blot检测并分析1~6周龄小鼠睾丸、原代支持细胞以及小鼠精原细胞系GC1 spg、精母细胞系GC2 spg、间质细胞系TM3、支持细胞系TM4等4种生殖相关细胞系中细胞连接相关蛋白的表达水平。结果小鼠睾丸曲细精管中支持细胞间细胞连接相关膜蛋白连接黏附分子A、紧密连接蛋白Occludin和Claudin,以及支持细胞-生精细胞间细胞连接相关膜蛋白连接黏附分子C、连接蛋白Nectin-3和钙黏附蛋白E的表达表现出明显的阶段特异性。而参与细胞连接的调节蛋白紧密连接蛋白ZO-1、ZO-2、Afadin、β链蛋白和CD2相关蛋白在睾丸的不同发育阶段以及生殖细胞系中表达无差异。结论小鼠睾丸曲细精管中支持细胞间以及支持细胞-生精细胞间细胞连接相关的膜蛋白多表现出明显的阶段特异性。而参与细胞连接的调节蛋白在睾丸的不同发育阶段中表达无差异。
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