检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2013年第6期35卷 607-610页

作者：吴朝赵阿妮朱丽媛阴彬张靖中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探索Dlx1的天然反义转录物(Dlx1as)在小鼠大脑发育过程中的功能。方法根据生物信息学分析与分子生物学实验验证Dlx1as是否具有多聚腺苷酸尾,采用实时定量PCR检测Dlx1as与Dlx1 mRNA在小鼠大脑发育过程中随时间的变化,利用原位杂交的... 详细信息

目的探索Dlx1的天然反义转录物(Dlx1as)在小鼠大脑发育过程中的功能。方法根据生物信息学分析与分子生物学实验验证Dlx1as是否具有多聚腺苷酸尾,采用实时定量PCR检测Dlx1as与Dlx1 mRNA在小鼠大脑发育过程中随时间的变化,利用原位杂交的技术比较Dlx1as与Dlx1 mRNA空间表达谱。结果 Dlx1as具有多聚腺苷酸尾,在小鼠的胚胎发育过程中,从E14.5到E18.5高表达,与Dlx1 mRNA在各时间点表达水平虽比较接近,但在表达区域存在互补的特点。结论 Dlx1as在小鼠大脑发育过程中有一段时间的高表达,与蛋白编码基因Dlx1 mRNA空间互补,推测其可能是通过调控Dlx1 mRNA来影响小鼠的大脑发育。

关键词： Dlx1as 小鼠大脑发育天然反义转录物原位杂交

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人精子肌动蛋白样蛋白7a蛋白在大肠杆菌系统的表达纯化及多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第5期29卷 507-510页

作者：付俊缪时英宋伟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100005

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金... 详细信息

目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化*** BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂和谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B树脂两次亲和纯化和分子筛分离目的蛋白;以表达的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ACTL7a的多克隆抗体。ELISA检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性,免疫荧光组织化学技术检测ACTL7a在曲精小管细胞的表达。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a(1-70),纯化后免疫新西兰大白兔,成功获得抗血清。血清效价达到1:160000以上,且具有良好的特异性。结论成功构建了ACTL7a基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,经纯化获得高纯度的目的蛋白;制备出兔抗ACTL7a抗体,效价及特异性均良好。

关键词： ACTL7a 原核表达多克隆抗体

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亚硒酸钠通过AMPK/mTOR通路调控白血病NB4细胞凋亡

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基础医学与临床 2013年第3期33卷 297-302页

作者：段婧罗慧史可鉴杨洋许彩民中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京协和医学院北京100005

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及... 详细信息

目的研究亚硒酸钠对白血病NB4细胞中AMPK及其下游靶蛋白对细胞凋亡的调控作用。方法分别用亚硒酸钠、AICAR和AMPK干扰序列处理NB4细胞。用Western blot检测细胞AMPK、mTOR及其下游蛋白P70S6K的磷酸化水平及激活和干扰AMPK后AMPK、mTOR及P70S6K的磷酸化水平、流式细胞术检测NB4细胞凋亡率;免疫共沉淀法检测AMPK和mTOR的相互作用。结果亚硒酸钠可以上调NB4细胞中AMPK的磷酸化水平,下调mTOR及P70S6K的磷酸化水平;AICAR和亚硒酸钠单独处理具有类似的促进NB4细胞凋亡的效果;干扰AMPK后,mTOR及P70S6K的磷酸化水平上升,亚硒酸钠对NB4细胞的促凋亡作用被拮抗;AMPK和mTOR有直接相互作用。结论亚硒酸钠可通过激活AMPK表达,抑制mTOR及P70S6K,促进NB4细胞凋亡。

关键词：亚硒酸钠白血病 AMPK mTOR

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浅谈北京协和医学院基础学院生理学科的建设和生理学教学改革——第37届国际生理科学联合会(IUPS)会议随感

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基础医学与临床 2013年第12期33卷 1511-1515页

作者：张鹏彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

生理学是一门古老又年轻的基础学科。本文从第37届国际生理科学联合会的最新国际生理教学和科研进展中得到启示,引发了对北京协和医学院基础学院生理学教学的一些思考,例如着力培养能力、整合资源、优势互补等。

关键词：生理学教学改革

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长链非编码RNA-TP53TG1在神经胶质瘤细胞中对糖剥夺应激反应的影响

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 680-684页

作者：包雯杨彬夏启胜林细华韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建长链非编码RNA-TP53TG1的真核表达克隆,并探索其在神经胶质瘤中对糖剥夺应激反应的影响。方法用RT-PCR方法从人胶质瘤细胞中扩增出TP53TG1;构建了TP53TG1的全长真核表达克隆;实时定量PCR检测其在U87MG细胞内的表达;同时用低糖(0... 详细信息

目的构建长链非编码RNA-TP53TG1的真核表达克隆,并探索其在神经胶质瘤中对糖剥夺应激反应的影响。方法用RT-PCR方法从人胶质瘤细胞中扩增出TP53TG1;构建了TP53TG1的全长真核表达克隆;实时定量PCR检测其在U87MG细胞内的表达;同时用低糖(0.3 g/L葡萄糖、8 h)处理;real-time PCR检测GRP78、IDH1和PKM2的表达水平。结果成功构建了真核重组表达质粒pCIG-TP53TG1;在转染U87MG细胞36 h后,可见绿色荧光的表达,U87MG细胞中TP53TG1 mRNA升高了2.9×106倍(P<0.05);过表达TP53TG1的同时低糖处理,GRP78和IDH1 mRNA的表达水平显著升高(P<0.05),而PKM2 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05)。结论在U87MG细胞中,TP53TG1可能通过影响GRP78、IDH1和PKM2 mRNA的表达,而参与到对糖剥夺的应激反应过程。

关键词： TP53TG1 U87MG细胞 GRP78 IDH1 PKM2

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肠道病毒71型的全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定

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基础医学与临床 2013年第7期33卷 840-844页

作者：王冠洲叶飞赵阿妮韩为阴彬彭小忠中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克隆并验证感染性。方法用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体。将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT-PCR验证其感染性。随后利... 详细信息

目的构建一株肠道病毒71型的全长cDNA克隆并验证感染性。方法用长片段高保真RT-PCR方法扩增肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的cDNA,装入pBR322载体。将该克隆线性化,体外转录后转染RD细胞后,通过观察CPE及RT-PCR验证其感染性。随后利用空斑法测定拯救病毒的一步生长曲线。结果成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆;体外转录及转染RD细胞60 h后可观察到明显的CPE现象;RT-PCR在转染RD细胞中检测到病毒的存在;成功利用空斑法测定了拯救病毒的一步生长曲线,最大滴度达到2×107pfu/mL。结论成功构建了肠道病毒71型87-2008 Xi'an株的全长cDNA克隆并验证了其感染性,同时测定了拯救病毒的一步生长曲线,与野生型病毒相近。

关键词：肠道病毒71型感染性克隆一步生长曲线

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烟雾染毒下血管平滑肌细胞和内皮细胞中p-c-jun与细胞周期蛋白D1的表达

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中国医学科学院学报 2013年第2期35卷 185-189页

作者：李天佳刘昌伟黄泽彬倪冷来志超吴立飞刘暴中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院血管外科北京100032 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨香烟烟雾对血管壁组织中的两种主要细胞:血管平滑肌细胞和血管内皮细胞增殖活力的影响。方法应用磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂萃取香烟烟雾,制备烟雾萃取剂。用此烟雾萃取剂依据不同浓度对以上两种细胞进行染毒处理,CCK-8试剂盒... 详细信息

目的探讨香烟烟雾对血管壁组织中的两种主要细胞:血管平滑肌细胞和血管内皮细胞增殖活力的影响。方法应用磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂萃取香烟烟雾,制备烟雾萃取剂。用此烟雾萃取剂依据不同浓度对以上两种细胞进行染毒处理,CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,Western blot检测转录因子c-jun、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的变化,转染过表达c-jun质粒检测cyclinD1的变化。结果 CCK-8检测显示在烟雾染毒浓度(0.625%～10%)范围内,平滑肌细胞增殖活力增加,内皮细胞在染毒处理后随浓度增加其活力降低。染毒处理48 h后,平滑肌细胞和内皮细胞的染毒处理组的c-jun表达与PBS对照组相比差异均无统计学意义,平滑肌细胞染毒组的p-c-jun比PBS对照组明显增加(P<0.05),内皮细胞染毒组的p-c-jun降低(P<0.05)。细胞周期蛋白cyclinD1在平滑肌细胞染毒处理后明显增加(P<0.05),内皮细胞染毒后则显著降低(P<0.05),并且过表达c-jun后cyclinD1的表达水平也相应增高。结论烟雾染毒具有增加血管平滑肌细胞增殖活力和降低内皮细胞活力的作用,其与c-jun磷酸化和cyclinD1表达有关。

关键词： c-jun 细胞周期蛋白D1 细胞增殖

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人睾丸组织TRIM69蛋白具有催化多聚泛素链形成的活性

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基础医学与临床 2013年第1期33卷 77-81页

作者：韩永卿李容高晋兰缪时英王琳芳中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的验证人源TRIM69蛋白是否具有催化多聚泛素链形成的活性。方法把人源TRIM69基因构建到原核细胞表达载体中,经过转化、诱导、表达和纯化获得TRIM69纯化蛋白,通过细胞外泛素化实验分析其是否具有催化多聚泛素链形成的活性;另外构建了TR... 详细信息

目的验证人源TRIM69蛋白是否具有催化多聚泛素链形成的活性。方法把人源TRIM69基因构建到原核细胞表达载体中,经过转化、诱导、表达和纯化获得TRIM69纯化蛋白,通过细胞外泛素化实验分析其是否具有催化多聚泛素链形成的活性;另外构建了TRIM69基因的全长、RING结构域的点突变、以及RING结构域截短序列的真核细胞表达载体,瞬时转染293T细胞或稳定表达泛素的HeLa细胞株,通过免疫沉淀结合免疫印迹方法检测其是否具有催化多聚泛素链形成的活性。结果泛素化分析实验表明TRIM69具有催化多聚泛素链形成的活性并且其活性依赖于它的RING结构域。结论成功鉴定了人源TRIM69蛋白具有催化多聚泛素链形成的活性,为进一步证明其是一个新的E3泛素连接酶提供依据。

关键词：精子发生 E3泛素连接酶 TRIM RING finger

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重组表达人载脂蛋白(a)羧基末端kringle结构域抑制新生血管

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基础医学与临床 2013年第6期33卷 655-660页

作者：申乐陈保生薛红中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院麻醉科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础医学院医学分子生物学国家重点实验室生物化学与分子生物学系北京100730

目的利用毕赤酵母重组表达人载脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末端kringle结构域,明确其抑制新生血管和肿瘤细胞增殖的能力。方法分别构建重组表达Apo(a)羧基末端kringleⅤ结构域(RHAKA)与kringleⅣ10型-krin-gleⅤ结构域(RHAKB)的pPICZαA质粒... 详细信息

目的利用毕赤酵母重组表达人载脂蛋白(a)[Apo(a)]羧基末端kringle结构域,明确其抑制新生血管和肿瘤细胞增殖的能力。方法分别构建重组表达Apo(a)羧基末端kringleⅤ结构域(RHAKA)与kringleⅣ10型-krin-gleⅤ结构域(RHAKB)的pPICZαA质粒;转染毕赤酵母X-33分泌表达RHAKA与RHAKB,RHAKs利用***亲和层析纯化,以及反相高效液相色谱与氨基酸残基测序鉴定;明确RHAKs的糖基化及二硫键形成情况后,利用细胞增殖实验与鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测RHAKs对新生血管和肿瘤细胞增殖的影响。结果毕赤酵母可以大量表达RHAKs,并对RHAKs进行翻译后修饰;RHAKA与RHAKB可以抑制血管内皮细胞的增殖和CAM的新生血管,但对肿瘤细胞增殖无直接的抑制作用。结论利用毕赤酵母高效重组表达人Apo(a)羧基末端kringle结构域可以显著抑制新生血管。

关键词：载脂蛋白 kringle结构域毕赤酵母新生血管

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SIRT1在内皮细胞中抑制PMA和ionomycin诱导的ICAM-1的表达

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中国科学：生命科学 2013年第2期43卷 112-118页

作者：贾玉艳高鹏陈厚早万言珍张然张祝琴杨瑞锋王旭徐静刘德培中国医学科学院&北京协和医学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

白细胞在内皮中的富集能够引起炎症并触发动脉粥样硬化,intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)在该过程中发挥了重要作用.本实验室先前研究显示,内皮特异过表达Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1能够抑制动脉粥样硬化.因此,提出这样的假设... 详细信息

白细胞在内皮中的富集能够引起炎症并触发动脉粥样硬化,intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1)在该过程中发挥了重要作用.本实验室先前研究显示,内皮特异过表达Ⅲ类组蛋白去乙酰化酶SIRT1能够抑制动脉粥样硬化.因此,提出这样的假设:SIRT1能够抑制内皮细胞中ICAM-1的表达.实验发现,PMA和ionomycin(PMA/Io)能够在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中明显诱导SIRT1和ICAM-1的表达.而且,腺病毒介导的SIRT1过表达在HUVECs中能显著抑制PMA/Io诱导的ICAM-1的表达,而敲低SIRT1的表达则导致ICAM-1表达上调.双荧光素酶报告基因分析表明,过表达SIRT1抑制基础水平和PMA/Io诱导下的ICAM-1的启动子活性.进一步通过染色质免疫共沉淀(ChIP)实验发现,SIRT1参与转录复合物结合在ICAM-1启动子区,而且SIRT1的干扰能够提高NF-κB的亚基p65结合到ICAM-1启动子区的能力.总之,这些数据提示,SIRT1在内皮细胞中抑制ICAM-1表达的作用可能有助于其对抗动脉粥样硬化的发生.

关键词： SIRT1 ICAM-1 PMA和ionomycin

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